فرز الخلايا

📅 آخر تحديث: ١ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ١ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 2 صور
الموسوعة الحرة

فرز الخلايا هو عملية يتم من خلالها فصل نوع معين من الخلايا عن الأنواع الأخرى الموجودة في عينة ما، وذلك بناءً على خصائصها الفيزيائية أو البيولوجية، مثل الحجم، والمعايير المورفولوجية، والحيوية، والتعبير البروتيني داخل وخارج الخلية. ويمكن استخدام مجموعة الخلايا المتجانسة الناتجة عن الفرز في تطبيقات متنوعة، تشمل البحث والتشخيص والعلاج. [ 1 ]

طُرق

تنقسم طرق فرز الخلايا إلى فئتين رئيسيتين: فرز الخلايا المنشط بالفلورة (FACS) وفرز الخلايا المناعي المغناطيسي. [ 2 ] ونظرًا لسنوات عديدة من التطوير والطلب المتزايد على فصل الخلايا، يعمل الباحثون على تطوير أجهزة فرز ميكروفلويدية تتميز بالعديد من المزايا مقارنةً بالأنواع الرئيسية لطرق فرز الخلايا المنشط بالفلورة وفرز الخلايا المناعي المغناطيسي.

مُنشَّط بالفلورة

الرسم التخطيطي أ: فرز الخلايا بمساعدة التألق للاختيار السلبي.

يُعرف فرز الخلايا المنشط بالفلورة أيضًا باسم فرز الخلايا بالتدفق الخلوي، أو اختصارًا FACS، وهي علامة تجارية مسجلة لشركة بيكتون ديكنسون . يستخدم فرز الخلايا المنشط بالفلورة تقنية التدفق الخلوي لفصل الخلايا بناءً على خصائصها المورفولوجية وتعبيرها عن العديد من البروتينات خارج الخلوية وداخل الخلوية. تتيح هذه الطريقة فرز الخلايا وفقًا لمعايير متعددة، وتتضمن تغليف الخلايا في قطرات سائلة صغيرة تُشحن بشكل انتقائي بشحنات كهربائية، ثم تُفرز بواسطة مجال كهربائي خارجي . يحتوي فرز الخلايا المنشط بالفلورة على عدة أنظمة تعمل معًا لتحقيق فرز ناجح للخلايا المستهدفة، وتشمل هذه الأنظمة أنظمة مائعية وبصرية وكهروستاتيكية. يجب أن يُحدث النظام المائع انفصالًا دقيقًا ومُوقّتًا عن تيار السائل على شكل قطرات صغيرة متجانسة، بحيث يمكن بعد ذلك توجيه القطرات التي تحتوي على خلايا منفردة كهربائيًا [ 2 ]. استنادًا إلى اختراع ريتشارد سويت [ 3 ] ، يتم تثبيت تكوين قطرات تيار السائل في جهاز فرز الخلايا بواسطة اهتزازات محول طاقة فوق صوتي عند مخرج فتحة الفوهة. تتزايد هذه الاضطرابات بشكل أُسّي، مما يؤدي إلى تفتيت التيار إلى قطرات بتوقيت دقيق. تُقاس الخلية المراد فرزها في منطقة الاستشعار، ثم تتحرك مع التيار إلى نقطة الانفصال. أثناء فصل القطرة التي تحتوي على الخلية عن تيار السائل السليم، تُطبَّق نبضة جهد كهربائي على تيار السائل، بحيث يمكن توجيه القطرات التي تحتوي على الخلايا المراد فرزها في مجال كهربائي بين لوحتي توجيه. بعد ذلك، تُجمع القطرات بواسطة أنابيب أو أوعية تجميع موضوعة أسفل لوحتي التوجيه. [ ٢ ] يوفر فرز الخلايا بتقنية قياس التدفق الخلوي دقة عالية جدًا وفقًا لواحد أو أكثر من المؤشرات السطحية، ولكن أحد القيود يتمثل في عدد الخلايا التي يمكن معالجتها خلال يوم عمل واحد. لهذا السبب، يُلجأ غالبًا إلى الإثراء المسبق لمجموعة الخلايا المستهدفة عن طريق الفرز المناعي المغناطيسي، خاصةً عندما تكون الخلايا المستهدفة نادرة نسبيًا ويتطلب الأمر معالجة كمية كبيرة منها. علاوة على ذلك، تُعد أجهزة فرز الخلايا بتقنية قياس التدفق الخلوي أدوات معقدة لا يستخدمها عادةً إلا موظفون مدربون تدريبًا جيدًا في مرافق قياس التدفق الخلوي أو المختبرات المجهزة تجهيزًا جيدًا، ونظرًا لكبر حجمها عادةً، فليس من الممكن دائمًا وضعها داخل خزانة السلامة البيولوجية.لذا، لا يمكن دائمًا ضمان تعقيم العينات، ونظرًا لإمكانية تنظيف أنظمة السوائل ولكنها ليست للاستخدام لمرة واحدة، فهناك احتمال للتلوث المتبادل بين العينات. ومن الجوانب الأخرى التي يجب مراعاتها أن تكوّن القطرات داخل الجهاز قد يؤدي إلى تكوين رذاذ يشكل خطرًا على المشغل عند استخدام عينات معدية. وتكتسب هذه الاعتبارات الأخيرة أهمية خاصة عند استخدام فرز الخلايا في التطبيقات السريرية، مثل العلاج الخلوي، ويجب إجراؤها وفقًا لممارسات التصنيع الجيدة (GMP). يمكن للباحثين استخدام مجموعة متنوعة من الأصباغ الفلورية لتصميم لوحات متعددة الألوان لتحقيق فرز ناجح ومتزامن لأنواع متعددة من الخلايا محددة بدقة. يوضح الرسم التخطيطي (أ) فرز الخلايا المنشط بالفلورة لاختيار الخلايا السلبية (المجموعة غير المرغوب فيها)، بينما يوضح الرسم التخطيطي (ب) فرز الخلايا المنشط بالفلورة لاختيار الخلايا الإيجابية (المجموعة المرغوبة).

