أجار مستخلص الخميرة بالفحم المخفف

يُعدّ وسط أجار مستخلص الخميرة بالفحم المُخفَّف (BCYE) وسطًا انتقائيًا لنمو أنواع معينة من البكتيريا ، وخاصةً بكتيريا الليجيونيلا الرئوية سالبة الغرام . ^{[ 1 ]} كما يُستخدم أيضًا في التشخيص المختبري لالتهاب القرنية بالأكانثاميبا ، ^{[ 2 ]} وأنواع الفرانسيسيلا والنوكارديا . يحتوي هذا الوسط على حمض أميني من نوع L-سيستين وبيروفوسفات الحديديك، مما يُساعد على نمو أنواع الليجيونيلا. يعمل الفحم الموجود في الوسط كمزيل للسموم لأنه يُحلل بيروكسيد الهيدروجين السام لليجيونيلا. يُعدّ مستخلص الخميرة في وسط BCYE مصدرًا غنيًا بالعناصر الغذائية (الفيتامينات والنيتروجين والكربون) التي تعتمد عليها البكتيريا في نموها. يحتوي وسط BCYE أيضًا على مُخفِّف ACES الذي يُحافظ على مستوى الأس الهيدروجيني الأمثل لنمو البكتيريا، والذي يبلغ حوالي 6.9. ^{[ 3 ]} يمكن إضافة المضادات الحيوية إلى BCYE لاختيار الليجيونيلا، خاصة إذا كان يتم فحص عينة بيئية أو عينة مياه غير صالحة للشرب.

* يجب حفظ بيروفوسفات الحديديك (القابل للذوبان) في مكان جاف ومظلم.

من إرشادات مختبر مركز السيطرة على الأمراض والوقاية منها بشأن الليجيونيلا : ^{[ 5 ]}

1. أضف محلول ACES إلى 940 مل من الماء المقطر وقم بإذابته في  حمام مائي عند درجة حرارة 50 درجة مئوية.
2. أضف ببطء كمية كافية من محلول هيدروكسيد البوتاسيوم بتركيز 1.0 مولار (حوالي 40 مل) إلى المحلول المنظم لرفع الرقم الهيدروجيني إلى 6.9، ثم اخلط المكونات. (لا تستخدم هيدروكسيد الصوديوم لأنه ثبت أنه يثبط نمو بكتيريا الليجيونيلا الرئوية ).
3. في قارورة ثانية، أضف الفحم ومستخلص الخميرة وألفا كيتو غلوتارات والأجار. اخلط المساحيق الجافة.
4. صب محلول التخزين المؤقت في القارورة الثانية التي تحتوي على المساحيق الجافة واخلطها.
5. قم بتسخينه بعناية لإذابة الأجار، ثم قم بتعقيمه عن طريق التعقيم بالبخار عند درجة حرارة 121  درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
6. ضع الوسط فوراً في  حمام مائي بدرجة حرارة 50 درجة مئوية.
7. لتحضير وسط غذائي كامل، أضف محلول السيستين المُرشَّح عبر غشاء ببطء إلى الوسط واخلطه جيداً. يجب تحضير السيستين كمحلول طازج.
8. أضف ببطء بيروفوسفات الحديديك القابل للذوبان والمُرشَّح عبر غشاء، واخلط جيدًا. لا تخلط الحديد والسيستين قبل إضافتهما إلى الوسط لأن السيستين عامل مُخلِّب.
9. اضبط درجة حموضة الوسط إلى 6.9 عند درجة حرارة الغرفة. نظرًا لاختلاف الكواشف، يجب على كل مختبر تحديد كمية هيدروكسيد البوتاسيوم المطلوبة. ضع الوسط المُجهز عند 50  درجة مئوية، واسكب عينة بحجم 10 مل، وتحقق من درجة الحموضة عند درجة حرارة الغرفة. عند الضرورة، اضبط الوسط المُجهز باستخدام هيدروكسيد البوتاسيوم بتركيز 1.0 مولار أو حمض الهيدروكلوريك بتركيز 1.0 مولار. لاحظ أن قيمة pKa لمحلول ACES المنظم هي 6.9 عند 20  درجة مئوية و6.8 عند 25  درجة مئوية. تتأثر قيمة pKa بدرجة الحرارة (0.02 وحدة حموضة/درجة مئوية). مع ذلك، بمجرد تصلب الآجار، لا يبدو أن درجة الحموضة تتغير مع درجة الحرارة، بل تبقى عند 6.9.
10. لتحضير محلول BCYE + المضادات الحيوية، أضف المضادات الحيوية التي تم ترشيحها عبر الغشاء واخلطها.
11. بالنسبة لوسط BCYE + أجار الألبومين، قم بإذابة الألبومين في الماء المقطر وقم بترشيحه وتعقيمه قبل إضافته إلى الوسط.
12. قم بتوزيع 20 مل لكل طبق بتري مقاس 15 × 100 مم.

يجب تقليب الوسط باستمرار أثناء الصب للحفاظ على جزيئات الفحم معلقة. بعد تصلب الوسط، تُحفظ الأطباق في أكياس بلاستيكية في الثلاجة في مكان مظلم. تبقى الأطباق المُجهزة صالحة لمدة أربعة أشهر تقريبًا، شريطة اجتيازها فحص الجودة. ^{[ 5 ]}

تتحول بكتيريا الليجيونيلا ، ذات السطح الأملس واللون الشفاف أو الأزرق أو الرمادي، إلى اللون الأبيض وتصبح خيطية الشكل مع مرور الوقت، وتظهر باللونين الأخضر والأصفر المتوهجين تحت الأشعة فوق البنفسجية. عادةً ما يكون سطح المستعمرة أملسًا، ولكن قد يبدو عند فحصه تحت المجهر وكأنه يحتوي على سلالات تُعطيه مظهرًا يشبه البيض المقلي. ^{[ 3 ]}

يجب تخزين أطباق BCYE في مكان مظلم عند درجات حرارة تتراوح بين 2 و8 درجات مئوية. يجب عدم تجميد الأطباق أو تعريضها لدرجات حرارة عالية؛ ويجب تقليل تعرضها للضوء إلى أدنى حد. لا ينبغي فتح أطباق BCYE، وكذلك معظم أوساط النمو، إلا عند استخدامها، ويجب أن تكون في درجة حرارة الغرفة قبل تلقيح أي شيء عليها. ^{[ 6 ]}