جهاز التدوير الحراري

جهاز التدوير الحراري (المعروف أيضًا باسم جهاز التدوير الحراري ، أو جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل ، أو مُضخِّم الحمض النووي ) هو جهاز مخبري يُستخدم غالبًا لتضخيم أجزاء من الحمض النووي عبر تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). [ 1 ] كما يُمكن استخدام أجهزة التدوير الحراري في المختبرات لتسهيل تفاعلات أخرى حساسة للحرارة، بما في ذلك هضم الإنزيمات المقيدة أو التشخيص السريع. [ 2 ] يحتوي الجهاز على كتلة حرارية بها ثقوب لإدخال أنابيب تحتوي على مخاليط التفاعل. ثم يقوم الجهاز برفع وخفض درجة حرارة الكتلة بخطوات منفصلة مُبرمجة مسبقًا.

تاريخ

بيبي بلو، نموذج أولي لجهاز تدوير حراري آلي تم بناؤه حوالي عام 1986
جهاز تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مبكر جدًا، يستخدم بدلاً من التبديل بين درجات حرارة مختلفة، ثلاثة حمامات مائية مختلفة بدرجات حرارة ثابتة، يتم نقل العينات بينها بواسطة ذراع آلية.

صُممت أجهزة التدوير الحراري الأولى للاستخدام مع جزء كلينو من بوليميراز الحمض النووي الأول . ولأن هذا الإنزيم يتلف خلال كل خطوة تسخين في عملية التضخيم، كان لا بد من إضافة إنزيم جديد في كل دورة. وقد أدى ذلك إلى جهاز معقد يعتمد على ماصة آلية ، مع أنابيب تفاعل مفتوحة. لاحقًا، تم تكييف عملية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لاستخدام بوليميراز الحمض النووي المقاوم للحرارة من بكتيريا ثيرموس أكواتيكوس ، مما بسّط تصميم جهاز التدوير الحراري بشكل كبير. في حين أن بعض الأجهزة القديمة كانت تغمر الكتلة في حمام زيت للتحكم في درجة الحرارة، فإن أجهزة PCR الحديثة تستخدم عادةً عنصر بلتييه . غالبًا ما تحتوي أجهزة التدوير الحراري عالية الجودة على كتل فضية لتحقيق تغييرات سريعة في درجة الحرارة وتوزيعها بشكل موحد في جميع أنحاء الكتلة. تحتوي أجهزة أخرى على كتل متعددة ذات سعة حرارية عالية، تُحفظ كل منها عند درجة حرارة ثابتة، وتُنقل أنابيب التفاعل بينها بواسطة عملية آلية. تم ابتكار أجهزة تدوير حراري مصغرة يتحرك فيها خليط التفاعل عبر قناة تمر بمناطق ساخنة وباردة على شريحة ميكروفلويدية . تحتوي أجهزة التدوير الحراري المصممة لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي على أنظمة بصرية تمكن من مراقبة الفلورة أثناء دورات التفاعل.

الابتكار الحديث

تُجهّز أجهزة التدوير الحراري الحديثة بغطاء مُسخّن يضغط على أغطية أنابيب التفاعل، مما يمنع تكثف الماء من مخاليط التفاعل على السطح الداخلي للأغطية. تقليديًا، كانت تُستخدم طبقة من الزيت المعدني لهذا الغرض. بعض أجهزة التدوير الحراري مُجهّزة بغطاء مُسخّن قابل للتعديل بالكامل ليتناسب مع أنواع مختلفة من أدوات تفاعل البوليميراز المتسلسل البلاستيكية (PCR). [ 3 ]

تُجهّز بعض أجهزة التدوير الحراري بوحدات متعددة تسمح بإجراء عدة تفاعلات PCR مختلفة في وقت واحد. كما تحتوي بعض الطرازات على وظيفة تدرج حراري لتوفير درجات حرارة مختلفة في أجزاء مختلفة من الوحدة. يُعدّ هذا مفيدًا بشكل خاص عند اختبار درجات حرارة التلدين المناسبة لبادئات تفاعل PCR .

