تفاعل سلسلة الليغاز

تفاعل سلسلة الليغاز ( LCR ) هو طريقة لتضخيم الحمض النووي . يختلف تفاعل سلسلة الليغاز (LCR) عن تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في أنه يستخدم ليغازًا مقاومًا للحرارة لربط مجسين أو جزيئين آخرين معًا، ثم يتم تضخيمهما باستخدام دورات PCR القياسية. ^{[ 1 ]} ينتج عن كل دورة مضاعفة جزيء الحمض النووي المستهدف. من أهم مزايا LCR دقته العالية مقارنةً بـ PCR. ^{[ 2 ]} لذا، يتطلب LCR إنزيمين مختلفين تمامًا ليعمل بشكل صحيح: الليغاز، لربط جزيئات المجس معًا، وبوليميراز مقاوم للحرارة ( مثل بوليميراز Taq ) لتضخيم الجزيئات المشاركة في الربط الناجح. تُصمم المجسات المشاركة في الربط بحيث يكون الطرف 5′ لأحد المجسات مجاورًا مباشرةً للطرف 3′ للمجس الآخر، مما يوفر ركائز مجموعتي 3′-OH و5′-PO4 اللازمة _لليغاز .

طُوِّرت تقنية LCR في الأصل للكشف عن الطفرات النقطية ؛ إذ يكفي وجود اختلاف في قاعدة واحدة عند نقطة اتصال جزيئي المجس لمنع عملية الربط. وبإجراء الربط مباشرةً عند درجة انصهار _مجس الأوليغونوكليوتيد، لا يُسمح إلا بالثنائيات المتطابقة تمامًا بين البادئ والقالب. كما يمكن استخدام LCR لتضخيم جزيئات القالب التي تم ربطها بنجاح، وذلك لتقييم كفاءة الربط وإنتاج كمية كبيرة من الناتج بدقة أعلى من تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). لذا، فإن LCR ليست بالضرورة بديلاً عن PCR، بل هي مكمل له.

وقد تم استخدامه على نطاق واسع للكشف عن الطفرات أحادية القاعدة، كما هو الحال في بعض الأمراض الوراثية . ^{[ 1 ]}

يمكن استخدام تقنيتي LCR وPCR للكشف عن السيلان والكلاميديا ، ويمكن إجراؤهما على عينات البول الأولى ، مما يسهل جمعها ويؤدي إلى الحصول على كمية كبيرة من الكائنات الحية. تحدّ المثبطات الداخلية من حساسية هذه التقنية ، ولكن إذا أمكن التخلص من هذا التأثير، فإن تقنيتي LCR وPCR ستتفوقان سريريًا على أي طريقة أخرى لتشخيص السيلان والكلاميديا. ^{[ 3 ]} ومن بين هذه الطرق، تبرز تقنية LCR كأكثر الطرق حساسيةً وخصوصيةً للكشف عن تعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة (SNP) المعروفة (20). طُوّرت تقنية LCR لأول مرة عام 1989 من قبل عدة مجموعات بحثية، ^{[ 4 ]} حيث استخدموا إنزيم ربط الحمض النووي المقاوم للحرارة للتمييز بين الحمض النووي الطبيعي والطافر، ولتضخيم الناتج الخاص بالأليل. ويمنع عدم التطابق في الطرف 3′ من البادئ المُميّز إنزيم ربط الحمض النووي من ربط القطعتين معًا. باستخدام كلا شريطي الحمض النووي الجينومي كأهداف لتهجين الأوليغونوكليوتيدات، يمكن أن تصبح النواتج الناتجة عن مجموعتين من بادئات الأوليغونوكليوتيدات المتجاورة، والمكملة لكل شريط مستهدف في جولة واحدة من الربط، أهدافًا للجولة التالية. وبالتالي، يمكن زيادة كمية النواتج بشكل كبير من خلال التدوير الحراري المتكرر. ^{[ 1 ]}

• تضخيم الجينات

• ووكر، جيه إم، ورابلي، آر. (2005). دليل الأساليب الحيوية الطبية. توتوا، نيوجيرسي: دار هومانا للنشر. ISBN 978-1-59259-870-0