تفاعل البوليميراز المتسلسل المتداخل

يُعد تفاعل البوليميراز المتسلسل المتداخل ( PCR المتداخل ) تعديلاً لتفاعل البوليميراز المتسلسل يهدف إلى تقليل الارتباط غير المحدد في المنتجات نتيجة لتضخيم مواقع ارتباط البادئات غير المتوقعة. ^{[ 1 ]}

تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR ) هو عملية تُستخدم لتضخيم عينات الحمض النووي (DNA ) عبر بوليميراز الحمض النووي المُعتمد على درجة الحرارة . يمكن استخدام نواتج التفاعل في التسلسل أو التحليل، وتُعد هذه العملية جزءًا أساسيًا من العديد من مختبرات أبحاث علم الوراثة ، إلى جانب استخدامها في بصمة الحمض النووي في الطب الشرعي وقضايا الوراثة البشرية الأخرى. يتطلب تفاعل البوليميراز المتسلسل التقليدي (PCR) بادئات مُكملة لنهايات الحمض النووي المستهدف. تزداد كمية ناتج التفاعل مع ازدياد عدد دورات درجة الحرارة التي يتعرض لها التفاعل. من المشاكل الشائعة ارتباط البادئات بمناطق غير صحيحة من الحمض النووي، مما يُنتج نواتج غير متوقعة. تزداد احتمالية حدوث هذه المشكلة مع ازدياد عدد دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل.

تتضمن تفاعلات البوليميراز المتسلسل المتداخلة مجموعتين من البادئات، تُستخدمان في دورتين متتاليتين من تفاعل البوليميراز المتسلسل. تهدف المجموعة الثانية إلى تضخيم هدف ثانوي ضمن ناتج الدورة الأولى. يسمح هذا بالتضخيم لعدد قليل من الدورات في الجولة الأولى، مما يحد من المنتجات غير النوعية. يجب أن تُضخّم مجموعة البادئات المتداخلة الثانية المنتج المقصود فقط من الجولة الأولى، وليس المنتجات غير النوعية. يسمح هذا بإجراء عدد أكبر من الدورات الإجمالية مع تقليل المنتجات غير النوعية إلى أدنى حد. يُعد هذا مفيدًا للقوالب النادرة أو تفاعلات البوليميراز المتسلسل ذات الخلفية العالية.

يخضع الحمض النووي المستهدف للجولة الأولى من تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام المجموعة الأولى من البادئات، الموضحة باللون الأخضر. يؤدي اختيار مواقع ارتباط البادئات البديلة والمتشابهة إلى مجموعة من النواتج، واحد منها فقط يحتوي على التسلسل المطلوب.

يخضع ناتج التفاعل الأول لدورة ثانية باستخدام المجموعة الثانية من البادئات، الموضحة باللون الأحمر. من غير المرجح أن تحتوي أي من نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل غير المرغوب فيها على مواقع ارتباط لكلا البادئتين الجديدتين، مما يضمن أن ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل الثاني يحتوي على نسبة ضئيلة من التلوث بالمنتجات غير المرغوب فيها.