بصمة الحمض النووي المُضخّم

📅 آخر تحديث: ٤ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٤ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 3 صور
الموسوعة الحرة
تمت رقمنة وتحليل بيانات التعبير الجيني لنبات الكورنوس فلوريدا ( Cornus florida L.) من صنفيه "بينك ساتشيه" و"فراغرانت كلاود"، بالإضافة إلى هجائنهما من الجيل الأول (F1)، والتي تم إنتاجها في الأصل باستخدام بروتوكول مُحسَّن وفقًا لمنهجية تاغوشي [ 1 ] ، وذلك باستخدام برنامج ImageJ . وكانت المادة المصدرية عبارة عن هلام بولي أكريلاميد مُلوَّن بالفضة ومُدعَّم بغشاء بوليستر، تم إنتاجه عام 1997. ومن اللافت للنظر أنه تم استخلاص الحمض النووي المُضخَّم عشوائيًا بنجاح وإعادة تضخيمه بعد ما يقرب من 30 عامًا.

بصمة الحمض النووي المُضخّم (DAF) هي تقنية حساسة للغاية لتحليل الحمض النووي ، تُنتج بصمات جينومية معقدة وقابلة للتكرار دون الحاجة إلى معرفة مسبقة بمعلومات التسلسل. طُوّرت هذه التقنية في أوائل التسعينيات على يد غوستافو كايتانو-أنوليس وزملائه في جامعة تينيسي ، [ 2 ] وقدّمت بديلاً عالي الدقة لأساليب مسح الأحماض النووية، مثل الحمض النووي متعدد الأشكال المُضخّم عشوائيًا (RAPD)، وتفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفّز عشوائيًا (AP-PCR)، وتعدد أطوال القطع المُضخّمة (AFLP)، وذلك لأغراض التنميط الجيني، والتمييز بين السلالات، ورسم خرائط الجينوم، وتحليل التجمعات السكانية.

تستخدم تقنية DAF بادئات أوليغونوكليوتيدية مفردة قصيرة جدًا وعشوائية، يتراوح طولها عادةً بين 5 و8 نيوكليوتيدات ، وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لتضخيم مناطق متعددة غير معروفة موزعة في جميع أنحاء الجينوم . [ 3 ] نظرًا لقصر البادئات الشديد، فإنها ترتبط بالعديد من المواقع المتكاملة جزئيًا. عندما يقع موقعان في اتجاهين متعاكسين وعلى مسافة قابلة للتضخيم (عادةً أقل من 3-5 كيلوبايت)، يتم تضخيم الجزء الفاصل بينهما. يؤدي فصل المنتجات الناتجة بواسطة الرحلان الكهربائي عالي الدقة على هلام بولي أكريلاميد (PAGE) في ظروف مُفَكِّكة أو في ظروف طبيعية، متبوعًا بتلوين الفضة ، إلى إنتاج عشرات إلى مئات الحزم التي تُشكل معًا "بصمة" جينومية مميزة، حيث تعمل الحزم الفردية غالبًا كعلامات وراثية. [ 4 ]

تتميز تقنية DAF عن تقنيات تضخيم الحمض النووي العشوائي الأخرى بنسبها العالية بين البادئات والقالب، وبساطة إجراءاتها، وقابليتها العالية للتكرار، وقدرتها العالية على التحليل المتعدد. إضافةً إلى الجينومات الكاملة، يمكن توليد بصمات الحمض النووي من أجزاء جينومية فرعية مثل نواتج تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، والحمض النووي المستنسخ ، ومجموعات الحمض النووي التكميلي (cDNA).

الآلية

تعتمد تقنية DAF على بوليميراز DNA مقاوم للحرارة (مثل بوليميراز Taq أو نسخ مختصرة منه كقطعة Stoffel) يعمل في ظروف تهجين منخفضة لتحقيق تضخيم موجه بالبادئات للحمض النووي الجينومي . [ 2 ] [ 3 ] يُضخّم الإنزيم أجزاءً جينومية تقع بين مواقع ارتباط البادئات ذات التوجهات المعاكسة. تصبح نواتج التضخيم الأولية ، الناشئة من مناطق غير معروفة بين هذه المواقع، "قوالب مفضلة" في الدورات اللاحقة لأنها تحمل مكملات بادئات مثالية في نهاياتها. ونتيجة لذلك، تعمل نواتج التمديد من دورة ما كقوالب مثالية لمزيد من التهجين والتخليق في الدورة التالية، مما يؤدي إلى إثراء أُسّي لهذه القطع. والنتيجة هي خليط معقد من قطع DNA بأحجام ووفرة متفاوتة تعكس التوزيع الجينومي للوحدات القصيرة المطابقة للبادئات، والمسافات بينها، وتعدد أشكال التسلسل التي تُنشئ أو تُزيل مواقع التهجين، وعمليات الإدخال/الحذف التي تُغير طول القطعة. وبهذه الطريقة، يكشف DAF عن تعدد الأشكال دون استهداف مواقع محددة.

