التلوين فوق الحيوي

التلوين فوق الحيوي هو أسلوب تلوين يُستخدم في المجهر لفحص الخلايا الحية التي أُزيلت من الكائن الحي. وهو يختلف عن التلوين داخل الحيوي ، الذي يُجرى عن طريق حقن الصبغة أو إدخالها إلى الجسم بطريقة أخرى. ولذلك، قد يكون التلوين فوق الحيوي أكثر سمية ، إذ يكفي أن تبقى بضع خلايا حية لفترة قصيرة. يستخدم بعض الباحثين مصطلح " التلوين الحيوي " للإشارة تحديدًا إلى التلوين داخل الحيوي، بينما يستخدمه آخرون كمرادف للتلوين فوق الحيوي، والمفهوم الأساسي هو أن الخلية التي يتم فحصها لا تزال حية. وبما أن الخلايا حية وغير مثبتة، خارج الجسم، فإن التلوين فوق الحيوي مؤقت بطبيعته. ^{[ 1 ] [ 2 ]}

تُجرى أكثر أنواع التلوين الحيوي شيوعًا على الخلايا الشبكية باستخدام أزرق الميثيلين الجديد أو أزرق الكريزيل اللامع ، مما يُتيح رؤية النمط الشبكي الخيطي للريبوسومات المترسبة بشكل مميز في خلايا الدم الحمراء غير الناضجة الحية . ومن خلال عدّ هذه الخلايا، يُمكن تحديد معدل تكوين خلايا الدم الحمراء، مما يُوفر نظرة ثاقبة على نشاط نخاع العظم وفقر الدم . ^{[ 3 ]} وهذا يختلف عن التلوين الحيوي ، حيث يُستخدم صبغ لا يدخل إلى الخلايا الحية، بحيث لا تتلون الخلايا الميتة إلا بشكل إيجابي. (تشمل الصبغات الحيوية أصباغًا مثل أزرق التريبان ويوديد البروبيديوم ، والتي إما أنها كبيرة الحجم أو مشحونة بشدة بحيث لا تستطيع عبور غشاء الخلية، أو يتم ضخها بسرعة من قِبل الخلايا الحية).

يمكن دمج التلوين الحيوي مع تلوين الأجسام المضادة لسطح الخلية ( التألق المناعي ) لتطبيقات مثل تحليل التدفق الخلوي (FACS ). ^{[ 4 ]} كما يمكن إجراء التألق المناعي داخل الخلايا الحية عن طريق نفاذية الخلية العكسية باستخدام المنظف تريتون X-100 . وبضبط التركيز بعناية ليناسب عدد الخلايا، تسمح المعالجة المسبقة بوصول الجزيئات التي يتراوح وزنها الجزيئي بين 1 و150 كيلودالتون إلى داخل الخلية. ^{[ 5 ]} على الرغم من إمكانية استخدام الأجسام المضادة بطريقة مماثلة في هذا السياق، إلا أن مصطلح "التلوين الحيوي" يُستخدم عادةً لوصف المواد الكيميائية الأصغر حجمًا التي تمتلك خصائص مناسبة بطبيعتها.

الأصباغ الحيوية لخلايا الدم الحمراء: ^{[ 6 ]}

• أزرق الميثيلين الجديد
• أزرق كريزيل رائع
• بنفسجي كريستالي
• البنفسجي الميثيلي
• أزرق النيل

• صبغة هوكست