يُظهر الفيديو آلية عمل ثلاثة أجهزة تدوير حراري متوفرة تجاريًا. يستخدم الجهاز الأول عنصر بلتييه، وهو جهاز إيبندورف ماسترسايكلر® X50s [ 4 ] ، ويُعدّ من أكثر أجهزة التدوير الحراري استخدامًا في السوق. أما الجهاز الثاني، فيستخدم سخانًا مقاومًا، وهو جهاز miniPCR mini 16x QP-1000-16 [ 5 ] . بينما يستخدم الجهاز الثالث عنصر تسخين مقاومًا، ولا يحتوي على كتلة لحفظ العينات، على عكس التقنيات الأخرى، حيث توضع العينات في دوّار - EP EP2687294A1 ، كوينتل، "دوّار لجهاز التدوير الحراري"، نُشر في 22 يناير 2022 ، وهو جهاز  Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM (CA) [ 6 ] .

يعتمد على تقنية بلتييهعنصر التسخين المقاومحجرة الهواء
الآلات المتوفرة تجارياًEppendorff Mastercycler X50s [ 7 ]miniPCR mini 16x QP-1000-16 [ 8 ]Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM (CA) [ 9 ]
العناصر الحراريةعنصر بلتييهالتسخين المقاومالتسخين المقاوم
سخان الغطاءنعملالا
معدل التسخينأقل من 10 درجة مئوية/ثانيةأقل من 4 درجات مئوية/ثانية>15 درجة مئوية/ثانية
معدل التبريدأقل من 5 درجات مئوية/سنأقل من 2.5 درجة مئوية/ثانية>20 درجة مئوية/ثانية
درجة حرارة متدرجةنعملالا
تجانس درجة الحرارة0.15 درجة مئوية0.5 درجة مئوية0.02 درجة مئوية
استهلاك الطاقة<850 واط<72 واط<520 واط

مراجع

  1. وير، هـ. يو.؛ غراي، ج. و. (يوليو-أغسطس 1988). "نظام قابل للبرمجة لإجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل". الحمض النووي (ماري آن ليبرت، إنك.) . 7 (6): 441-447 . PMID 3203600 . 
  2. هيغينز، جيمس أ.؛ نصرابادي، شانافاز؛ كارنز، جيفري س.؛ شيلتون، دانيال ر.؛ كوبر، ماري؛ غباكيما، أياه؛ كوبمان، رونالد ب. (1 أغسطس 2003). "جهاز تدوير حراري محمول باليد للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية في الوقت الحقيقي". أجهزة الاستشعار الحيوية والإلكترونيات الحيوية . 18 (9): 1115-1123 . doi : 10.1016/S0956-5663(02)00252-X .
  3. "أكثر أجهزة التدوير الحراري تطوراً حتى الآن - تعرف على المزيد" . تعرف على المزيد . 29-09-2014 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 31-05-2017 .
  4. "Mastercycler® X50 - جهاز التدوير الحراري لتفاعل البوليميراز المتسلسل" . www.eppendorf.com . تاريخ الاسترجاع: 27-11-2024 .
  5. "التحقق من البوت" . www.minipcr.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 27-11-2024 .{{cite web}}يستخدم Cite عنوانًا عامًا ( مساعدة )
  6. "Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM (CA)" . www.qiagen.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 27-11-2024 .
  7. "Mastercycler® X50 - جهاز التدوير الحراري لتفاعل البوليميراز المتسلسل" . www.eppendorf.com . تاريخ الاسترجاع: 27-11-2024 .
  8. "التحقق من البوت" . www.minipcr.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 27-11-2024 .{{cite web}}يستخدم Cite عنوانًا عامًا ( مساعدة )
  9. "Rotor-Gene Q MDx 5plex HRM (CA)" . www.qiagen.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 27-11-2024 .
  • OpenPCR ، جهاز تدوير حراري مفتوح المصدر لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).