اقترح كايتانو-أنوليس وآخرون [5] (انظر أيضًا [3] و[6]) نموذجًا آليًا لتضخيم الحمض النووي باستخدام بادئات عشوائية . يُركز هذا النموذج على التفاعل التنافسي بين تفاعلات البادئ - القالب وتفاعلات القالب-القالب، والذي يتشكل أساسًا خلال دورات التضخيم الأولى لتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). [ 5 ] [ 7 ] خلال هذه المرحلة الأولية لفحص القالب، يتم اختيار مجموعة فرعية من المناطق الجينومية للتضخيم بشكل تفضيلي من خلال تفاعلات البادئ-القالب-الإنزيم التي تتحمل عدم تطابق كبير، مما يسمح للبادئات العشوائية القصيرة جدًا بالارتباط بمواقع متعددة. بمجرد حدوث التمديد، تكون نواتج التضخيم في الجولة الأولى جزيئات أحادية السلسلة، غالبًا ما تحتوي على تسلسلات مكملة معكوسة في نهاياتها. تُعزز هذه التسلسلات اقتران القواعد داخل الجزيء (تكوين حلقة دبوس الشعر) وتكوين اللولب المزدوج بين الجزيئات من خلال ارتباط القالب-القالب، مما يُدخل تكوينات هيكلية متنافسة في الدورات اللاحقة. يجب على البادئات التعرف على هذه البنى، واختراقها، وإزاحتها للسماح بارتباط البوليميراز واستطالته. ونتيجةً لذلك، تستمر فقط النواتج المبكرة التي تسمح بنيتها بوصول البادئات بكفاءة في التضخيم بكفاءة. وأخيرًا، مع تقدم عملية التضخيم، يقترب التفاعل من حالة توازن ديناميكي بين الخيوط المفردة المتنافسة، والحلقات الدبوسية، والثنائيات، ومعقدات البادئ-القالب، والوسائط المرتبطة بالإنزيم. ضمن هذا المزيج، تتحول ثنائيات البادئ-القالب النادرة نسبيًا ولكنها منتجة باستمرار إلى نواتج متراكمة، مما ينتج عنه أنماط نطاقات معقدة ولكنها قابلة للتكرار، وهي سمة مميزة لتقنية DAF.

يشرح هذا النموذج لماذا تقوم تقنيات مسح الجينوم بتضخيم مجموعة فرعية محددة وقابلة للتكرار من أجزاء الجينوم بدلاً من أخذ عينات من الجينوم بشكل عشوائي، حيث يتم تحديد النتائج إلى حد كبير من خلال الأحداث في دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل الأولى.

تصميم البادئ وظروف التضخيم

تُختار البادئات بشكل عشوائي وتُستخدم بتراكيز عالية (3-30 ميكرومولار) مقارنةً بالتراكيز المعتادة في تفاعل البوليميراز المتسلسل المُضخّم (AP-PCR) (1-10 ميكرومولار) وتفاعل البوليميراز المتسلسل العشوائي (RAPD) (0.3 ميكرومولار). [ 6 ] لم تُصمم تسلسلاتها لاستهداف أي جين أو منطقة جينومية محددة معروفة. تقترب أطوال البادئات من الحد الأدنى اللازم لدعم تضخيم الحمض النووي. [ 3 ] [ 5 ] [ 8 ] يتطلب التضخيم الناجح بادئات لا يقل طولها عن 5 نيوكليوتيدات، ويُفضل أن يكون طولها 8 نيوكليوتيدات، ويعتمد التزاوج على التطابق التام مع أول 5-6 نيوكليوتيدات من الطرف 3'. [ 5 ] يُعزز قصر طول البادئات التزاوج المُتسامح مع عدم التطابق، مما يؤدي إلى تضخيم عشرات إلى مئات القطع ذات الأحجام المختلفة.

تُستخدم بادئات الأوليغونوكليوتيدات في تقنية DAF. [ 6 ] يُشار إلى اتجاه استطالة البادئ بواسطة بوليميراز الحمض النووي بسهم. R: مجموعة مُبلِّغة؛ N: قاعدة نيوكليوتيدية متغيرة.

يمكن فحص البادئات بناءً على قدرتها على كشف التعددات الشكلية. على سبيل المثال، في دراسات التنوع الجيني في الترمس الأبيض ( Lupinus albus )، تم تقييم 56 بادئة ثمانية النيوكليوتيدات، أنتجت 22 منها أنماط DAF متعددة الأشكال للغاية، مما يُفيد في تمييز السلالات. [ 9 ] كما يمكن اختيار البادئات لتعديل تعقيد ملف تعريف الحمض النووي. [ 6 ] [ 10 ] تميل البادئات القصيرة جدًا (5-6 نيوكليوتيدات) إلى إنتاج أنماط نطاقات بسيطة تُشبه تلك الخاصة بتقنية RAPD، [ 5 ] بينما يمكن استخدام البادئات الأطول (≥ 20 نيوكليوتيدًا) بشكل قابل للتكرار [ 11 ] ولكنها غالبًا ما تُنتج ملفات تعريف أقل تعقيدًا. [ 6 ] تسمح البادئات المصممة لاحتواء بنية دبوس شعر مصغرة فائقة الاستقرار [ 12 ] عند الطرف 5' بتقليص تسلسل الطرف 3' العشوائي إلى 3 نيوكليوتيدات فقط، مما يُمكّن من التضخيم المُتحكم به للقوالب منخفضة التعقيد مثل البلازميدات وقطع تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، مع زيادة الكشف عن الحمض النووي متعدد الأشكال. [ 7 ] يمكن لدمج مجموعات مُبلِّغة (مثل الفلوروفورات أو البيوتين ) عند الطرف 5' أو استخدام قواعد متغيرة ضمن تسلسل البادئ، أن يُخصِّص تعقيد ملف تعريف الحمض النووي بشكل أكبر ويُسهِّل تحديد بصمات المتغيرات. [ 7 ] تُبسِّط الاستبدالات بالإينوزين الأنماط عمومًا، بينما تُزيد الاستبدالات بأي من النيوكليوتيدات الأربعة المُمكنة من تعقيد ملف التعريف.