الرسم التخطيطي ب: فرز الخلايا بمساعدة التألق للاختيار الإيجابي.

الأصباغ الفلورية في فرز الخلايا

تتنوع آليات عمل الأصباغ الفلورية بشكل كبير. عمومًا، يُثار الصبغ الفلوري بواسطة مصدر ضوئي (ليزر) عند طول موجي محدد، فيُصدر ضوءًا بطاقة أقل وطول موجي أطول. تعمل معظم الأصباغ الشائعة عن طريق الارتباط بالمستضدات الموجودة على سطح الخلايا. ومن المستضدات الشائعة المستهدفة تجمعات التمايز (CDs). [ 4 ] هذه التجمعات خاصة بنوع معين من الخلايا. إذا تمكنت من تحديد تجمع التمايز الموجود على الخلايا التي تهمك، فيمكنك حينها تلوين العينة بصبغة فلورية خاصة به، واستخدام فرز الخلايا المنشط بالفلورة لفصل المجموعة الخلوية المطلوبة. مع ذلك، توجد آليات أخرى عديدة تعمل بها الأصباغ الفلورية.

تتميز بعض الأصباغ بقدرتها على الانتشار عبر الأغشية الخلوية. وباستغلال هذه الخاصية، يمكن للمستخدمين تحديد خصائص النشاط داخل الخلايا، بالإضافة إلى التعبير السطحي للبروتينات. فعلى سبيل المثال، في الخلايا الميتة، يستطيع بروبيديوم يوديد (PI) اختراق النواة حيث يرتبط بالحمض النووي (DNA). ويمكن استخدام الإشارة الفلورية لـ PI لتحديد كمية الحمض النووي لتحليل دورة الخلية، أو لتحديد الخلايا الميتة في العينة.

يمكن استخدام بعض الأصباغ الفلورية لتوصيف النشاط الحركي داخل الخلايا بدلاً من تثبيت الخلايا بالفورمالديهايد وفقدان الخلايا الحية. يوضح الجدول أدناه الأصباغ التي يمكن استخدامها لقياس العديد من معايير السمية الخلوية الناتجة عن الإجهاد التأكسدي .

صبغالمعلمةآلية العملالإثارة/الانبعاث
DCFH-DAأنواع الأكسجين التفاعلية

(ROS)

منزوع الأسيتيل إلى

2'7' ثنائي كلوروفلوريسين الذي يتفاعل مع أنواع الأكسجين التفاعلية في ظل ظروف جذرية إلى 2'7 ثنائي كلوروفلوريسين (DCF)

488  نانومتر/525  نانومتر
Rh123جهد غشاء الميتوكوندريا

(MMP)

يتم عزلها بواسطة الميتوكوندريا النشطة488  نانومتر/525  نانومتر
إندو-1 صباحًامستويات الكالسيومينبعث منه ضوء بطولين موجيين مختلفين اعتمادًا على وجود أيونات الكالسيوم350  نانومتر/[400  نانومتر/485  نانومتر]
بايحي/ميتلا يخترق إلا الخلايا الميتة ويرتبط بالحمض النووي488  نانومتر/675  نانومتر

يُعد هذا الإعداد التجريبي مجرد مثال واحد على إمكانيات قياس التدفق الخلوي. ففي أنظمة FACS، يمكن فرز هذه الخلايا المُوصَّفة وتنقيها لإجراء المزيد من التجارب.

فرز الخلايا المناعي المغناطيسي

ماك

يُعرف فرز الخلايا المناعي المغناطيسي أيضًا باسم فصل الخلايا المناعي المغناطيسي، أو إثراء الخلايا المناعي المغناطيسي، أو فرز الخلايا المنشط مغناطيسيًا ، ويُعرف اختصارًا باسم MACS، وهو علامة تجارية مسجلة لشركة Miltenyi GmbH . يعتمد فرز الخلايا المناعي المغناطيسي على فصل الخرزات التي تمر عبر مجال مغناطيسي. تقدم العديد من الشركات حلولًا مختلفة لإثراء أو استنزاف مجموعات الخلايا. يوفر فرز الخلايا المناعي المغناطيسي طريقة لإثراء خليط غير متجانس من الخلايا بناءً على تعبير البروتينات على سطح الخلية (المستضدات). تعتمد هذه التقنية على ربط جزيئات صغيرة خاملة فائقة المغناطيسية بأجسام مضادة أحادية النسيلة (mAbs) خاصة بالمستضدات الموجودة على مجموعة الخلايا المستهدفة. ثم تُفصل الخلايا الموسومة بهذه الأجسام المضادة المرتبطة بالخرزات عبر عمود يحتوي على مصفوفة مغناطيسية حديدية. بتطبيق مجال مغناطيسي على المصفوفة، تلتصق الخرزات بالمصفوفة داخل العمود، مما يمنع الخلايا الحاملة للخرزات من المرور. يمكن للخلايا غير الموسومة أن تمر عبر المصفوفة وتُجمع في السائل المتدفق. ولإزالة الخلايا المحتجزة من العمود، يُزال المجال المغناطيسي ببساطة. وبالتالي، يُمكّن فرز الخلايا المناعي المغناطيسي من استخدام استراتيجيات مختلفة لزيادة أو تقليل عدد الخلايا. [ 2 ] تتميز الخرزات المناعية المغناطيسية بصغر حجمها، وعادةً لا تتداخل مع التحليلات اللاحقة، إلا أنه قد يكون من الضروري إزالتها في بعض التطبيقات. باستخدام طريقة الفصل هذه، لا تؤدي زيادة عدد الخلايا إلى زيادة ملحوظة في أوقات المعالجة، كما تُضمن سلامة العينة إذا تم فرز الخلايا داخل خزانة السلامة البيولوجية. من ناحية أخرى، تسمح هذه التقنية بفصل الخلايا بناءً على علامة واحدة فقط، ولا يمكنها التمييز بين مستويات التعبير البروتيني المختلفة (التحليل الكمي). وقد أثبت فرز الخلايا المناعي المغناطيسي فائدته عند استخدامه مع مزارع الخلايا السلفية العصبية (NPC ) على وجه الخصوص، نظرًا لسهولة إدارته وقلة الضرر الذي يلحق بالخلايا الحية. [ 5 ]

