اختبار البذور

• تقييم سريع لقابلية البذور للحياة.
• اكتشف نقاط ضعف البذور قبل أن تصبح واضحة في اختبارات الإنبات.
• تقديم التوجيه في الوقت المناسب في برامج مراقبة الجودة.
• تتطابق نتائج اختبارات TZ والإنبات، عند إجرائها بشكل صحيح، بشكل عام، وتقع ضمن نطاق التباين الطبيعي للعينات. وقد تُعزى الاختلافات التي تتراوح بين 3% و5% إلى خطأ تباين لا مفر منه في العينات. وعادةً ما تكون الاختلافات بين نتائج اختبارات TZ والإنبات أقل في البذور عالية الجودة مقارنةً بالبذور منخفضة الجودة، وفي المحاصيل ذات البذور الكبيرة مقارنةً بالمحاصيل ذات البذور الصغيرة، وفي دفعات البذور المتجانسة مقارنةً بالدفعات غير المتجانسة.

• يتطلب تدريباً وخبرة متخصصين.
• عادةً ما يكون إجراء الاختبار أكثر صعوبة وإرهاقاً من اختبار الإنبات.
• لا تعكس نتائج الاختبار الإصابة الفطرية أو التلف الكيميائي.
• نتائج الاختبارات لا تعكس حالة الخمول.
• هذه الطريقة تدخلية، مما يعني أن البذور المستخدمة في الاختبار يتم تشريحها ولا يمكن استخدامها للإنبات.

اختبار قابلية البقاء (اختبار TZ) هو اختبار لقابلية البقاء يتضمن الخطوات التالية: التكييف المسبق (الامتصاص) ثم التحضير والتلوين (أحيانًا تقطيع البذور ثم نقعها في محلول كلوريد 2،3،5 ثلاثي فينيل تترازوليوم ).

تُنقع البذور في الماء طوال الليل. يمكن ترطيبها مسبقًا، وفي هذه الحالة تُترك البذور لتمتص الماء بين ورق ترشيح مُبلل. ثم تُشق البذور، إما طوليًا أو عرضيًا، باستخدام مشرط بحيث يتعرض الجنين لمحلول كلوريد التترازوليوم. يُستخدم نصف البذرة للاختبار ويُتخلص من النصف الآخر. يتم التلوين بإضافة محلول من كلوريد 2،3،5-ثلاثي فينيل التترازوليوم (ملح) إلى الماء لتكوين محلول عديم اللون. توضع البذور في محلول تركيزه 1% (للبقوليات والأعشاب غير المقسمة)، أو في محلول مخفف تركيزه 0.1% للأعشاب والحبوب المقسمة. عادةً ما يجب إزالة غلاف بذور البقوليات أو تقشيره قبل الفحص. يجب توخي الحذر لمنع كسر الجذور أو أي تلف آخر للبذور.

تقوم إنزيمات نازعة الهيدروجين الموجودة في الأنسجة الحية باختزال كلوريد التترازوليوم إلى فورمازان، وهو مركب أحمر اللون غير قابل للذوبان في الماء. يحدث هذا التفاعل داخل الخلايا الحية أو بالقرب منها، والتي تُطلق الهيدروجين في عمليات التنفس الخلوي. تُفحص جميع البذور تحت المجهر بقوة تكبير تتراوح بين 10 و30 ضعفًا، وذلك حسب حجمها. أما البذور الأكبر حجمًا، مثل بذور البازلاء، فيمكن فحصها يدويًا. يبحث المحللون عن ثلاثة أنواع من الأنسجة: أنسجة سليمة، وأنسجة حية ضعيفة، وأنسجة ميتة. تُنتج الأنسجة السليمة لونًا أحمر طبيعيًا وتقاوم اختراق التترازوليوم. يكون معدل إطلاق الهيدروجين في الأنسجة السليمة بطيئًا مقارنةً بمعدله في الأنسجة الضعيفة جزئيًا. تُنتج الأنسجة الحية الضعيفة لونًا غير طبيعي، حيث فقدت هذه الأنسجة بعضًا من مقاومتها الأولية لاختراق التترازوليوم. يتسارع التنفس الخلوي، وينتج الفورمازان بسرعة. خلال المراحل المبكرة من التلف، تصبح هذه الأنسجة حمراء داكنة (متضررة) بشكل أسرع من الأنسجة السليمة. لا تتصبغ الأنسجة الميتة، وتبقى عادةً بيضاء (أنسجة متقدمة في العمر) لأن توقف التنفس الخلوي يمنع إنتاج الفورمازان.

تُسجّل نتائج اختبار TZ كنسبة مئوية، وتُذكر عادةً في قسم الملاحظات بشهادة تحليل البذور الصادرة عن مختبر البذور. تُذكر البذور الصلبة (إن وُجدت) كنسبة مئوية، وتُضاف إلى النسبة المئوية الإجمالية للبذور القابلة للإنبات. وبغض النظر عن طريقة عرضها، تُعطي نتائج اختبار TZ لقابلية الإنبات تقديرًا لأقصى نسبة مئوية من البذور التي لديها القدرة على إنتاج شتلات طبيعية.