تُحسَّن التفاعلات لتحقيق دقة عالية مع الحفاظ على مرونة كافية لعمليات التحفيز المتعددة. [ 13 ] نظرًا لتأثير العديد من المتغيرات المتداخلة على كفاءة التضخيم وأنماط التجزئة، فإن التحسين يتطلب جهدًا كبيرًا ويعتمد عادةً على تجارب تكرارية أو مصممة إحصائيًا (مثل تحليل المصفوفات، [ 14 ] أو التصاميم العاملية الجزئية ، [ 15 ] أو طرق تصميم تاغوشي التجريبية [ 1 ] ) بدلاً من الاختبارات الشاملة. يُعدّ ارتفاع نسبة البادئ إلى القالب عاملاً حاسمًا في أداء DAF، حيث يؤثر تركيز البادئ وكمية القالب وجودة الحمض النووي على قابلية التكرار. يُعدّ اختيار بوليميراز الحمض النووي المقاوم للحرارة أمرًا بالغ الأهمية، إذ تُنتج الإنزيمات المختلفة بصمات جزيئية مختلفة بشكل ملحوظ. تُفضَّل الإنزيمات المبتورة، مثل جزء ستوفل، نظرًا لاستقرارها وتحملها لمستويات المغنيسيوم المتغيرة. [ 14 ] تؤثر المكونات الأيونية، وخاصة المغنيسيوم وتفاعله مع البادئات والنيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات وأيونات المحلول المنظم، بشكل كبير على دقة التضخيم، مما يجعل تركيبات المحاليل المنظمة العامة غير عملية لجميع الإنزيمات. وتؤثر معايير التدوير الحراري - وخاصة درجة حرارة التلدين ووقت التمسخ - على كمية المنتج وتوزيعه، على الرغم من أن العديد من المعايير تتمتع بتفاوتات واسعة بمجرد ضبطها ضمن النطاقات المناسبة.

فصل الحمض النووي وحفظه وتصويره

تُفصل أنماط الحمض النووي عادةً باستخدام الرحلان الكهربائي الهلامي متعدد الأكريلاميد ( PAGE) والتلوين بالفضة، [ 16 ] ولكن يمكن أيضًا الحصول عليها باستخدام الرحلان الكهربائي الهلامي للأغاروز ، أو الرحلان الكهربائي الهلامي المتدرج في درجة الحرارة ( DGGE)، [ 17 ] أو الرحلان الكهربائي الهلامي ذي درجة الحرارة المتغيرة (TSGE)، [ 18 ] أو منصات آلية مثل أجهزة تسلسل الحمض النووي أو الرحلان الكهربائي الشعيري (CE). يمكن تصوير نواتج التضخيم باستخدام التلوين بالفضة ، أو الأصباغ المتداخلة الفلورية (مثل بروميد الإيثيديوم )، أو الوسم الإشعاعي. يمكن حفظ هلامات البولي أكريلاميد المصبوغة بالفضة والمدعومة بالبوليستر لعقود، وغالبًا ما تُخزن في ألبومات الصور. تسمح هذه الهلامات بإجراء مسح ضوئي مباشر لأنماط الحمض النووي، وتُستخدم كسجلات تجريبية ومستودعات مادية للحمض النووي المُضخّم. يمكن عزل نواتج التضخيم المصبوغة بالفضة من الهلامات المجففة، وإعادة تضخيمها، واستنساخها، وتسلسلها. [ 19 ] [ 20 ]

أنواع DAF

تم تضخيم ملفات تعريف RAF من الطماطم (المسارات 1)، وفول الصويا (المسارات 2)، وفول الصويا (المسارات 3) باستخدام اثنين من البادئات العشرية المختلفة. [ 21 ]

