صبغة لوكسول الزرقاء السريعة

صبغة لوكسول فاست بلو ، أو اختصارًا صبغة LFB ، هي صبغة شائعة الاستخدام لمراقبة الميالين تحت المجهر الضوئي ، وقد طُوّرت لأول مرة على يد هاينريش كلوفر وإليزابيث باريرا عام 1953. ^{[ 1 ]} يشير مصطلح لوكسول فاست بلو إلى واحدة من ثلاث صبغات متشابهة كيميائيًا ونسيجيًا. تُستخدم صبغة LFB عادةً للكشف عن إزالة الميالين في الجهاز العصبي المركزي ، ولكنها لا تُظهر بوضوح وجود الميالين في الجهاز العصبي المحيطي . ^{[ 2 ] [ 3 ]}

أنتجت شركة دوبونت أصباغ لوكسول الزرقاء السريعة منذ عام 1944 على الأقل. ^{[ 4 ]} يشير اسم لوكسول إلى الاسم التجاري الأصلي الذي استخدمته دوبونت أولاً، ثم قسم روهم آند هاس التابع لشركة داو كيميكال . ^{[ 5 ]} أنتجت دوبونت ثلاثة أصباغ زرقاء بيعت تحت الاسم التجاري لوكسول ، بالإضافة إلى العديد من الأصباغ "السريعة" الأخرى. ^{[ 6 ] [ 7 ] [ 8 ]} وصف كلوفر وباريرا أول طريقة لاستخدام صبغة لوكسول الزرقاء السريعة في عام 1953. ^{[ 3 ]}

يوجد ثلاثة أنواع من صبغة لوكسول فاست بلو: لوكسول فاست بلو MBS، ولوكسول فاست بلو ARN، ولوكسول فاست بلو G. ^{[ 6 ]} تُعدّ صبغة لوكسول فاست بلو MBS الصبغة الأصلية والأكثر استخدامًا، وهي الصبغة التي استخدمها كلوفر وباريرا. ^{[ 1 ]} وقد طوّر الباحثون منذ ذلك الحين بروتوكولات تلوين مماثلة باستخدام لوكسول فاست بلو ARN. ^{[ 9 ]}

LFB MBS هو ملح ثنائي [1,3-ثنائي (2-توليل) غوانيدينيوم] لحمض فثالوسيانين النحاس ثنائي السلفونيك. ^{[ 10 ]} الصيغة الكيميائية لصبغة MBS هي${\displaystyle {\ce {C32H14CuN8Na2O6S2}}}$الحمض، المعروف باسم حمض لوكسول فاست بلو إم بي إس الحر، له الصيغة الكيميائية التالية:${\displaystyle {\ce {[C32H16CuN8O6S2]^2-}}}$[ ^{11 ]} LFB MBS هو صبغة فثالوسيانين . أما LFB ARN وLFB G، فهما أملاح ثنائي أريل غوانيدين لأصباغ آزو سلفونية . يُعرف LFB ARN باسم أنازولين الصوديوم، وصيغته الكيميائية ^هي${\displaystyle {\ce {C26H16N3Na3O10S3}}}$[ ^{12 ]} LFB G لها الصيغة ^{التالية}${\displaystyle {\ce {C57H46N10O13S4}}}$[ ^{13 ]​}

يُستخدم لوكسول فاست بلو بشكل أساسي لتلوين أغلفة الميالين للخلايا العصبية . ^{[ 14 ]} يخضع لوكسول فاست بلو لتفاعل حمضي-قاعدي للارتباط بقواعد الفوسفوليبيدات ؛ ورغم أن القواعد الدقيقة المتضمنة غير معروفة، فقد أظهرت الأبحاث السابقة انجذابًا قويًا نحو الفوسفوليبيدات التالية: فوسفاتيديل كولين ، وفوسفاتيديل إيثانولامين ، وفوسفاتيديل سيرين ، وسفينغوميلين . ^{[ 15 ] [ 16 ] [ 17 ]} تشكل هذه الفوسفوجليسريدات مجتمعةً 27.6% من الوزن الجاف للميالين المعزول. ^{[ 18 ]} تتشابه أنواع لوكسول فاست بلو المختلفة نسيجيًا، مع اختلافات طفيفة فقط في انجذابها نحو بعض الفوسفوليبيدات. ^{[ 7 ] [ 19 ] [ 20 ]}

في عملية التلوين، تُصبغ مقاطع الأنسجة بمحلول يتكون من أحد ألوان لوكسول الزرقاء السريعة والإيثانول (وأحيانًا يُضاف حمض الخليك الجليدي). ^{[ 18 ]} هناك بروتوكولان رئيسيان لتلوين لوكسول الأزرق السريع: التلوين التقليدي وبروتوكول MCOLL، ويُجرى هذان البروتوكولان بشكل أساسي على مقاطع البارافين.