تُعدّ زراعة الخلايا السلفية العصبية (NPCs) صعبة التعامل بشكل خاص لأن خلايا الدماغ الحية حساسة وتميل إلى التلوث فيما بينها. [ 5 ] وللحصول على نتائج أوضح، تحتاج المختبرات إلى مواد أنقى، أي خطوط خلايا سلفية عصبية أكثر نقاءً. [ 5 ] وجدت دراسة أُجريت عام 2019 (بدعم تمويلي من مؤسسة نيويورك للخلايا الجذعية وجمعية التنكس الجبهي الصدغي) أن الفرز المناعي المغناطيسي للخلايا طريقة بسيطة وغير مكلفة للحصول على هذه النقاء مع الحد الأدنى من الضرر لخطوط الخلايا، وبالتالي الحفاظ على جودة أفضل للخلايا، وجمع خلايا سلفية عصبية أكثر تجانسًا، وزيادة فرص إيجاد علاجات فعالة للاضطرابات العصبية. [ 5 ] استخدم الباحثون كلتا الطريقتين، المناعية المغناطيسية والتنشيط الفلوري، لتصفية الخلايا التي تحمل علامة CD271- (وهي علامات مفيدة للخلايا الجذعية الوسيطة ) والخلايا التي تحمل علامة CD133 + (وهي علامات للخلايا الجذعية السرطانية) لمقارنة فعالية كل طريقة. [ 5 ]

استُخدم فرز الخلايا المناعي المغناطيسي أيضًا في المساعدة على الإنجاب (التلقيح الاصطناعي) وعلاج زراعة الشبكية. [ 6 ] [ 7 ] في حالة المساعدة على الإنجاب، تُفصل الحيوانات المنوية الميتة (الخلايا التالفة أو المتأثرة بالموت الخلوي المبرمج) لجمع المزيد من الحيوانات المنوية غير الميتة (غير المجزأة) واستخدامها لزيادة فرص الخصوبة. [ 6 ] وقد أثبت هذا النوع من العلاج فعاليته عند تكراره، مما يزيد من كمية الخلايا غير الميتة الموجودة أثناء التلقيح. [ 6 ]

أظهرت دراسة أجريت عام 2018 في فرنسا (بدعم من عدة أفراد وهيئات، من بينها معهد الرؤية في باريس وجمعية شبكية العين الفرنسية) باستخدام الفئران وتقنية الفرز المناعي المغناطيسي للخلايا، إمكانية زرع الخلايا المستقبلة للضوء (الخلايا الموجودة في شبكية العين والتي تستجيب للضوء) لعلاج العمى. [ 7 ] في هذه العملية، تم ربط حبيبات دقيقة بإنزيم CD73 للمساعدة في فصل الخلايا المستقبلة للضوء عن العضيات الشبكية. [ 7 ] وعندما عبّر مستضد CD73+ عن نفسه مع خلايا RCVRN + (بروتينات ربط الكالسيوم في العين)، أظهر ذلك للباحثين إمكانية استخدام هذا المزيج من CD73+ وRCVRN+ مع سلائف الخلايا المستقبلة للضوء بعد الانقسام لإصلاح الشبكية. [ 7 ] ورغم أن الدراسة لم تتمكن من إثبات نجاح هذه التقنية على البشر، إلا أنها وضعت الأساس لمزيد من الأبحاث بناءً على نجاح دمج الخلايا المستقبلة للضوء غير التالفة مع مستضد CD73 وزرعها في الفئران. [ 7 ] يُبشّر هذا النجاح في فصل الخلايا ودمجها من خلال عملية الزرع بإمكانية التوصل إلى علاج لأمراض الشبكية، بما في ذلك العمى التام. وحتى الآن، لم يُبلّغ إلا عن استعادة جزئية للبصر. [ 7 ]

الأجهزة الميكروفلويدية

نظراً للقيود المتعددة التي تعتري أجهزة فرز الخلايا المنشطة بالفلورة وأجهزة الفرز المناعي المغناطيسي، فقد ظهرت مجموعة واسعة من أجهزة فرز الخلايا الميكروفلويدية. يتوفر عدد قليل منها تجارياً حالياً أو قيد التطوير التجاري. غالباً ما تستخدم الأبحاث المتعلقة بتصميمات أجهزة فرز الخلايا الميكروفلويدية تقنيات الطباعة الحجرية المرنة باستخدام مواد مثل بولي ثنائي ميثيل سيلوكسان (PDMS).

تتمثل إحدى المزايا الرئيسية لأجهزة الفرز الميكروفلويدية في إمكانية إجراء فرز الخلايا المنشط بالفلورة داخل خرطوشة معقمة مغلقة للاستخدام لمرة واحدة. تمنع هذه الخرطوشة المغلقة تعرض المشغل للمخاطر البيولوجية من خلال القطرات المنبعثة من أنظمة فرز الخلايا المنشط بالفلورة. تشمل المزايا الأخرى تقليل التأثير على حيوية الخلايا نتيجة انخفاض الإجهاد الهيدروديناميكي الواقع عليها. تُظهر بعض الأجهزة المنشورة إمكانية الفرز متعدد الاتجاهات، وانخفاض تكلفة الخرطوشة بفضل أساليب التصنيع منخفضة التكلفة، وانخفاض استهلاك الطاقة، وصغر الحجم، حيث يصل حجم بعض الأجهزة إلى حجم بطاقة الائتمان. وقد حققت بعضها مخرجات عالية النقاء ومعدلات تصل إلى حوالي 50,000 خلية/ثانية. [ 8 ] [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ]

يمكن تقسيم أجهزة فرز الخلايا الميكروفلويدية إلى فئتين: نشطة وسلبية. تعمل الأجهزة النشطة على توجيه الخلايا بشكل فردي من خلال القياسات الخلوية التي تُجرى في الوقت الفعلي. أما الأجهزة السلبية فتستغل الاختلافات الفيزيائية بين الخلايا في كيفية تفاعلها مع تدفق السوائل أو الأسطح.