تشمل متغيرات DAF تقنية DAF ذات الحلقة الدبوسية المصغرة (mhpDAF) [ 7 ] ، وتقنية التوقيعات العشوائية من ملفات تعريف التضخيم (ASAP) [ 22 ] ، وتقنية تحديد ملفات تعريف التضخيم العشوائي المتعدد باستخدام قالب إنزيم نوكلياز داخلي (tecMAAP) [ 23 ] . تعمل تقنية mhpDAF على زيادة كشف الحمض النووي متعدد الأشكال بشكل كبير أثناء عملية البصمة الوراثية من خلال فحص جزء فعال أكبر من الجينوم عبر تفاعلات التلدين الممتدة والمتأثرة بالبنية. يمكن لهذه القدرة الموسعة على المسح أن تُحسّن الدقة بشكل كبير (حتى 5 أضعاف) عن طريق اختيار المُضخّمات ذات مواقع التلدين الممتدة بشكل تفضيلي أثناء التضخيم الثانوي. تُعيد تقنية ASAP تضخيم منتجات DAF (أو منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل الأخرى) باستخدام بادئات الحلقة الدبوسية المصغرة. تسمح هذه الاستراتيجية المكونة من خطوتين باستخدام بادئات مُركّبة، بحيث تُنتج أزواج البادئات المختلفة بصمات وراثية مميزة، مما يُوسّع بشكل كبير القدرة على التمييز، خاصةً عند استخدامها في تفاعلات متعددة. يعزز tecMAAP اكتشاف تعدد الأشكال الجينية (حتى 100 ضعف) عن طريق هضم الحمض النووي القالب باستخدام إنزيمات القطع المحددة قبل DAF. يقلل القطع من طول القالب، ويغير حركية تفاعل البادئ مع القالب، ويزيل أو يُنشئ مُضخّمات مُفضّلة اعتمادًا على اختلاف التسلسل في مواقع القطع، مما يزيد من تمييز التسلسل بين الأنماط الجينية شديدة التقارب. تشمل متغيرات DAF أيضًا تعديلات في دقة ما بعد التضخيم لمنتجات التضخيم. على سبيل المثال، تُحسّن بصمة الحمض النووي المُضخّم عشوائيًا (RAF) [ 21 ] دقة الملف الشخصي عن طريق وسم المُضخّمات بالفوسفور المشع 33P أو الفلورة وفصلها على هلامات تسلسل بولي أكريلاميد كبيرة. يُنتج هذا الشكل أنماط نطاقات قابلة للتكرار بدرجة عالية، ويُولد نسبة قابلة للقياس من العلامات المتنحية المشتركة، ويُقارن بشكل إيجابي مع تعدد أطوال القطع المُضخّمة (AFLP) من حيث الكفاءة التحليلية والموثوقية.

التطبيقات

استُخدمت تقنية DAF ومتغيراتها في تحديد السلالات والأنواع وخطوط الخلايا، وعلم الوراثة السكانية، وعلم الجغرافيا الوراثية، ورسم خرائط الارتباط واكتشاف المؤشرات، وتقييم التنوع الجينومي، وتصنيف الميكروبات وعلم الأوبئة، والتمييز بين أصناف النباتات والفطريات. ومن الأمثلة على ذلك بصمة البكتيريا [ 14 ] (مثل Acinetobacter baumani).[ 24 ] عزلات من مرضى وحدة العناية المركزة، [ 25 ] تجمعات بكتيرية مختلطة في مفاعلات حيوية للزراعة ، [26] تحليل تجمعات الفطريات المسببة للعفن الزغبي ( Pseudoperonospora humuli )، [ 27 ] تطوير علامات منطقة التضخيم المميزة بالتسلسل (SCAR) وDAF للفطريات السيلوميسيتية ( Boeremia exigua )، [ 28 ] تحليل فطريات Discula destructiva المسببة لمرض أنثراكنوز خشب الكورنوس ، [ 29 ] تحليل تجمعات فطريات حلقة الجنيات ( Marasmius oreades )، [21] تحديد خطوط الخلايا الحشرية [32] والبشرية، [33 ] تحليل التنوع الجيني للبطاطا الحلوة ( Ipomoeba batatas ) ، [ 34 ] واليام ( Dioscorea sp . ) ، [ 35 ] وجنس Vigna الاستوائي ، [ 36 ] 36 ] والتخطيط الجيني وتحليل التباين المجمع في البازلاء، [ 37 ] وفول الصويا، [ 38 ] والحمص. [ 39 ]

تُعدّ تقنية DAF إحدى تقنيات البصمة الجينية عالية الدقة المبكرة، وقد حظيت بتقدير خاص خلال الفترة من تسعينيات القرن الماضي وحتى أواخر العقد الأول من الألفية الثانية، وذلك لتنميطها الجيني السريع في الميكروبات والنباتات والكائنات الحية الأخرى. ومع ظهور تقنيات التسلسل من الجيل التالي (NGS) لتحليل الجينوم الكامل، والاكتشاف المُوجّه للميكروساتلايتات ، وتعدد أشكال النوكليوتيدات المفردة ، ومناطق جينومية محددة أخرى، بما في ذلك علامات الحمض النووي المرتبطة بمواقع التقييد (RAD)، يُتوقع أن تحلّ هذه التقنيات محلّ طرق مسح الجينوم الأبسط، مثل DAF وRAPD وAP-PCR وAFLP، ومشتقاتها. ومع ذلك، لا تزال تقنية DAF ذات قيمة كبيرة لتقنية البصمة الجينية السريعة منخفضة التكلفة، والتحليل الاسترجاعي للملفات المحفوظة، واستعادة المُضخّمات المجهولة للتسلسل، والدراسات الاستكشافية للتنوع الجيني حيث تكون أساليب الإنتاجية العالية غير عملية ( انظر: الحمض النووي المُضخّم عشوائيًا ).