يتم إجراء عملية التلوين التقليدية النموذجية باستخدام صبغة LFB على النحو التالي: ^{[ 21 ] [ 3 ] [ 17 ]}

1. قم بإزالة الشمع من الأجزاء باستخدام الزيلين .
2. قم بترطيب الأجزاء عدة مرات، بالتناوب بين الإيثانول النقي والكحول بنسبة 95%.
3. قم بتلوين المقاطع لمدة 16-24 ساعة على الأقل عند درجة حرارة حوالي 56  درجة مئوية.
4. اشطف (أو اغمر) في كحول بنسبة 95% مرة واحدة على الأقل، ثم اشطف مرة واحدة بالماء المقطر.
5. قم بالتفريق في كربونات الليثيوم بنسبة 0.05% .
6. استمر في التمييز في تغيرات نسبة الكحول 70% حتى يمكن التمييز بين المادة الرمادية والمادة البيضاء.
7. اغسل بالماء المقطر.
8. (إذا لزم الأمر، استمر في التمييز مع عدة تغييرات من الكحول بنسبة 70٪).
9. أوقف عملية التمايز في الماء المقطر.
10. اشطفها أو اغمرها في عدة مرات بمحلول كحولي بنسبة 95%.
11. (إذا لزم الأمر، اشطف أو اغمر في عدة تغييرات من الإيثانول النقي).
12. يُنقل إلى الزيلين.
13. تركيب الشرائح.

في بروتوكول MCOLL، تتم إضافة الخطوات التالية بعد إيقاف عملية التمايز، وقبل النقل إلى الزيلين والتركيب: ^{[ 22 ] [ 17 ]}

1. اشطف بالماء المقطر.
2. قم بتلوين المقاطع في محلول بيكرو-سيريوس الأحمر في درجة حرارة الغرفة لمدة 30 دقيقة.
3. اشطفها بعدة مرات من الماء المقطر.
4. قم بتلوين العينة باستخدام هيماتوكسيلين هاريس لمدة 3 دقائق.
5. اشطف بالماء الجاري لمدة 3-5 دقائق.
6. قم بتجفيفه بتراكيز متزايدة تدريجياً من الإيثانول من 70% (أو 95%) إلى 99%.

في صبغة LFB النقية، تظهر ألياف الميالين باللون الأزرق، وتكون المناطق ذات التركيز الأعلى من الميالين أغمق لوناً. وتظهر الصبغة الزرقاء على خلفية بيضاء.

يُستخدم عادةً البنفسجي الكريزيلي كصبغة مضادة . يرتبط هذا البنفسجي الكريزيلي بمادة نيسل ، التي تتركز حول نواة الخلية العصبية ؛ وتتيح هذه الصبغة المضادة التمييز بين المحاور العصبية المغلفة بالميالين، وأجسام الخلايا ، والمحاور العصبية غير المغلفة بالميالين أو الخلايا الدبقية . في هذه الحالة، تظهر ألياف الميالين باللون الأزرق، ويظهر النسيج العصبي باللون الوردي (أو البنفسجي الباهت)، وتظهر أجسام الخلايا العصبية باللون البنفسجي.

على الرغم من أن صبغة كريزيل البنفسجية هي الصبغة المضادة الشائعة في تلوين LFB، إلا أن بروتوكولات LFB تُستخدم غالبًا مع طرق تلوين أخرى شائعة. يوفر الجمع بين LFB والصبغة المضادة أو طرق التلوين الأخرى الطريقة الأكثر فائدة وموثوقية لإظهار العمليات المرضية في الجهاز العصبي المركزي. ^{[ 23 ]} بعد صبغة كريزيل البنفسجية، يُستخدم LFB غالبًا مع صبغة الهيماتوكسيلين والإيوسين ( H& E )، ويُشار إليه اختصارًا بـ HE-LFB أو H&E-LFB . تشمل طرق التلوين الشائعة الأخرى حمض بيروديك-شيف ، والأحمر الزيتي O ، وحمض الفوسفوتنجستيك، وطريقة نترات الفضة لهولمز . ^{[ 23 ]}

• بقعة بيلشوفسكي