نشيط

تعتمد أجهزة فرز الخلايا الميكروفلويدية النشطة على انحراف الخلايا الفردية بعد قياسها باستخدام طرق قياس التدفق الخلوي، بما في ذلك الوسم الفلوري، وتشتت الضوء، وتحليل الصور. يتم انحراف الخلايا الفردية إما بقوة مباشرة عليها أو بقوة على السائل المحيط بها، بحيث تتدفق إلى أوعية إخراج منفصلة.

تستخدم طرق انحراف الخلايا أنواعًا متعددة من المحركات الكبيرة أو البصرية أو أنظمة MEMS (الأنظمة الكهروميكانيكية الدقيقة) لانحراف جسيم أو حجم سائل داخل قناة دقيقة. ومن الأمثلة الحديثة البارزة محركات الموجات الصوتية السطحية ، [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [15] [ 16 ] [ 17 ] والمحركات الكبيرة (مثل المحركات الكهروإجهادية) المقترنة بقنوات دقيقة، [ 18 ] [ 19 ] [ 20 ] [ 21 ] والترحيل الكهربائي للقطرات، [ 22 ] ومحركات فقاعات البخار الحرارية، [ 23 ] [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ] والدوامات الدقيقة العابرة المتولدة بواسطة محركات فقاعات البخار الحرارية، [28 ] والتلاعب البصري ، [ 29 ] والصمامات الميكانيكية الدقيقة. أظهرت أسرع هذه التقنيات معدلات فرز تتجاوز 1000 خلية/ثانية، ومعدلات إنتاجية قصوى محتملة تقترب في بعض الحالات من معدلات فرز الخلايا باستخدام تقنية FACS. [ 30 ] [ 31 ] [ 32 ] [ 33 ] [ 34 ] [ 35 ] يتطلب فرز الخلايا النشط باستخدام تقنية الموائع الدقيقة أجهزة قياس التدفق الخلوي مماثلة لتلك المستخدمة في فرز الخلايا المنشط بالفلورة الموصوفة أعلاه. [ 36 ]

تتمتع أجهزة فرز الخلايا الميكروفلويدية النشطة بإمكانية زيادة الإنتاجية عن طريق المعالجة المتوازية على الشريحة. [ 37 ] وقد أظهر أسرع جهاز فرز ميكروفلويدي نشط منشور إنتاجية تبلغ 160,000 خلية/ثانية. [ 38 ]

سلبي

تعتمد عملية فرز الخلايا السلبية على سلوك السائل داخل القنوات الدقيقة لتغيير الخلايا وفصلها بناءً على حجمها وشكلها. [ 39 ] يخضع السائل في المحلول الغرواني لتوزيع سرعة محدد نتيجة لتفاعله مع جدران القناة؛ وتخضع الخلايا في المحلول لقوى سحب وقصور ذاتي مختلفة تعتمد على حجم الخلية، وتتوازن تبعًا لذلك في مواقع مختلفة على طول توزيع السرعة. [ 40 ] في القنوات الميكروفلويدية المنحنية، تتشكل دوامات بفعل قوة دين، مما يؤدي إلى تحديد مواقع الجسيمات ذات الأحجام المختلفة في مواقع مختلفة على المقطع العرضي، وذلك تبعًا لرقم رينولدز ونصف قطر انحناء القناة. [ 41 ]

فعلى سبيل المثال، في قناة مستقيمة، توجد الخلايا الأكبر حجماً في المحلول الغرواني أقرب إلى مركز القناة الدقيقة من الخلايا الأصغر حجماً، وذلك بسبب قوى السحب الأكبر من الجدار التي تدفع الخلية بعيداً عن الجدار، وقوة تدرج القص الناتجة عن توزيع السرعة التي توازن قوة السحب هذه من الجدار لتحقيق التوازن في الخلية. [ 42 ]

طرق أخرى لفصل الخلايا تعتمد على الأجسام المضادة

استُخدمت عدة طرق لفصل الخلايا وإثرائها باستخدام الأجسام المضادة قبل أن تكتسب تقنيات فرز الخلايا القائمة على التألق المناعي والمغناطيسي المناعي شعبية واسعة. [ 43 ] وشملت هذه الطرق فصل الخلايا بوساطة الأجسام المضادة والمتممة، وأجهزة الامتصاص المناعي المصنوعة من البوليسترين، ونظام CellPro CEPRATE® SC الذي يستخدم أجسامًا مضادة مثبتة في عمود مسامي. وكان هذا النظام الأخير أول جهاز طبي معتمد من إدارة الغذاء والدواء الأمريكية لفصل الخلايا الجذعية المكونة للدم .

تُعدّ تقنية فرز الخلايا المنشطة بالطفو (BACS) إحدى أحدث تقنيات فصل الخلايا التي تستخدم الأجسام المضادة، وهي تقنية فصل تعتمد على ارتباط الفقاعات الدقيقة بالخلايا من خلال ارتباط الأجسام المضادة بسطحها. ثم تُزال الخلايا المستهدفة من العينة البيولوجية عن طريق الطفو. [ 44 ]

فرز الخلايا المفردة

يُتيح فرز الخلايا المفردة طريقةً لفرز خليط غير متجانس من الخلايا بناءً على خصائصها داخل وخارج الخلية. وتُمكّن طرق فرز الخلايا المفردة من فهم خصائص خلوية قد تكون خفية أو غير واضحة. وهناك عدة طرق لفرز الخلايا المفردة:

توفر مصفوفة الميكرورافت طريقة سريعة وفعالة من حيث التكلفة لعزل الخلايا، وتحليلها بمرور الوقت، وإنتاج مجموعات خلوية مستنسخة، مع قدرة فريدة على مراقبة جميع الخصائص داخل وخارج الخلية. [ 45 ] يُعد هذا النظام مثاليًا لكل من أنواع الخلايا الملتصقة وغير الملتصقة.