المزايا والعيوب

لا تتطلب تقنية DAF معرفة مسبقة بتسلسل الحمض النووي، مما يسمح بتطبيقها على أي كائن حي أو بنية مُهندسة تقريبًا. تتميز هذه الطريقة بالسرعة، وقابلية التكرار، والبساطة التقنية (عادةً من 3 إلى 10 ساعات، حسب جهاز التدوير الحراري )، وتوفر دقة عالية وقابلية تكرار ممتازة، وتسمح بالحفظ طويل الأمد لبصمات الحمض النووي، وهي مفيدة بشكل خاص في التمييز بين الكائنات الحية وثيقة الصلة حيث لا تُظهر الطرق الأخرى سوى اختلافات طفيفة. هذه الخصائص تميز DAF عن تقنية RAPD المعروفة باعتمادها الكبير على المختبر. مع ذلك، تتطلب DAF تحسينًا دقيقًا لظروف التفاعل، وعادةً ما تُنتج علامات سائدة، مما يجعل التمييز بين الأفراد غير المتماثلين صعبًا. ولكن، يمكن استخلاص نواتج DAF من هلامات البولي أكريلاميد أو الأغاروز، واستنساخها، وتحويلها إلى علامات SCAR مشتركة السيادة، [ 40 ] مما يسمح بالتمييز بين الأفراد غير المتماثلين والمتماثلين.

