اختبار التراص الدموي

تم تطوير اختبار التراص الدموي (HA) واختبار تثبيط التراص الدموي (HI أو HAI) في عامي 1941-1942 من قبل عالم الفيروسات الأمريكي جورج هيرست كطرق لتحديد التركيز النسبي للفيروسات أو البكتيريا أو الأجسام المضادة . ^{[ 1 ]}

تعتمد اختبارات التراص الدموي (HA) واختبارات تثبيط التراص الدموي (HAI) على عملية التراص الدموي ، حيث ترتبط مستقبلات حمض السياليك الموجودة على سطح خلايا الدم الحمراء ببروتين الهيماغلوتينين السكري الموجود على سطح فيروس الإنفلونزا (وعدد من الفيروسات الأخرى)، مما يُنشئ شبكة من خلايا الدم الحمراء وجزيئات الفيروس المترابطة. ^{[ 2 ]} تحافظ هذه الشبكة المتراصة على خلايا الدم الحمراء معلقة، وتظهر عادةً كمحلول أحمر منتشر. يعتمد تكوين هذه الشبكة على تركيز الفيروس وخلايا الدم الحمراء، فعندما يكون تركيز الفيروس منخفضًا جدًا، لا تُقيّد الشبكة خلايا الدم الحمراء وتترسب في قاع البئر. يُلاحظ التراص الدموي في وجود المكورات العنقودية، والضمات، وأنواع بكتيرية أخرى، على غرار الآلية التي تستخدمها الفيروسات لإحداث تراص كريات الدم الحمراء. ^{[ 3 ] [ 4 ]} عادةً ما تكون خلايا الدم الحمراء المستخدمة في فحوصات HA وHI من الدجاج أو الديك الرومي أو الخيول أو خنازير غينيا أو البشر اعتمادًا على انتقائية الفيروس أو البكتيريا المستهدفة والمستقبلات السطحية المرتبطة بها على خلايا الدم الحمراء.

الإجراء العام لاختبار التراص الدموي (HA) هو كالتالي: يتم تحضير تخفيفات متسلسلة للفيروس عبر صفوف صفيحة ميكروية ذات 96 بئراً، ذات قاع على شكل حرف U أو V. ^{[ 5 ]} عادةً ما تُخفف العينة الأكثر تركيزاً في البئر الأول إلى 1/5 من تركيز المحلول الأصلي، بينما تُخفف الآبار اللاحقة عادةً بمقدار الضعف (1/10، 1/20، 1/40، إلخ). يُستخدم البئر الأخير كعينة تحكم سلبية خالية من الفيروس. يحتوي كل صف من الصفيحة عادةً على فيروس مختلف، مع اتباع نفس نمط التخفيفات. بعد التخفيفات المتسلسلة، تُضاف كمية موحدة التركيز من كريات الدم الحمراء إلى كل بئر، وتُخلط برفق. تُحضن الصفيحة لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. بعد فترة التحضين، يمكن تحليل الاختبار للتمييز بين الآبار التي ظهرت فيها التراصات والآبار التي لم تظهر فيها. عادةً ما تتدرج الصور في الصف الواحد من الآبار المتراصة ذات التركيز العالي للفيروس والمظهر الأحمر المنتشر إلى سلسلة من الآبار ذات التركيز المنخفض للفيروس والتي تحتوي على كريات حمراء داكنة، أو ما يُعرف بالزر، في مركز البئر. تبدو الآبار ذات التركيز المنخفض مطابقة تقريبًا لبئر التحكم السلبي الخالي من الفيروس. يظهر الزر نتيجة عدم احتفاظ كريات الدم الحمراء بالبنية الشبكية المتراصة، فتستقر في أدنى نقطة من قاع البئر ذي الشكل U أو V. ويحدث الانتقال من الآبار المتراصة إلى غير المتراصة بشكل واضح، خلال بئر أو بئرين.

يُحدد التركيز النسبي، أو العيار ، لعينة الفيروس بناءً على البئر الذي ظهر فيه التراص الأخير، مباشرةً قبل ظهور الراسب. ^{[ 6 ]} وبالنسبة لتركيز المحلول الفيروسي الأولي، يكون تركيز الفيروس في هذا البئر مخففًا بنسبة معينة من المحلول الأصلي، على سبيل المثال، 1/40. قيمة عيار تلك العينة هي مقلوب التخفيف، أي 40. في بعض الحالات، يكون الفيروس مخففًا جدًا في البداية لدرجة أنه لا تُلاحظ آبار التراص. في هذه الحالة، يُحدد عيار هذه العينات عادةً بـ 5، مما يشير إلى أعلى تركيز ممكن، ولكن دقة هذه القيمة منخفضة بشكل واضح. أما إذا كان التركيز النسبي للفيروس مرتفعًا للغاية ولم تتحول الآبار إلى شكل الزر، فعادةً ما تُحدد قيمة العيار بأعلى تخفيف، مثل 5120.