تمت دراسة طريقة أحادية الخلية لمراقبة الاستجابة لمحفز خارجي (في هذه الحالة، الاستجابة الخلوية لربيطة) باستخدام جهاز ميكروفلويدي مزود بصمامات قنوات دقيقة لحصر خلية واحدة في حجرة. استُخدم نظام مكون من 23 صمامًا للتشغيل، واستُخدم صبغ فلوري في تصوير الاستجابة للمحفز. [ 46 ]

تُعدّ طرق تجميع الخلايا المفردة سلسلة من الأساليب الإحصائية التي صممها علماء البيانات استنادًا إلى الخصائص الخلوية. تشمل هذه العملية جمع بيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية (RNA-Seq)، ومعالجة البيانات مسبقًا للتجميع، ثم التجميع، وتقييم نتائج التجميع. يطبق العلماء أساليب التعلم الآلي (وخاصةً تحليل التجميع) على بيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية لتقسيم الخلايا إلى فئات مختلفة. تم تعديل جميع هذه الطرق لمعالجة المشكلات التي قد تظهر في بيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي، مثل فقدان الجينات منخفضة التعبير وعلامات الخلايا الغامضة في ظل وجود تحيزات تقنية. من أحدث هذه الطرق: SC3، [ 47 ] وCIDR، [ 48 ] وSeurat. لمزيد من المعلومات التفصيلية، يُرجى مراجعة صفحة ويكيبيديا: تجميع بيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية.