انظر أيضاً

مراجع

  1. 1 2 كايتانو-أنوليس، غوستافو (1998). "تحسين DAF باستخدام طرق تاغوشي وتأثير معلمات التدوير الحراري على تضخيم الحمض النووي" . BioTechniques . 25 (3): 472–480 . doi : 10.2144/98253rr03 . ISSN 0736-6205 . PMID 9762445 .  
  2. 1 2 كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ برانت، ج.، بسام؛ بيتر، م.، غريشوف (1991). "بصمة تضخيم الحمض النووي باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات قصيرة جدًا وعشوائية" . مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 9 (6): 553-557 . رمز Bibcode : 1991NatBi...9..553C . doi : 10.1038/nbt0691-553 . ISSN 1546-1696 . PMID 1367225 .  
  3. 1 2 3 4 كايتانو-أنوليس، ج. (1993). "تضخيم الحمض النووي باستخدام بادئات قليلة النوكليوتيدات عشوائية" . أبحاث الجينوم . 3 (2): 85-94 . doi : 10.1101/gr.3.2.85 . ISSN 1088-9051 . PMID 8268791 .  
  4. ↑ كايتانو-أنوليس، غوستافو (1996). "مسح الأحماض النووية بالتضخيم المختبري: تطورات وتطبيقات جديدة" . مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 14 (13): 1668-1674 . doi : 10.1038/nbt1296-1668 . ISSN 1546-1696 . PMID 9634849 .  
  5. 1 2 3 4 5 كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ بسام، برانت جيه؛ غريشوف، بيتر إم. (1992-11-01). "تفاعلات البادئ والقالب أثناء بصمة الحمض النووي باستخدام قليل النوكليوتيدات العشوائية المفردة". علم الوراثة الجزيئية والعامة MGG . 235 (2): 157-165 . Bibcode : 1992MolGG.235..157C . doi : 10.1007/BF00279356 . ISSN 1432-1874 . PMID 1465089 .  
  6. 1 2 3 4 5 كايتانو-أنوليس، ج. (1994). "MAAP: أداة متعددة الاستخدامات وعالمية لتحليل الجينوم". بيولوجيا النبات الجزيئية . 25 (6): 1011-1026 . Bibcode : 1994PMolB..25.1011C . doi : 10.1007/BF00014674 . ISSN 1573-5028 . PMID 7919212 .  
  7. 1 2 3 4 كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ غريشوف، بيتر م. (1994). "بصمة تضخيم الحمض النووي باستخدام بادئات أوليغونوكليوتيدية صغيرة ذات شكل دبوس شعري عشوائي" . مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 12 (6): 619-623 . doi : 10.1038/nbt0694-619 . ISSN 1546-1696 . PMID 7764952 .  
  8. ↑ فينسنت، جون؛ جورلينج، هيو؛ ميلمر، جورج (1994-01-01). "يمكن استخدام قليل النوكليوتيدات القصيرة التي تصل إلى 7 وحدات في تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل" . بيولوجيا الحمض النووي والخلية . 13 (1): 75-82 . doi : 10.1089/dna.1994.13.75 . ISSN 1044-5498 . PMID 8286042 .  
  9. ↑ كيو، ج.؛ فان سانتين، إ.؛ توزون، س. (1995). "تحسين تقنيات بصمة الحمض النووي لتضخيم الحمض النووي لدراسة العلاقات الوراثية لبلازما جرثومية الترمس الأبيض" . تربية النبات . 114 (6): 525-529 . Bibcode : 1995PBree.114..525Q . doi : 10.1111/j.1439-0523.1995.tb00849.x . ISSN 0179-9541 . مؤرشف من الأصل في 27-11-2023. 
  10. ^ Caetano-Anollés، G. (1997)، “Fingerprint Tailoring”، في ميشيلي، ماريا ريتا؛ بوفا ، رودولفو (محرران)، طرق بصمات الأصابع بناءً على تفاعل البوليميراز المتسلسل التعسفي ، برلين، هايدلبرغ: سبرينغر، الصفحات من 103 إلى 117، دوى : 10.1007/978-3-642-60441-6_13 ، ISBN  978-3-642-60441-6
  11. ^ دياز بيراليس، أراسيلي؛ ليناسيرو، روزاريو؛ فاسكيز، آنا م. (2001). "بصمة تضخيم الحمض النووي باستخدام اثنين من البادئات الطويلة" . التقنيات الحيوية . 30 (4): 718-720 . دوى : 10.2144 / 01304bm01 . ردمك 0736-6205 . بميد 11314250 .  
  12. ↑ هيراو، إيشيرو؛ نيشيمورا، يوشيفومي؛ ناراوكا، تيتسوشي؛ واتانابي، كيموتسونا؛ أراتا، يوجي؛ ميورا، كين-إيشيرو (1989). "بنية مستقرة استثنائية لقطع قصيرة من الحمض النووي أحادي السلسلة تحتوي على تسلسل قاعدي محدد: d(GCGAAAGC)" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 17 (6): 2223-2231 . doi : 10.1093/nar/17.6.2223 . ISSN 0305-1048 . PMC 317592. PMID 2704619 .   
  13. ↑ كايتانو-أنوليس، ج. (1997)، "بصمة تضخيم الحمض النووي"، في ميشيلي، ماريا ريتا؛ بوفا، رودولفو (محرران)، طرق البصمة القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفَّز عشوائيًا ، برلين، هايدلبرغ: سبرينغر، ص 65-80 ، doi : 10.1007/978-3-642-60441-6_10 ، ISBN  978-3-642-60441-6
  14. 1 2 3 بسام، برانت ج.؛ كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ غريشوف، بيتر م. (1992). "بصمة الحمض النووي للبكتيريا باستخدام تضخيم الحمض النووي" . علم الأحياء الدقيقة التطبيقي والتكنولوجيا الحيوية . 38 (1): 70-76 . doi : 10.1007/BF00169422 . ISSN 0175-7598 . PMID 1369011 .  
  15. ↑ وولف، ك.؛ شون، إي. دي.؛ راين، ج. بيترز-فان (1993). "تحسين توليد الحمض النووي متعدد الأشكال المُضخّم عشوائيًا في الأقحوان" . علم الوراثة النظري والتطبيقي . 86 (8): 1033-1037 . doi : 10.1007/BF00211058 . ISSN 0040-5752 . PMID 24194014 .  
