أزرق النيل
يُعدّ اللون الأزرق النيلي (أو الأزرق النيلي أ ) صبغةً تُستخدم في علم الأحياء وعلم الأنسجة . ويمكن استخدامه مع الخلايا الحية أو المثبتة، ويُضفي لونًا أزرق على أنوية الخلايا .
يمكن استخدامه أيضًا بالتزامن مع المجهر الفلوري للكشف عن وجود حبيبات بولي هيدروكسي بوتيرات في الخلايا بدائية النواة أو حقيقية النواة. ينتج عن غلي محلول من أزرق النيل مع حمض الكبريتيك لون أحمر النيل (أوكسازون أزرق النيل).
الخواص الكيميائية والفيزيائية
يُعدّ اللون الأزرق النيلي صبغة فلورية . وتظهر الفلورة بشكل خاص في المذيبات غير القطبية مع مردود كمي عالٍ . [ 1 ]
تعتمد قيم الامتصاص والانبعاث القصوى للون الأزرق النيلي بشكل كبير على درجة الحموضة والمذيبات المستخدمة: [ 1 ]
| مذيب | الامتصاص λ max (نانومتر) | انبعاث λ max (نانومتر) |
|---|---|---|
| التولوين | 493 | 574 |
| الأسيتون | 499 | 596 |
| ثنائي ميثيل فورماميد | 504 | 598 |
| الكلوروفورم | 624 | 647 |
| 1-بيوتانول | 627 | 664 |
| 2-بروبانول | 627 | 665 |
| الإيثانول | 628 | 667 |
| الميثانول | 626 | 668 |
| ماء | 635 | 674 |
| حمض الهيدروكلوريك بتركيز 1.0 مولار (الأس الهيدروجيني = 0) | 457 | 556 |
| محلول هيدروكسيد الصوديوم بتركيز 0.1 مولار (الأس الهيدروجيني = 13.0) | 522 | 668 |
| ماء الأمونيا (الأس الهيدروجيني = 11-12) | 524 | 668 |
تم قياس مدة تألق صبغة النيل الأزرق في الإيثانول، فكانت 1.42 نانوثانية. وهذه المدة أقصر من القيمة المقابلة لصبغة النيل الأحمر، والتي تبلغ 3.65 نانوثانية. ولا تتأثر مدة التألق بالتخفيف في نطاق تركيز يتراوح بين 10⁻³ و10⁻⁸ مول / لتر. [ 1 ]
صبغة النيل الأزرق
يُستخدم صبغ النيل الأزرق في التلوين النسيجي للعينات البيولوجية. وهو يُبرز الفرق بين الدهون المحايدة ( الدهون الثلاثية ، إسترات الكوليسترول ، الستيرويدات ) التي تُصبغ باللون الوردي، والأحماض ( الأحماض الدهنية ، الكروموليبيدات ، الفوسفوليبيدات ) التي تُصبغ باللون الأزرق. [ 2 ]
يستخدم تلوين النيل الأزرق، وفقًا لكليبيرج، المواد الكيميائية التالية:
- نايل بلو أ
- حمض الخليك بنسبة 1%
- الجلسرين أو جيلاتين الجلسرين
سير العمل
تُثبّت العينة أو المقاطع المجمدة في الفورمالديهايد ، ثم تُغمر لمدة 20 دقيقة في محلول أزرق النيل أو 30 ثانية في محلول أزرق النيل أ (1% وزن/حجم في الماء المقطر)، ثم تُشطف بالماء. ولتحسين التمييز، تُغمر في حمض الخليك 1% لمدة 10-20 دقيقة أو 30 ثانية حتى تصبح الألوان نقية. قد يستغرق هذا دقيقة أو دقيقتين فقط. بعد ذلك، تُشطف العينة جيدًا بالماء (لمدة ساعة إلى ساعتين). ثم تُنقل العينة المصبوغة إلى شريحة مجهرية ويُزال الماء الزائد. يمكن تضمين العينة في الجلسرين أو جيلاتين الجلسرين .
نتائج
الجليسريدات غير المشبعة وردية اللون، والنوى والإيلاستين داكنة اللون، والأحماض الدهنية والمواد الدهنية المختلفة ومخاليط الدهون زرقاء بنفسجية. [ 3 ]
مثال: الكشف عن حبيبات بولي-بيتا-هيدروكسي بوتيرات (PHB)
يمكن رؤية حبيبات PHB في خلايا بكتيريا Pseudomonas solanacearum باستخدام صبغة نيل بلو A. تُلاحظ حبيبات PHB في المسحات المصبوغة باستخدام مجهر فلوري تحت عدسة زيتية ، بتكبير 1000 مرة؛ وتظهر فلورة برتقالية قوية عند طول موجة إثارة 450 نانومتر. [ 4 ]
صبغة النيل الأزرق في الرحلان الكهربائي للحمض النووي
يُستخدم صبغ النيل الأزرق أيضًا في العديد من تركيبات تلوين الحمض النووي التجارية المستخدمة في الفصل الكهربائي للحمض النووي . [ 5 ] ولأنه لا يتطلب إضاءة فوق بنفسجية من خلال الهلام الأغاروزي لرؤيته كما هو الحال مع بروميد الإيثيديوم ، فإنه يمكن استخدامه لمراقبة الحمض النووي أثناء فصله، وكذلك كصبغة للمساعدة في استخلاص شظايا الحمض النووي من الهلام دون التعرض للتلف الناتج عن الأشعة فوق البنفسجية.
الأزرق النيلي في علم الأورام
تُعد مشتقات النيل الأزرق من المواد المحسسة للضوء المحتملة في العلاج الضوئي الديناميكي للأورام الخبيثة . تتجمع هذه الأصباغ في خلايا الورم، وخاصة في الأغشية الدهنية ، و/أو يتم عزلها وتركيزها في العضيات الخلوية . [ 6 ]
باستخدام مشتق النيل الأزرق N- إيثيل-نيل الأزرق (EtNBA)، يمكن التمييز بين الأنسجة الطبيعية والأنسجة ما قبل السرطانية في التجارب على الحيوانات عن طريق مطيافية التألق في التصوير الفلوري. لا يُظهر EtNBA أي تأثيرات سامة ضوئياً . [ 7 ]
توليف
يمكن تحضير صبغة النيل الأزرق والأصباغ النفثوكسازينيوم ذات الصلة عن طريق التكثيف المحفز بالحمض إما لـ 5-(ثنائي ألكيل أمينو)-2-نيتروسوفينول مع 1-نفثيلامين ، أو 3-(ثنائي ألكيل أمينو)فينول مع N- ألكيل 4-نيتروزو-1-نفثيلامين، أو N ، N- ثنائي ألكيل-1،4-فينيلين ديامين مع 4-(ثنائي ألكيل أمينو)-1،2-نفثوكينون. بدلاً من ذلك، يمكن أكسدة ناتج تكثيف 4-نيتروزو- N ، N- ثنائي ألكيل أنيلين مع 2-نفثول (ملح 9-(ثنائي ألكيل أمينو)بنزو[ a ]فينوكسازين-7-يوم) المحفز حمضياً، بوجود أمين، مما يُدخل بديل أميني ثانٍ في الموضع 5 من نظام البنزو[ a ]فينوكسازينيوم. [ 8 ] يوضح المخطط التالي أولى هذه الطرق الأربع، والتي تؤدي إلى بيركلورات النيل الأزرق:
مراجع
- 1 2 3 خوسيه، جيني؛ بورغيس، كيفن (2006). "أصباغ فلورية قائمة على البنزوفينوكسازين لوسم الجزيئات الحيوية" (ملف PDF) . Tetrahedron . 62 (48): 11021. doi : 10.1016/j.tet.2006.08.056 .
- ↑ معجم روش، تم الوصول إليه في 25 يونيو 2007، وتمت أرشفته في 26 سبتمبر 2007 في Wayback Machine .
- ^ بينو روميس، Mikroskopische Technik ، 15. Aufl.، R. Oldenbourg Verlag، München، 1948
- ^ 97/647/EG: Entscheidung der EU-Kommission vom 9. سبتمبر 1997 über ein vorläufiges Ver suchsprogramm für Diagnose, Nachweis und Identifizierung von Pseudomonas solanacearum (Smith) Smith in Kartoffeln، تمت الزيارة في 27 يونيو 2007 .
- ↑ بروتوكول تلوين الحمض النووي (DNA) للمدارس، جامعة ريدينغ، ملف PDF، مؤرشف بتاريخ 4 مارس 2012 في أرشيف الإنترنت (Wayback Machine).
- ↑ لين، سي دبليو؛ شولوك، جيه آر؛ كيرلي، إس دي؛ سينكوتا، إل؛ فولي، جيه دبليو (1991). "التوطين الليزوزومي وآلية امتصاص المحسسات الضوئية من النيل الأزرق في الخلايا السرطانية". أبحاث السرطان . 51 (10): 2710-2719 . PMID 2021950 .
- ↑ فان ستافيرين، إتش جيه؛ سبيلمان، أو سي؛ ويتجيس، إم جيه؛ سينكوتا، إل؛ ستار، دبليو إم (2001). "التصوير الطيفي والتصوير الفلوري لصبغة إيثيل نايل الزرقاء أ في نماذج حيوانية للأورام الخبيثة وما قبل الخبيثة". الكيمياء الضوئية والبيولوجيا الضوئية . 73 (1): 32-38 . doi : 10.1562/0031-8655(2001)073 < 0032 : FIASOE > 2.0.CO ; 2. PMID 11202363. S2CID 198157623 .
- ↑ كانيتز، أندرياس؛ هارتمان، هورست (1999). "تحضير وتوصيف أملاح نافثوكسازينيوم الجسرية". المجلة الأوروبية للكيمياء العضوية . 1999 (4): 923-930 . doi : 10.1002/(SICI)1099-0690(199904)1999:4 < 923::AID-EJOC923 > 3.0.CO ; 2-N .
- أصباغ الأوكسازين
- بقع حيوية
- مركبات ثنائي إيثيل أمينو