مراجع

  1. ↑ ستيفن أ. سوبر، مالغورزاتا أ. ويتك (7 يناير 2020). "فصل الخلايا وفرزها" . مجلة الكيمياء التحليلية . 92 (1): 105-131 . doi : 10.1021/acs.analchem.9b05357 . PMC 7469080. PMID 31808677 .  
  2. 1 2 3 4 أرتورو زيكلينسكي، أندريا كوساريزا (أكتوبر 2019). "إرشادات استخدام قياس التدفق الخلوي وفرز الخلايا في الدراسات المناعية (الطبعة الثانية)" . المجلة الأوروبية لعلم المناعة . 49 (10): 1457-1973 . doi : 10.1002/eji.201970107 . PMC 7350392. PMID 31633216 .  
  3. ↑ ريتشارد جي سويت، ريتشارد جي سويت. "مسجل قطرات السوائل" .
  4. ↑ "المستضد CD البشري والمستضدات الخلوية الأخرى - الولايات المتحدة" . www.thermofisher.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 11 ديسمبر 2018 .
  5. 1 2 3 4 5 أليسون إم غويت، كاثرين آر بولز (27 مارس 2019). "تقليل تباين الخلايا السلفية العصبية وتحسين نقاء المزارع العصبية باستخدام الفرز الخلوي المنشط مغناطيسيًا" . PLOS ONE . 14 (3) e0213374. doi : 10.1371/journal.pone.0213374 . PMC 6436701. PMID 30917153 .  
  6. 1 2 3 ديريكان، إنور كرم (2012)، "فرز الخلايا المنوية البشرية باستخدام التنشيط المغناطيسي"، الدليل العملي للتخصيب في المختبر ، سبرينغر نيويورك، ص 265-272 ، doi : 10.1007/978-1-4419-1780-5_29 ، ISBN  978-1-4419-1779-9
  7. 1 2 3 4 5 6 غالياردي، جوليانا؛ بن مبارك، كريم؛ شافيول، أنطوان؛ سليمبروك-بريك، أميلي؛ كونارت، جان-باتيست؛ نانتو، سيلين؛ رابساندراتانا، أوريان؛ ساحل، خوسيه-آلان؛ دوبل، ينس؛ أوريو، غايل؛ رايخمان، ساشا (سبتمبر 2018). "توصيف وزرع مستقبلات ضوئية موجبة لـ CD73 معزولة من عضيات شبكية مشتقة من خلايا جذعية مستحثة متعددة القدرات بشرية" . تقارير الخلايا الجذعية . 11 (3): 665-680 . doi : 10.1016/j.stemcr.2018.07.005 . PMC 6135113. PMID 30100409 .  
  8. ↑ جوسيت دي آر، ويفر دبليو إم، ماتش إيه جيه، هور إس سي، تسيه إتش تي، لي دبليو، أميني إتش، دي كارلو دي (أغسطس 2010). "فصل وفرز الخلايا بدون علامات في أنظمة الموائع الدقيقة" . الكيمياء التحليلية والكيمياء الحيوية التحليلية . 397 (8): 3249-3267 . doi : 10.1007/s00216-010-3721-9 . PMC 2911537. PMID 20419490 .  
  9. ↑ هولسباس ر، فيلا-كوماروف ل، كوكسال إ، إتيان ك، روجرز ب، تاتل م، كورسغرين أ، شارب ج.س، بيرغلوند د (أكتوبر 2014). "تنقية الخلايا التائية التنظيمية باستخدام نظام ميكروفلويدي عالي السرعة مغلق بالكامل". العلاج الخلوي . 16 (10): 1384-1389 . doi : 10.1016/j.jcyt.2014.05.016 . PMID 25065635 . 
  10. ↑ شيلدز سي دبليو ، رييس سي دي، لوبيز جي بي (مارس 2015). "فرز الخلايا باستخدام الموائع الدقيقة: مراجعة للتطورات في فصل الخلايا من تقليل حجمها إلى عزل الخلايا النادرة" . مختبر على رقاقة . 15 (5): 1230-1249 . doi : 10.1039/C4LC01246A . PMC 4331226. PMID 25598308 .  
  11. ↑ دينغ إكس، لين إس سي، لابسلي إم آي، لي إس، غو إكس، تشان سي واي، تشيانغ آي كيه، وانغ إل، مكوي جيه بي، هوانغ تي جيه (نوفمبر 2012). "فرز الخلايا متعدد القنوات باستخدام الموجات الصوتية السطحية المستقرة (SSAW)" . مختبر على رقاقة . 12 (21): 4228-31 . doi : 10.1039/C2LC40751E . PMC 3956451. PMID 22992833 .  
  12. ↑ دينغ إكس، لين إس سي، لابسلي إم آي، لي إس، غو إكس، تشان سي واي، تشيانغ آي كيه، وانغ إل، مكوي جيه بي، هوانغ تي جيه (نوفمبر 2012). "فرز الخلايا متعدد القنوات باستخدام الموجات الصوتية السطحية المستقرة (SSAW)" . مختبر على رقاقة . 12 (21): 4228-31 . doi : 10.1039/c2lc40751e . PMC 3956451. PMID 22992833 .  
  13. ↑ شميد، ل.، ويتز، د.أ.، فرانك، ت. (7 أكتوبر 2014). "فرز القطرات والخلايا باستخدام الصوتيات: جهاز فرز الخلايا الصوتي الميكروفلويدي المنشط بالفلورة". مختبر على رقاقة . 14 (19): 3710-3718 . doi : 10.1039/c4lc00588k . ISSN 1473-0189 . PMID 25031157 .  
  14. ↑ ما، ز.، تشو، ي.، كولينز، د. ج.، آي، ي. (12 سبتمبر 2017). "فرز الخلايا المنشط بالفلورة عبر حزمة صوتية سطحية متحركة مركزة". مختبر على رقاقة . 17 (18): 3176-3185 . doi : 10.1039/C7LC00678K . ISSN 1473-0189 . PMID 28815231 .  
  15. ↑ رين، ل.، تشين، ي.، لي، ب.، ماو، ز.، هوانغ، ب.-هـ.، روفو، ج.، غو، ف.، وانغ، ل.، مكوي، ج.ب.، ليفين، س.ج.، هوانغ، ت.ج. (7 أكتوبر 2015). "جهاز فرز الخلايا الصوتي عالي الإنتاجية" . مختبر على رقاقة . 15 (19): 3870-3879 . doi : 10.1039/c5lc00706b . ISSN 1473-0189 . PMC 4641751. PMID 26289231 .   
  16. ↑ شميد إل، ويتز دي إيه، فرانك تي (أكتوبر 2014). "فرز القطرات والخلايا باستخدام الصوتيات: جهاز فرز الخلايا الصوتي الميكروفلويدي المنشط بالفلورة". مختبر على رقاقة . 14 (19): 3710-3718 . doi : 10.1039/c4lc00588k . PMID 25031157. S2CID 9893236 .  
  17. ↑ رين إل، تشين واي، لي بي، ماو زد، هوانغ بي إتش، روفو جيه، غو إف، وانغ إل، مكوي جيه بي، ليفين إس جيه، هوانغ تي جيه (أكتوبر 2015). "جهاز فرز الخلايا الصوتي عالي الإنتاجية" . مختبر على رقاقة . 15 (19): 3870-3879 . doi : 10.1039/c5lc00706b . PMC 4641751. PMID 26289231 .  