  16. ↑ كايتانو-أنوليس، ج. (1997)، "فصل نواتج تضخيم الحمض النووي باستخدام الرحلان الكهربائي على هلام متعدد الأكريلاميد والتلوين بالفضة"، في ميشيلي، ماريا ريتا؛ بوفا، رودولفو (محرران)، طرق البصمة الوراثية القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفَّز عشوائيًا ، برلين، هايدلبرغ: سبرينغر، ص 119-134 ، doi : 10.1007/978-3-642-60441-6_14 ، ISBN  978-3-642-60441-6
  17. ↑ دويكات، آي.؛ ماكنزي، إس. (1997)، "الرحلان الكهربائي الهلامي المتدرج المُشوِّه لتحسين الكشف عن تعدد أشكال الحمض النووي"، في ميشيلي، ماريا ريتا؛ بوفا، رودولفو (محرران)، طرق البصمة الوراثية القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفَّز عشوائيًا ، برلين، هايدلبرغ: سبرينغر، ص 135-141 ، doi : 10.1007/978-3-642-60441-6_15 ، ISBN  978-3-642-60441-6
  18. ↑ بينر، جي إيه (1997)، "الرحلان الكهربائي الهلامي المعدل ذو المسح الحراري لفصل شظايا الحمض النووي المضخمة عشوائيًا"، في ميشيلي، ماريا ريتا؛ بوفا، رودولفو (محرران)، طرق البصمة الوراثية القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفز عشوائيًا ، برلين، هايدلبرغ: سبرينغر، ص 143-148 ، doi : 10.1007/978-3-642-60441-6_16 ، ISBN  978-3-642-60441-6
  19. ↑ ويفر، ك. ر.؛ كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ غريشوف، بيتر م.؛ كالهان، لويد م. (1994). "عزل واستنساخ نواتج تضخيم الحمض النووي من هلامات بولي أكريلاميد مصبوغة بالفضة" . تقنيات حيوية . 16 (2): 226-227 . PMID 7514004 . 
  20. ↑ كايتانو-أنوليس، ج. (1997)، "استعادة الحمض النووي المُضخّم من الهلامات المصبوغة بالفضة"، في ميشيلي، ماريا ريتا؛ بوفا، رودولفو (محرران)، طرق البصمة الوراثية القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفّز عشوائيًا ، برلين، هايدلبرغ: سبرينغر، ص 153-160 ، doi : 10.1007/978-3-642-60441-6_18 ، ISBN  978-3-642-60441-6
  21. 1 2 والدرون، جولي؛ بيس، كاميرون ب.؛ سيرل، إيان ر.؛ فورتادو، أنجيلو؛ ويد، نيك؛ فيندلاي، إيان؛ غراهام، مايكل و.؛ كارول، برنارد ج. (2002). "بصمة الحمض النووي المُضخّمة عشوائيًا: تتويج لتقنيات علامات الحمض النووي القائمة على تضخيم تفاعل البوليميراز المتسلسل المُحفّز عشوائيًا" . مجلة البحوث الطبية الحيوية الدولية . 2 (3): 141-150 . doi : 10.1155/S1110724302206026 . ISSN 2314-6133 . PMC 161367. PMID 12488579 .   
  22. ↑ كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ غريشوف، بيتر م. (1996). "توليد بصمات تسلسلية من بصمات تضخيم الحمض النووي باستخدام بادئات الحلقة الشعرية المصغرة والميكروساتلايت" . BioTechniques . 20 ( 6): 1044–1056 . doi : 10.2144/96206rr02 . ISSN 0736-6205 . PMID 8780875 .  
  23. ↑ كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ بسام، برانت جيه؛ غريشوف، بيتر إم. (1993). "تحسين الكشف عن الحمض النووي متعدد الأشكال من خلال تحليل تضخيم عشوائي متعدد للحمض النووي المهضوم بالإنزيمات الداخلية: تحديد المؤشرات المرتبطة ارتباطًا وثيقًا بموقع التكوين العقدي الفائق في فول الصويا" . علم الوراثة الجزيئية والعامة MGG . 241 ( 1-2 ): 57-64 . doi : 10.1007/BF00280201 . ISSN 0026-8925 . PMID 8232212 .  
  24. ↑ شيهان، سي.؛ بويسيل، إل.؛ لينش، إم.؛ كريان، بي.؛ فانينغ، إس. (1996). "تطبيق تقنية بصمة الحمض النووي المُضخّم (DAF) في دراسة بكتيريا أسينيتوباكتر بوماني المعزولة من مرضى وحدة العناية المركزة" . المجلة الأيرلندية للعلوم الطبية . 165 (1): 44-48 . doi : 10.1007/BF02942802 . ISSN 0021-1265 . PMID 8867499 .  
  25. ↑ برين، أليك؛ روب، آلان ف.؛ تايلور، دينيس؛ لوبير، جون س.؛ سفيرّا، بي آر (1995). "تطبيق بصمة تضخيم الحمض النووي (DAF) على المفاعلات الحيوية ذات المزارع المختلطة" . مجلة علم الأحياء الدقيقة الصناعية . 14 (1): 10-16 . doi : 10.1007/BF01570059 . ISSN 0169-4146 . PMID 8867499 .  
  26. ↑ تشي، هي يون؛ نيلسون، مارك إي؛ غروف، غاري جي؛ إيستويل، كينيث سي؛ كيني، ستيفن تي؛ كلاين، روبرت إي (2006). "علم الأحياء السكاني لفطر Pseudoperonospora humuli في ولايتي أوريغون وواشنطن" . أمراض النبات . 90 (10): 1283-1286 . Bibcode : 2006PlDis..90.1283C . doi : 10.1094/PD-90-1283 . ISSN 0191-2917 . PMID 30780933 .  
  27. ↑ أفيسكامب، مايكل م.؛ وودنبرغ، جويس هـ.س.؛ دي غرويتر، يوهانس؛ توركو، إيلينا؛ غرونيفالد، يوهانس ز.؛ كروس، بيدرو و. (2009). "تطوير مؤشرات منطقة التضخيم المميزة بالتسلسل (SCAR) الخاصة بالتصنيف، والمستندة إلى تسلسلات الأكتين وبصمة تضخيم الحمض النووي (DAF): دراسة حالة في مجموعة أنواع فوما إكسيغوا" . علم أمراض النبات الجزيئي . 10 (3): 403-414 . Bibcode : 2009MolPP..10..403A . doi : 10.1111/ j.1364-3703.2009.00540.x . ISSN 1464-6722 . PMC 6640366. PMID 19400842 .   