يُعد اختبار تثبيط التراص الدموي (HI) وثيق الصلة باختبار التراص الدموي (HA)، ولكنه يتضمن استخدام الأجسام المضادة للفيروسات كمثبطات للتداخل مع تفاعل الفيروس مع كريات الدم الحمراء. والهدف منه هو تحديد تركيز الأجسام المضادة في المصل المضاد أو في عينات أخرى تحتوي على أجسام مضادة. ^{[ 7 ]} يُجرى اختبار HI عادةً عن طريق تحضير سلسلة تخفيف من المصل المضاد عبر صفوف صفيحة ميكروية ذات 96 بئرًا. يمثل كل صف عادةً عينة مختلفة. تُضاف كمية موحدة من الفيروس أو البكتيريا إلى كل بئر، ويُترك المزيج ليُحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة. يُمثل البئر الأخير في كل صف عينة تحكم سلبية بدون إضافة أي فيروس. خلال فترة التحضين، ترتبط الأجسام المضادة بجزيئات الفيروس، وإذا كان تركيز الأجسام المضادة وقوة ارتباطها كافيين، تُمنع جزيئات الفيروس بشكل فعال من التسبب في التراص الدموي. ^{[ 8 ]} بعد ذلك، تُضاف كمية موحدة من كريات الدم الحمراء إلى كل بئر وتُترك لتُحضن في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة إضافية. تتطور صور لوحة HI الناتجة عادةً من آبار غير متراصة، تشبه "الأزرار"، ذات تركيز عالٍ من الأجسام المضادة، إلى آبار متراصة، حمراء اللون ومنتشرة، ذات تركيز منخفض من الأجسام المضادة. قيمة معايرة HI هي مقلوب آخر تخفيف للمصل الذي أدى إلى تثبيط التراص الدموي تمامًا. ^{[ 9 ]}

تُعدّ الأوصاف السابقة لعمليتي HA وHI عامة، وقد تختلف التفاصيل الدقيقة باختلاف المُشغّل والمختبر. على سبيل المثال، وُصفت التخفيفات التسلسلية عبر الصفوف، لكن بعض المختبرات تستخدم اتجاهًا بديلًا وتُجري التخفيفات عموديًا على الأعمدة. وبالمثل، قد يختلف التخفيف الأولي، ومعامل التخفيف التسلسلي، وأوقات الحضانة، واختيار لوحة ذات قاع على شكل حرف U أو V، باختلاف المختبر.

تتميز اختبارات HA وHI ببساطتها، واستخدامها لأجهزة ومستلزمات متوفرة وبأسعار معقولة، وظهور نتائجها في غضون ساعات قليلة. كما أنها راسخة في العديد من المختبرات حول العالم، مما يمنحها قدراً من المصداقية وإمكانية المقارنة والتوحيد القياسي. ^{[ 10 ] [ 11 ]}

تتطلب النتائج المثلى والموثوقة التحكم في عدة متغيرات، مثل فترات الحضانة، وتركيز خلايا الدم الحمراء، ونوعها. ^{[ 12 ]} قد تؤدي العوامل غير النوعية في العينة إلى تداخلات وقيم معايرة غير صحيحة. على سبيل المثال، يمكن لجزيئات أخرى في العينة، غير الأجسام المضادة النوعية للفيروس، أن تثبط التراص بين الفيروس وخلايا الدم الحمراء، فضلاً عن احتمال منع الأجسام المضادة من الارتباط بالفيروس. تُستخدم إنزيمات تدمير المستقبلات (RDE) عادةً لمعالجة العينات قبل التحليل لمنع التثبيط غير النوعي. ^{[ 13 ]} يعتمد تحليل نتائج التراص الدموي (HA) أو تثبيط التراص الدموي (HI) على شخص مؤهل لقراءة اللوحة وتحديد قيم المعايرة. تزيد طريقة التفسير اليدوي من احتمالية حدوث اختلافات في الفحص، لأن النتائج قد تكون ذاتية، كما أن الاتفاق بين القراء البشريين غير متسق. ^{[ 14 ]} إضافةً إلى ذلك، لا يوجد سجل رقمي للوحة أو تحديدات المعايرة، لذا فإن التفسير الأولي شاق ويُجرى عادةً على شكل تكرارات. إن نطاق المتغيرات المحتملة والاختلافات بين القراء الخبراء قد تجعل مقارنة نتائج المختبرات المختلفة أمراً صعباً. ^{[ 15 ]}

• التراص الدموي
• تحديد كمية الفيروس