  18. ↑ تشو، إس إتش، تشين، سي إتش، تساي، إف إس، غودين، جيه إم، لو، واي-إتش. (21 يونيو 2010). "فرز خلايا الثدييات البشرية باستخدام جهاز فرز الخلايا المنشط بالفلورة عالي التكامل والمصنّع بتقنية التصنيع الدقيق (μFACS)" . مختبر على رقاقة . 10 (12): 1567-1573 . doi : 10.1039/c000136h . ISSN 1473-0197 . PMC 3118392. PMID 20379604 .   
  19. ↑ لي، سي.، لي، ج.، كيم، إتش إتش، تيه، إس-واي.، لي، إيه.، تشونغ، آي-واي.، بارك، جيه واي، شونغ، كيه كيه (7 أغسطس 2012). "فرز القطرات الميكروفلويدية باستخدام شعاع الموجات فوق الصوتية عالي التردد" . مختبر على رقاقة . 12 (15): 2736-2742 . doi : 10.1039/c2lc21123h . ISSN 1473-0189 . PMC 3400154. PMID 22643737 .   
  20. ↑ هولسباس، ر.، فيلا-كوماروف، ل.، كوكسال، إ.، إتيان، ك.، روجرز، ب.، تاتل، م.، كورسغرين، أ.، شارب، ج. س.، بيرغلوند، د. (أكتوبر 2014). "تنقية الخلايا التائية التنظيمية باستخدام نظام ميكروفلويدي عالي السرعة مغلق بالكامل". العلاج الخلوي . 16 (10): 1384-1389 . doi : 10.1016/j.jcyt.2014.05.016 . ISSN 1465-3249 . PMID 25065635 .  
  21. ↑ تشو إس إتش، تشين سي إتش، تساي إف إس، غودين جيه إم، لو واي إتش (يونيو 2010). "فرز خلايا الثدييات البشرية باستخدام جهاز فرز الخلايا المنشط بالفلورة عالي التكامل والمصنّع بتقنية التصنيع الدقيق (microFACS)" . مختبر على رقاقة . 10 (12): 1567-1573 . doi : 10.1039/c000136h . PMC 3118392. PMID 20379604 .  
  22. ↑ أغريستي جيه جيه، أنتيبوف إي، أباتي إيه آر، آهن كيه، روات إيه سي، باريت جيه سي، ماركيز إم، كليبانوف إيه إم، غريفيثز إيه دي، ويتز دي إيه (مارس 2010). "الفحص فائق الإنتاجية في الموائع الدقيقة القائمة على القطرات للتطور الموجه" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 107 (9): 4004-4009 . Bibcode : 2010PNAS..107.4004A . doi : 10.1073/pnas.0910781107 . PMC 2840095. PMID 20142500 .  
  23. ↑ تشين واي، تشونغ إيه جيه، وو تي إتش، تيتيل إم إيه، دي كارلو دي، تشيو بي واي (مايو 2014). " فرز الخلايا المنشط بالليزر النبضي مع التركيز بالقصور الذاتي ثلاثي الأبعاد بدون غلاف" . سمول . 10 (9): 1746-1751 . doi : 10.1002/smll.201302885 . PMC 4324602. PMID 24536017 .  
  24. ↑ وو، ت.-هـ.، تشين، ي.، بارك، س.-ي.، هونغ، ج.، تيسلا، ت.، تشونغ، ج.ف.، دي كارلو، د.، تيتيل، م.أ.، تشيو، ب.-ي. (2012). "جهاز فرز الخلايا عالي السرعة بتقنية الميكروفلويديك والمنشط بالفلورة والمُشغَّل بالليزر النبضي" . مختبر على رقاقة . 12 (7): 1378-1383 . doi : 10.1039/c2lc21084c . ISSN 1473-0197 . PMC 3965373. PMID 22361780 .   
  25. ↑ هوفمان، هـ.، وادل، س.، باختينا، ن.، كوندراشوف، ف.، وانغلر، ن.، زينغيرلي، ر. (يونيو 2012). "فرز وتحليل الخلايا المفردة بتقنية BubbleJet". أجهزة الاستشعار والمحركات ب: الكيميائية . 168 : 442-445 . doi : 10.1016/j.snb.2012.04.005 . ISSN 0925-4005 . 
  26. ^ Wijs، K. de، Liu، C.، Dusa، A.، Vercruysse، D.، Majeed، B.، Tezcan، DS، Blaszkiewicz، K.، Loo، J.، Lagae، L. (2017). "تدفق نفاث فقاعة البخار الصغير لفرز الخلايا المنشطة بالفلورسينت بشكل آمن وعالي المعدل" . رقاقة المختبر . 17 (7): 1287-1296 . دوى : 10.1039 / C6LC01560C . ردمك 1473-0197 . بميد 28252674 . تم الاسترجاع في 14 مارس 2017 .  
  27. ↑ تشين، سي سي، وانغ، جيه إس، سولغارد، أو. (أكتوبر 2006). "جهاز فرز الخلايا بتقنية النفث الفقاعي المصغر مع أوضاع تشغيل متعددة". أجهزة الاستشعار والمحركات ب: الكيميائية . 117 (2): 523-529 . doi : 10.1016/j.snb.2006.05.011 . ISSN 0925-4005 . 
  28. ↑ بريتشارد، آر إتش، جوكوف، إيه إيه، فولرتون، جيه إن، وانت، إيه جيه، حسين، إف، كور، إم إف، باشتانوف، إم إي، جولد، آر دي، هايلز، إيه، بانهام-هول، إي، روجرز، إس إس (18 يونيو 2019). " فرز الخلايا المُحفَّز بواسطة دوامة قصور ذاتي ميكروفلويدية" . مختبر على رقاقة . 19 (14): 2456-2465 . doi : 10.1039/C9LC00120D . ISSN 1473-0189 . PMID 31210196. S2CID 190538792 .   
  29. ↑ تشين واي، تشونغ إيه جيه، وو تي إتش، تيتيل إم إيه، دي كارلو دي، تشيو بي واي (مايو 2014). " فرز الخلايا المنشط بالليزر النبضي مع التركيز بالقصور الذاتي ثلاثي الأبعاد بدون غلاف" . سمول . 10 (9): 1746-1751 . doi : 10.1002/smll.201302885 . PMC 4324602. PMID 24536017 .  
  30. ^ Wijs، K. de، Liu، C.، Dusa، A.، Vercruysse، D.، Majeed، B.، Tezcan، DS، Blaszkiewicz، K.، Loo، J.، Lagae، L. (2017). "تدفق نفاث فقاعة البخار الصغير لفرز الخلايا المنشطة بالفلورسينت بشكل آمن وعالي المعدل" . رقاقة المختبر . 17 (7): 1287-1296 . دوى : 10.1039 / C6LC01560C . ردمك 1473-0197 . بميد 28252674 . تم الاسترجاع في 14 مارس 2017 .  
  31. ↑ ما، ز.، تشو، ي.، كولينز، د. ج.، آي، ي. (12 سبتمبر 2017). "فرز الخلايا المنشط بالفلورة عبر حزمة صوتية سطحية متحركة مركزة". مختبر على رقاقة . 17 (18): 3176-3185 . doi : 10.1039/C7LC00678K . ISSN 1473-0189 . PMID 28815231 .  
  32. ↑ وو، ت.-هـ.، تشين، ي.، بارك، س.-ي.، هونغ، ج.، تيسلا، ت.، تشونغ، ج.ف.، دي كارلو، د.، تيتيل، م.أ.، تشيو، ب.-ي. (2012). "جهاز فرز الخلايا عالي السرعة بتقنية الميكروفلويديك والمنشط بالفلورة والمُشغَّل بالليزر النبضي" . مختبر على رقاقة . 12 (7): 1378-1383 . doi : 10.1039/c2lc21084c . ISSN 1473-0197 . PMC 3965373. PMID 22361780 .   
  33. ↑ تشو، إس إتش، تشين، سي إتش، تساي، إف إس، غودين، جيه إم، لو، واي-إتش. (21 يونيو 2010). "فرز خلايا الثدييات البشرية باستخدام جهاز فرز الخلايا المنشط بالفلورة عالي التكامل والمصنّع بتقنية التصنيع الدقيق (μFACS)" . مختبر على رقاقة . 10 (12): 1567-1573 . doi : 10.1039/c000136h . ISSN 1473-0197 . PMC 3118392. PMID 20379604 .   
  34. ↑ شميد، ل.، ويتز، د.أ.، فرانك، ت. (7 أكتوبر 2014). "فرز القطرات والخلايا باستخدام الصوتيات: جهاز فرز الخلايا الصوتي الميكروفلويدي المنشط بالفلورة". مختبر على رقاقة . 14 (19): 3710-3718 . doi : 10.1039/c4lc00588k . ISSN 1473-0189 . PMID 25031157 .  
  35. ↑ رين، ل.، تشين، ي.، لي، ب.، ماو، ز.، هوانغ، ب.-هـ.، روفو، ج.، غو، ف.، وانغ، ل.، مكوي، ج.ب.، ليفين، س.ج.، هوانغ، ت.ج. (7 أكتوبر 2015). "جهاز فرز الخلايا الصوتي عالي الإنتاجية" . مختبر على رقاقة . 15 (19): 3870-3879 . doi : 10.1039/c5lc00706b . ISSN 1473-0189 . PMC 4641751. PMID 26289231 .   
  36. ↑ شيلدز سي دبليو، أوهيري كيه إيه، سزوت إل إم، لوبيز جي بي (مارس 2017). "ترجمة الموائع الدقيقة: تقنيات فصل الخلايا ومعوقات تسويقها" . قياس التدفق الخلوي، الجزء ب . 92 (2): 115-125 . doi : 10.1002/cyto.b.21388 . PMC 5149119. PMID 27282966 .  
  37. ↑ هولسباس، ر.، فيلا-كوماروف، ل.، كوكسال، إ.، إتيان، ك.، روجرز، ب.، تاتل، م.، كورسغرين، أ.، شارب، ج. س.، بيرغلوند، د. (أكتوبر 2014). "تنقية الخلايا التائية التنظيمية باستخدام نظام ميكروفلويدي عالي السرعة مغلق بالكامل". العلاج الخلوي . 16 (10): 1384-1389 . doi : 10.1016/j.jcyt.2014.05.016 . ISSN 1465-3249 . PMID 25065635 .  
  38. ↑ جوكوف، أ.أ.، بريتشارد، ر.هـ.، ويذرز، م.ج.، هايلز، ت.، غولد، ر.د.، هايز، س.، كور، م.ف.، حسين، ف.، روجرز، س.س. (أبريل 2021). "فرز الخلايا عالي الإنتاجية للغاية باستخدام تقنية الموائع الدقيقة المتوازية المُفعَّلة بالدوامات" . الآلات الدقيقة . 12 (4). معهد النشر الرقمي متعدد التخصصات: 389. doi : 10.3390/mi12040389 . ISSN 2072-666X . PMC 8066247. PMID 33918161 .   
  39. ↑ تشو جيه، كاسبر إس، بابوتسكي آي (نوفمبر 2013). "تحسين احتجاز الجسيمات المعتمد على الحجم باستخدام الدوامات الدقيقة" . الموائع الدقيقة والنانوية . 15 (5): 611-623 . doi : 10.1007/s10404-013-1176-y . PMC 3810988. PMID 24187531 .  
  40. ↑ مارتيل جيه إم، تونر إم (يوليو 2014). "التركيز بالقصور الذاتي في الموائع الدقيقة" . المراجعة السنوية للهندسة الطبية الحيوية . 16 (1): 371-396 . doi : 10.1146/annurev - bioeng-121813-120704 . PMC 4467210. PMID 24905880 .  
  41. ↑ مارتيل جيه إم، تونر إم (26-11-2013). "تركيز الجسيمات في قنوات الموائع الدقيقة المنحنية" . التقارير العلمية . 3 : 3340. رمز Bibcode : 2013NatSR...3E3340M . doi : 10.1038/srep03340 .
  42. ↑ جيسلينجر، تي إم، وفرانك، تي (يونيو 2014). "الرفع الهيدروديناميكي للحويصلات وخلايا الدم الحمراء في التدفق - من فاهروس وليندكفيست إلى فرز الخلايا الميكروفلويدي". التقدم في علوم الغرويات والأسطح البينية . 208 : 161-176 . doi : 10.1016/j.cis.2014.03.002 . PMID 24674656 . 
  43. ↑ ريكتينوالد، د. (4 نوفمبر 1997). طرق فصل الخلايا وتطبيقاتها . مطبعة سي آر سي. رقم ISBN 978-0-8247-9864-2.
  44. ↑ "مصطلحات فصل الخلايا واستخداماتها وطرقها وتقنياتها" . أكاديوم لعلوم الحياة . تم الاطلاع عليه بتاريخ 4 مايو 2022 .
  45. ↑ "نظام إيزورافت" (موقع إلكتروني) . أنظمة الخلايا الدقيقة . تم الاطلاع عليه بتاريخ 19-03-2013 .
  46. ↑ تان إس جيه، كي إم زد، ماثورو إيه إس، بوركهولدر دبليو إف، جيسوثاسان إس جيه (2013-11-08). "جهاز ميكروفلويدي لفرز الخلايا بناءً على الاستجابة الديناميكية للمحفز" . PLOS ONE . 8 (11) e78261. Bibcode : 2013PLoSO...878261T . doi : 10.1371/journal.pone.0078261 . PMC 3826715. PMID 24250795 .  
  47. ↑ كيسيلف ف، كيرشنر ك، شوب م، وآخرون (2017). "SC3: التجميع التوافقي لبيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية" . Nature Methods . 483 (486): 483–486 . doi : 10.1038/nmeth.4236 . PMC 5410170. PMID 28346451 .   
  48. ↑ لين ب، تروب م، هو جيه دبليو (2017). "CIDR: تجميع فائق السرعة والدقة من خلال الإسناد لبيانات تسلسل الحمض النووي الريبوزي أحادي الخلية" . علم الأحياء الجينومي . 18 (59): 59. doi : 10.1186/s13059-017-1188-0 . PMC 5371246. PMID 28351406 .