لطخة (علم الأحياء)

في علم الأحياء الجزيئي وعلم الوراثة ، تُعدّ عملية النقل عبر الغشاء طريقةً لنقل الجزيئات الحيوية الكبيرة ( البروتينات ، أو الحمض النووي DNA ، أو الحمض النووي RNA ) إلى غشاء ناقل، مثل غشاء مصنوع من النيتروسليلوز ، أو فلوريد البولي فينيليدين ، أو النايلون . في كثير من الأحيان، تُجرى هذه العملية بعد الفصل الكهربائي الهلامي ، حيث تُنقل الجزيئات من الهلام إلى غشاء النقل ، وفي أحيان أخرى تُضاف العينات مباشرةً إلى الغشاء. بعد النقل، تُصوَّر الجزيئات المنقولة باستخدام التلوين ( على سبيل المثال، تلوين البروتينات بالفضة)، أو التصوير الإشعاعي الذاتي للجزيئات الموسومة إشعاعيًا (الذي يُجرى قبل النقل)، أو الوسم النوعي لبعض البروتينات أو الأحماض النووية . يُجرى الوسم النوعي باستخدام الأجسام المضادة أو مجسات التهجين التي ترتبط فقط ببعض جزيئات الغشاء، وتكون مرتبطةً بإنزيم . بعد الغسل المناسب، يتم تصوير هذا النشاط الإنزيمي (وبالتالي الجزيئات الموجودة في البقعة) عن طريق الحضانة مع كاشف مناسب، مما يؤدي إما إلى ترسب ملون على البقعة أو تفاعل كيميائي مضيء يتم تسجيله بواسطة فيلم فوتوغرافي .

يُعدّ تحليل ساوثرن بلوت طريقةً شائعة الاستخدام في البيولوجيا الجزيئية للكشف عن تسلسل الحمض النووي (DNA) في عينات الحمض النووي. يجمع تحليل ساوثرن بلوت بين نقل شظايا الحمض النووي المفصولة بالرحلان الكهربائي إلى غشاء ترشيح، ثم الكشف عن هذه الشظايا بواسطة تهجين المجس. ^{[ 1 ]}

تُستخدم تقنية ويسترن بلوت للكشف عن بروتينات محددة في العينات المعقدة. تُفصل البروتينات أولاً حسب الحجم باستخدام الرحلان الكهربائي قبل نقلها إلى مادة نقل مناسبة (عادةً ما تكون من فلوريد البولي فينيليدين أو النيتروسليلوز ) ثم يتم الكشف عنها باستخدام الأجسام المضادة.

على غرار تقنية ويسترن بلوت ، تستخدم تقنية فار-ويسترن بلوت تفاعلات البروتين-بروتين للكشف عن وجود بروتين معين مثبت على مادة التلطيخ. ثم تُستخدم الأجسام المضادة للكشف عن وجود معقد البروتين-بروتين، مما يجعل تقنية فار-ويسترن بلوت حالة خاصة من تقنية ويسترن بلوت.

تعتمد تقنية ساوثرن بلوت على تقنية ساوثرن بلوت ، وتُستخدم لتحديد وتوصيف البروتينات المرتبطة بالحمض النووي من خلال قدرتها على الارتباط بمجسات قليلة النوكليوتيدات محددة. ^{[ 2 ]} تُفصل البروتينات بواسطة الرحلان الكهربائي الهلامي، ثم تُنقل إلى أغشية النيتروسليلوز، على غرار أنواع أخرى من تقنيات النقل.

تُستخدم تقنية التلطيخ الشرقي للكشف عن تعديلات ما بعد الترجمة المحددة للبروتينات. تُفصل البروتينات بواسطة الرحلان الكهربائي الهلامي قبل نقلها إلى مصفوفة التلطيخ، حيث تُكشف تعديلات ما بعد الترجمة بواسطة ركائز محددة (سم الكوليرا، كونكانافالين، فوسفوموليبدات، إلخ) أو أجسام مضادة. ^{[ 3 ]}

يُستخدم اختبار التلطيخ الشرقي البعيد للكشف عن السكريات قليلة الوحدات المرتبطة بالدهون . يُستخدم أولاً كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة عالية الأداء لفصل الدهون بناءً على خصائصها الفيزيائية والكيميائية، ثم تُنقل إلى مصفوفة التلطيخ قبل الكشف عن السكريات قليلة الوحدات بواسطة بروتين ربط محدد (مثل الأجسام المضادة أو الليكتينات).

يُستخدم تحليل النورثرن بلوت للكشف عن تسلسلات الحمض النووي الريبوزي (RNA) المحددة في العينات المعقدة. يفصل تحليل النورثرن بلوت العينات أولاً حسب الحجم باستخدام الرحلان الكهربائي الهلامي قبل نقلها إلى مصفوفة التلطيخ والكشف عنها باستخدام مجسات الحمض النووي الريبوزي الموسومة.

يختلف التلطيخ الشمالي العكسي عن كل من التلطيخ الشمالي والجنوبي في أن الحمض النووي يتم تثبيته أولاً على مصفوفة التلطيخ ويتم الكشف عن تسلسلات محددة باستخدام مجسات الحمض النووي الريبي الموسومة.

يُعدّ التلطيخ النقطي حالة خاصة من أي من التلطيخات المذكورة أعلاه حيث تتم إضافة المادة المراد تحليلها مباشرة إلى مصفوفة التلطيخ (وتظهر على شكل "نقطة") بدلاً من فصل العينة عن طريق الرحلان الكهربائي قبل التلطيخ.

• تقنية ساوثرن بلوت للحمض النووي
• تحليل نورثرن بلوت للحمض النووي الريبي
• تحليل نورثرن العكسي للحمض النووي الريبي
• تحليل البروتينات بتقنية ويسترن بلوت
• لطخة ويسترن البعيدة لتفاعلات البروتين-البروتين
• لطخة إيسترن لتعديل ما بعد الترجمة
• لطخة الشرق الأقصى للغليكوليبيدات
• بقعة نقطية

• الفحص المناعي