  28. ↑ كايتانو-أنوليس، غوستافو؛ تريجيانو، روبرت ن.؛ ويندهام، مارك ت. (2001). "أنماط التطور في فطريات ديسكولا وأصل أنثراكنوز شجرة الكورنوس في أمريكا الشمالية، دُرست باستخدام الحمض النووي المُضخّم عشوائيًا والحمض النووي الريبوزي" . علم الوراثة الحالي . 39 ( 5-6 ): 346-354 . doi : 10.1007/s002940100223 . ISSN 0172-8083 . PMID 11525409 .  
  29. ↑ أبيشة، إيمنت؛ كايتانو أنوليس، غوستافو؛ هويلاند، كلاوس (2003). "علم الوراثة السكانية والتركيب المكاني للفطر الحلقي الخيالي Marasmius oreades في النظام البيئي للكثبان الرملية النرويجية" . الفطريات . 95 (6): 1021-1031 . دوى : 10.1080 / 15572536.2004.11833018 . ISSN 0027-5514 . بميد 21149011 .  
  30. ↑ ماكنتوش، أ.هـ؛ غراسيلا، ج.ج؛ ماتد، ر.ل (1996). "تحديد سلالات خلايا الحشرات باستخدام بصمة تضخيم الحمض النووي (DAF)" . علم الأحياء الجزيئي للحشرات . 5 (3): 187-195 . doi : 10.1111/j.1365-2583.1996.tb00053.x . ISSN 0962-1075 . PMID 8799737 .  
  31. ↑ ليو، غوانغفو؛ شو، ييبنغ؛ يو، شياوبينغ (2015). "إنشاء وتوصيف سلالة خلوية جديدة من Chilo suppressalis Walker (Lepidoptera: Pyralididae)" . علم الأحياء الخلوي والتنموي في المختبر - الحيوان . 51 (3): 218-221 . doi : 10.1007/s11626-014-9831-5 . ISSN 1071-2690 . PMID 25381037 .  
  32. ↑ ريال، تامرا؛ كراوس، سوزان؛ غودمان، سينثيا ل.؛ رينغباور، جوزيف؛ غيبل، سفين؛ ستانلي، ديفيد (2019). "خطوط خلايا من الجيل التالي مُستحدثة من دودة جيش الخريف، Spodoptera frugiperda (Lepidoptera: Noctuidae)". علم الأحياء الخلوي والتنموي في المختبر - الحيوان . 55 (9): 686-693 . doi : 10.1007/s11626-019-00394-9 . ISSN 1543-706X . PMID 31410641 .  
  33. ↑ كروفورد، برايان هـ.؛ حسين، أكرم أ.؛ جيدياما، ناثان م. (2006). "دليل على وجود مؤشر حيوي جينومي في سلالة خلايا الثدي الظهارية البشرية الطبيعية، MCF-10A، غير موجود في سلالة خلايا سرطان الثدي البشري، MCF-7" . مجلة BioMed Research International . 2006 (2) 43181. doi : 10.1155/JBB/2006/43181 . ISSN 2314-6133 . PMC 1510942. PMID 16883051 .   
  34. ↑ هي، غوهاو؛ براكاش، سي إس؛ جاريت، آر إل (1995). "تحليل التنوع الجيني في مجموعة من بلازما جرثومية للبطاطا الحلوة (Ipomoea batatas) باستخدام بصمة الحمض النووي المُضخّم" . جينوم . 38 (5): 938-945 . doi : 10.1139/g95-123 . ISSN 0831-2796 . PMID 8537002 .  
  35. ^ فيندل ، أوليفر. فاروسش، كريستوف؛ نوي، كريستيان؛ مولينا، كارلوس؛ كال، غونتر. كوب ، بريجيت (2006/12/01). "محتويات الديوسجينين وفحص بصمات الحمض النووي لمختلف الأنماط الجينية لليام (Dioscorea sp.)" . Zeitschrift für Naturforschung C. 61 ( 11– 12): 847– 855. دوى : 10.1515/znc-2006-11-1213 . ردمك 1865-7125 . بميد 17294697 .  
  36. ↑ سيمون، إم في؛ بينكو-إيسيبون، أ.-م.؛ ريسيندي، إل في؛ وينتر، ب.؛ كاهل، ج. (2007). سكولز، جي جي (محرر). "التنوع الجيني والعلاقات التطورية في بلازما جرثومية فيجنا سافي كما كشفت عنها بصمة تضخيم الحمض النووي" . جينوم . 50 (6): 538-547 . doi : 10.1139/G07-029 . ISSN 0831-2796 . PMID 17632575 .  
  37. ↑ مين، أ. إي؛ بوريسوف، أ. واي؛ روزوف، س. م؛ أوشاكوف، ك. ف؛ تسيغانوف، ف. إي؛ تيخونوفيتش، إ. أ؛ غريشوف، ب. م (1999). "تحديد علامات بصمة الحمض النووي المُضخّم (DAF) القريبة من طفرة sym31 غير الفعالة في التكافل في البازلاء (Pisum sativum L.)". علم الوراثة النظري والتطبيقي . 98 (6): 929-936 . doi : 10.1007/s001220051152 . ISSN 1432-2242 . 
  38. ↑ كولشينسكي، أ.؛ لانداو-إليس، د.؛ غريشوف، ب.م. (1997). "ترتيب الخريطة ومسافات الارتباط للعلامات الجزيئية القريبة من موقع التكوين العقدي الفائق (nts-1) في فول الصويا". علم الوراثة الجزيئية والعامة MGG . 254 (1): 29-36 . doi : 10.1007/s004380050387 . ISSN 1432-1874 . PMID 9108287 .  
  39. ↑ بينكو-إيسيبون، أ.-م.؛ وينتر، ب.؛ هوتيل، ب.؛ ستاغينوس، س.؛ موهلبور، ف.ج.؛ كاهل، ج. (2003). "تُظهر المؤشرات الجزيئية المرتبطة ارتباطًا وثيقًا بجينات مقاومة الفيوزاريوم في الحمص تطابقًا كبيرًا مع الجينات المرتبطة بالإمراضية الموجودة على كروموسومات 1 و5 في نبات الرشاد" . علم الوراثة النظري والتطبيقي . 107 (2): 379-386 . doi : 10.1007/s00122-003-1260-x . ISSN 0040-5752 . PMC 6640366. PMID 19400842 .   
  40. ↑ باران، آي.؛ ميشلمور، آر دبليو (1993). "تطوير مؤشرات موثوقة تعتمد على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مرتبطة بجينات مقاومة البياض الزغبي في الخس" . علم الوراثة النظري والتطبيقي . 85 (8): 985-993 . doi : 10.1007/BF00215038 . ISSN 0040-5752 . PMID 24196149 .  

مقهى الحمض النووي – منتدى لمنهجيات علامات الحمض النووي: