استخلاص الفينول-الكلوروفورم

استخلاص الفينول والكلوروفورم هو تقنية استخلاص سائل - سائل في البيولوجيا الجزيئية تستخدم لفصل الأحماض النووية عن البروتينات والدهون . ^{[ 1 ]}

تُخلط عينات مائية، أو خلايا مُحللة، أو أنسجة مُتجانسة مع أحجام مُتساوية من خليط الفينول والكلوروفورم . ثم يُخضع هذا الخليط للطرد المركزي. ولأن خليط الفينول والكلوروفورم لا يمتزج بالماء، فإن عملية الطرد المركزي تُؤدي إلى تكوين طورين مُختلفين: طور مائي علوي، وطور عضوي سفلي. يرتفع الطور المائي إلى الأعلى لأنه أقل كثافة من الطور العضوي الذي يحتوي على خليط الفينول والكلوروفورم. هذا الاختلاف في الكثافة هو السبب في ضرورة خلط الفينول، الذي تزيد كثافته قليلاً عن كثافة الماء، مع الكلوروفورم لتكوين خليط ذي كثافة أعلى بكثير من كثافة الماء.

ستنتقل الدهون الكارهة للماء إلى الطور العضوي السفلي، بينما ستبقى البروتينات عند السطح الفاصل بين الطورين، في حين ستبقى الأحماض النووية (بالإضافة إلى الملوثات الأخرى كالأملاح والسكريات وغيرها) في الطور المائي العلوي. يمكن بعد ذلك سحب الطور المائي العلوي باستخدام الماصة. يجب توخي الحذر لتجنب سحب أي جزء من الطور العضوي أو المواد الموجودة عند السطح الفاصل . غالبًا ما تُكرر هذه العملية عدة مرات لزيادة نقاء الحمض النووي. ^{[ 2 ]} ينتج عن هذه العملية حمض نووي مزدوج السلاسل كبير الحجم يمكن استخدامه في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو تحليل تعدد أطوال قطع التقييد (RFLP) .

إذا كان الخليط حمضياً، فسيترسب الحمض النووي DNA في الطور العضوي بينما يبقى الحمض النووي RNA في الطور المائي. وذلك لأن الحمض النووي DNA يتعادل بسهولة أكبر من الحمض النووي RNA.

توجد بعض عيوب هذه التقنية في استخدامها في الطب الشرعي. فهي تستغرق وقتاً طويلاً وتستخدم مواد كيميائية خطرة. كما أنها، لكونها عملية من خطوتين تتضمن نقل المواد الكيميائية بين الأنابيب، أكثر عرضة للتلوث . ^{[ 3 ]}

• استخلاص غوانيدينيوم ثيوسيانات-فينول-كلوروفورم الحمضي
• ترسيب الإيثانول
• تنقية الأحماض النووية باستخدام عمود الدوران