بروتين ربط الحمض النووي البكتيري

تستخدم البكتيريا مجموعة متنوعة من البروتينات الرابطة للحمض النووي ، والتي تكون قاعدية في الغالب. ونظرًا لتعدد وظائف هذه البروتينات، فقد كان من الصعب تحديد وظيفة مشتركة لها جميعًا. ومن الأمثلة على ذلك:

دور في تضاعف الحمض النووي

تشير الأبحاث إلى أن البروتين الرابط للحمض النووي البكتيري يلعب دورًا هامًا أثناء تضاعف الحمض النووي ؛ إذ يُسهم هذا البروتين في تثبيت السلسلة المتأخرة، فضلًا عن تفاعله مع بوليميراز الحمض النووي III . وقد دُرِس دور البروتين الرابط للحمض النووي أحادي السلسلة (SSB) أثناء تضاعف الحمض النووي في خلايا الإشريكية القولونية ، وتحديدًا التفاعلات بين SSB والوحدة الفرعية χ من بوليميراز الحمض النووي III في بيئات ذات تركيزات ملحية متفاوتة. [ 5 ]

في عملية تضاعف الحمض النووي عند موقع السلسلة المتأخرة، يقوم إنزيم بوليميراز الحمض النووي III بإزالة النيوكليوتيدات بشكل فردي من البروتين الرابط للحمض النووي. يؤدي عدم استقرار نظام SSB/DNA إلى تفكك سريع لـ SSB، مما يعيق عملية تضاعف الحمض النووي. وقد أظهرت الأبحاث أن الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) يُثبَّت من خلال تفاعل SSB مع الوحدة الفرعية χ لإنزيم بوليميراز الحمض النووي III في بكتيريا الإشريكية القولونية، مما يهيئه للتضاعف عن طريق الحفاظ على التكوين الصحيح الذي يزيد من ألفة ارتباط الإنزيمات بـ ssDNA. علاوة على ذلك، يمنع ارتباط SSB بإنزيم بوليميراز الحمض النووي III عند شوكة التضاعف تفكك SSB، وبالتالي يزيد من كفاءة إنزيم بوليميراز الحمض النووي III في تخليق سلسلة DNA جديدة.

أمثلة

H-NS

[ 6 ] (أ) يُحاط بوليميراز الحمض النووي الريبي (RNA) عند المحفز بحمض نووي منحني. (ب) يلتف هذا الحمض النووي المنحني حول البوليميراز. (ج) يرتبط بروتين H-NS بالحمض النووي المنحني ليُثبّت بوليميراز الحمض النووي الريبي عند المحفز ويمنع حدوث النسخ. (د) تعمل الإشارات البيئية وعوامل النسخ على تحرير بروتين ربط الحمض النووي البكتيري، مما يسمح باستمرار عملية النسخ.

في البداية، كان يُعتقد أن البروتينات الرابطة للحمض النووي البكتيري تُساعد في تثبيت الحمض النووي البكتيري. أما الآن، فقد تم اكتشاف العديد من الوظائف الأخرى لهذه البروتينات، بما في ذلك تنظيم التعبير الجيني بواسطة البروتين المُكوِّن للبنية النووية الشبيه بالهيستون ، H-NS.

يبلغ وزن بروتين H-NS حوالي 15.6 كيلو دالتون، ويساعد في تنظيم عملية النسخ البكتيري عن طريق تثبيط وتنشيط جينات معينة. يرتبط H-NS بالحمض النووي DNA ذي الانحناء الذاتي. في بكتيريا الإشريكية القولونية ، يرتبط H-NS بمحفز P1، مما يقلل من إنتاج الحمض النووي الريبوزي rRNA خلال فترتي الثبات والنمو البطيء. يتشارك إنزيم بوليميراز الحمض النووي الريبوزي وبروتين H-NS الرابط للحمض النووي DNA في مواقع ارتباط متداخلة؛ ويُعتقد أن H-NS ينظم إنتاج rRNA من خلال التأثير على موقع بدء النسخ. وقد وُجد أن كلاً من H-NS وإنزيم بوليميراز الحمض النووي الريبوزي يرتبطان بمحفز P1 ويشكلان مُركبًا. عندما يرتبط H-NS مع إنزيم بوليميراز الحمض النووي الريبوزي بمنطقة المحفز، تظهر اختلافات بنيوية في الحمض النووي DNA قابلة للوصول. [ 7 ] كما وُجد أن H-NS يمكن أن يؤثر على عملية الترجمة أيضًا عن طريق الارتباط بالحمض النووي الريبوزي الرسول mRNA والتسبب في تحلله.

HU

بروتين HU هو بروتين صغير (10 كيلو دالتون [ 8 ] ) يرتبط بالحمض النووي البكتيري، ويختلف بنيويًا عن الهيستون حقيقي النواة، ولكنه يعمل وظيفيًا بشكل مشابه للهيستون عن طريق تحفيز الالتفاف الفائق السالب إلى حمض نووي دائري بمساعدة إنزيم توبويزوميراز . وقد ثبت تورط هذا البروتين في تضاعف الحمض النووي، وإعادة التركيب، والإصلاح. يتكون بروتين HU من لب حلزوني ألفا كاره للماء وذراعين شريطيين بيتا موجبَي الشحنة، ويرتبط بشكل غير نوعي بالحمض النووي ثنائي السلسلة بتقارب منخفض، ولكنه يرتبط بالحمض النووي المُعدَّل - مثل الوصلات، والشقوق، والفجوات، والشوكات، والزوائد - بتقارب عالٍ. ترتبط الذراعان بالأخدود الصغير للحمض النووي في حالات التقارب المنخفض؛ وفي حالات التقارب العالي، يتفاعل أحد مكونات اللب الحلزوني ألفا مع الحمض النووي أيضًا. ومع ذلك، لا تقتصر وظيفة هذا البروتين على الحمض النووي فقط؛ يرتبط HU أيضًا بالحمض النووي الريبي (RNA) والهجائن DNA-RNA بنفس قوة ارتباط الحمض النووي الريبي فائق الالتفاف. [ 9 ]

كشفت الأبحاث الحديثة أن بروتين HU يرتبط بانتقائية عالية مع الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) الخاص بـ rpoS، [ 10 ] وهو نسخة من عامل سيجما للاستجابة للإجهاد في بوليميراز الحمض النووي الريبوزي، ويحفز ترجمة البروتين. إضافةً إلى هذه الوظيفة على الحمض النووي الريبوزي، فقد ثبت أيضًا أن HU يرتبط بـ DsrA، وهو حمض نووي ريبوزي صغير غير مشفر ينظم عملية النسخ عن طريق تثبيط H-NS ويحفز الترجمة عن طريق زيادة التعبير عن rpoS. تشير هذه التفاعلات إلى أن لبروتين HU تأثيرات متعددة على النسخ والترجمة في الخلايا البكتيرية.

الاتحاد الدولي لهوكي الجليد

عامل التكامل المضيف (IHF) ليس بروتينًا مرتبطًا بالنواة موجودًا فقط في البكتيريا سالبة الغرام. [ 11 ] وهو عبارة عن ثنائي غير متجانس بوزن 20 كيلو دالتون، يتكون من وحدتين فرعيتين α و β ترتبطان بالتسلسل 5' - WATCAANNNNTTR - 3' وتُحدثان انحناءً في الحمض النووي DNA بزاوية 160 درجة تقريبًا. [ 12 ] تحتوي أذرع β من IHF على بقايا برولين تُساعد على تثبيت انحناءات الحمض النووي DNA. تُساعد هذه الانحناءات على ضغط الحمض النووي DNA والسماح بالالتفاف الفائق . تعتمد طريقة الارتباط بالحمض النووي DNA على العوامل البيئية، مثل تركيز الأيونات الموجودة. مع التركيز العالي لأيونات كلوريد البوتاسيوم (KCl)، يكون انحناء الحمض النووي DNA ضعيفًا. وقد وُجد أن انحناء الحمض النووي DNA يكون أكثر حدة عندما يكون تركيز KCl أقل من 100 ملي مولار، ويكون تركيز IHF منخفضًا. [ 13 ]

اكتُشف عامل IHF كعامل مساعد ضروري لإعادة تركيب عاثية λ في بكتيريا الإشريكية القولونية. وفي عام 2016، تبيّن أن IHF يلعب دورًا محوريًا في نظامي CRISPR من النوع الأول والثاني. إذ يُسهم بشكل كبير في تمكين مُركّب Cas1-Cas2 من دمج فواصل جديدة في تسلسل CRISPR. ويُعتقد أن انحناء الحمض النووي بواسطة IHF يُغيّر المسافة بين الأخاديد الرئيسية والثانوية للحمض النووي، مما يسمح لمُركّب Cas1-Cas2 بالتلامس مع قواعد الحمض النووي. [ 14 ] تُعدّ هذه وظيفة أساسية في نظام CRISPR، حيث تضمن إضافة الفواصل الجديدة دائمًا في بداية تسلسل CRISPR بجوار التسلسل القائد. ويضمن هذا التوجيه للدمج بواسطة IHF إضافة الفواصل بشكل متسلسل زمنيًا، مما يُتيح حماية أفضل ضد أحدث عدوى فيروسية. [ 15 ]

مقارنة

الجدول 1. مقارنة بعض البروتينات الرابطة للحمض النووي
بروتين ربط الحمض النوويمقاسبناءموقع الربطتأثير
H-NS15.6 كيلو دالتونيوجد في شكل ثنائيات لمنع بوليميراز الحمض النووي الريبي فعليًا من الارتباط بالمحفزيرتبط بالحمض النووي المنحني، ويرتبط بمحفز P1 في بكتيريا الإشريكية القولونيةتنظيم التعبير الجيني
HU10 كيلو دالتونلب حلزوني ألفا وذراعان شريطيان بيتا مشحونان إيجابياًيرتبط بشكل غير محدد بالحمض النووي المزدوج، ويرتبط بـ DsrA، وهو حمض نووي ريبوزي صغير غير مشفر ينظم عملية النسخ.يحفز الالتفاف الفائق السلبي في الحمض النووي الدائري
الاتحاد الدولي لهوكي الجليد22 كيلو دالتونثنائي غير متجانس αβαβيرتبط بتسلسلات محددة من الحمض النووييُحدث انحناءات في الحمض النووي

الآثار والبحوث المستقبلية

لا تقتصر وظائف البروتينات الرابطة للحمض النووي البكتيري على تضاعف الحمض النووي فحسب، بل يدرس الباحثون مسارات أخرى تؤثر فيها هذه البروتينات. من المعروف أن البروتين الرابط للحمض النووي H-NS يلعب دورًا في تنظيم الكروموسومات وتنظيم الجينات؛ ومع ذلك، أكدت دراسات حديثة دوره أيضًا في تنظيم وظائف الأسواط بشكل غير مباشر . [ 16 ] تشمل بعض الروابط التنظيمية للحركة التي يؤثر فيها H-NS جزيء الإشارة الحلقي ثنائي فوسفات الغوانوزين (cdGMP) ، والبروتين المنظم للغشاء الحيوي CsgD، وعوامل سيجما σ(S) و σ(F). تهدف دراسات أخرى إلى تحديد كيفية تأثير هذا البروتين المنظم للنواة على حركة الخلية من خلال مسارات تنظيمية أخرى.

استخدم باحثون آخرون بروتينات ربط الحمض النووي البكتيري لدراسة السالمونيلا المعوية نمط التيفيموريوم، حيث تُفعَّل جينات نظام الإفراز من النوع السادس (T6SS) نتيجةً لعدوى الخلايا البلعمية. عند إصابة الخلايا بالسالمونيلا المعوية نمط التيفيموريوم، يمكن تحسين كفاءة هذه الجينات من خلال آلية الاستشعار والقتل باستخدام إسكات بروتين H-NS الخاص بنظام الإفراز من النوع السادس. [ 17 ] وقد طُوِّرت فحوصات تجمع بين دمج الجينات المُبلِّغة، وفحوصات إزاحة الهجرة الكهربية، وبصمة الحمض النووي، والمجهر الفلوري لإسكات مجموعة جينات نظام الإفراز من النوع السادس بواسطة بروتين H-NS المُكوِّن لبنية النواة الشبيهة بالهيستون.

انظر أيضاً

مراجع

  1. غريفيث، أنتوني؛ ويسلر، سوزان؛ كارول، شون؛ دوبلي، جون. مقدمة في التحليل الجيني (  الطبعة العاشرة). نيويورك: دبليو إتش فريمان وشركاه. الصفحات 428-429 . 
  2. وانغ إس إل، ليو إكس كيو (ديسمبر 1991). "يشفر جينوم البلاستيدات في كريبتوموناس فاي بروتينًا شبيهًا بـ hsp70، وبروتينًا شبيهًا بالهيستون، وبروتينًا حاملًا للأسيل" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 88 (23): 10783-7 . Bibcode : 1991PNAS...8810783W . doi : 10.1073 / pnas.88.23.10783 . PMC 53015. PMID 1961745 .  
  3. فريدمان، د. آي. (نوفمبر 1988). "عامل المضيف التكاملي: بروتين لجميع الأسباب" (ملف PDF) . الخلية . 55 (4): 545-554 . doi : 10.1016 / 0092-8674(88)90213-9 . hdl : 2027.42/27063 . PMID 2972385. S2CID 8548040 .  
  4. نيلان جي جي، لو زد، كوتيش جي إف، سوسمان إم دي، روبرتس بي سي، يوزاوا تي، روك دي إل (مارس 1993). "جين فيروس حمى الخنازير الأفريقية ذو تشابه مع بروتينات ربط الحمض النووي البكتيري، وعوامل التكامل المضيفة البكتيرية، وعامل النسخ TF1 لفيروس العاثية العصوية SPO1" . مجلة أبحاث الأحماض النووية . 21 (6): 1496. doi : 10.1093/ nar /21.6.1496 . PMC 309344. PMID 8464748 .  
  5. ويت جي، أوربانك سي، كيرث يو (أغسطس 2003). "وحدة فرعية χ من بوليميراز الحمض النووي III تربط بروتين ربط الحمض النووي أحادي السلسلة بآلية تضاعف الحمض النووي البكتيري" . أبحاث الأحماض النووية . 31 (15): 4434-4440 . doi : 10.1093/nar/gkg498 . PMC 169888. PMID 12888503 .  
  6. دورمان، تشارلز جيه؛ ديغان، بادريغ (1 أبريل 2003). "تنظيم التعبير الجيني بواسطة البروتينات الشبيهة بالهيستون في البكتيريا". الرأي الحالي في علم الوراثة والتطور . 13 (2): 179-184 . doi : 10.1016/S0959-437X(03)00025-X . PMID 12672495 . 
  7. شرودر، أو.، وواغنر، ر. (مايو 2000). "بروتين H-NS البكتيري الرابط للحمض النووي يثبط نسخ الحمض النووي الريبوزي الريبوسومي عن طريق احتجاز بوليميراز الحمض النووي الريبوزي في مركب البدء". مجلة البيولوجيا الجزيئية . 298 (5): 737-748 . doi : 10.1006/jmbi.2000.3708 . PMID 10801345 . 
  8. سيربان د، أرسينيغاس إس إف، فورجياس سي إي، توماس جي جي (أبريل 2003). "بنية وديناميكية بروتين HU الرابط للحمض النووي في بكتيريا B. stearothermophilus، تم دراستها باستخدام مطيافية رامان ومطيافية رامان فوق البنفسجية الرنينية" . علم البروتين . 12 (4): 861-870 . doi : 10.1110/ps.0234103 . PMC 2323852. PMID 12649443 .  
  9. بالاندينا أ، كاماشيف د، روفيير-يانيف ج (أغسطس 2002). "يتعرف البروتين البكتيري الشبيه بالهيستون HU تحديدًا على تراكيب متشابهة في جميع الأحماض النووية: الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)، والحمض النووي الريبوزي (RNA)، وهجائنهما" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 277 (31): 27622-27628 . doi : 10.1074/jbc.M201978200 . PMID 12006568 . 
  10. ^ بالاندينا أ، كلاريت إل، هينج-أرونيس آر، روفيير-يانيف جي (فبراير 2001). "إن بروتين الإشريكية القولونية الشبيه بالهيستون HU ينظم ترجمة rpoS" . علم الأحياء الدقيقة الجزيئية . 39 (4): 1069–79 . دوى : 10.1046/j.1365-2958.2001.02305.x . بميد 11251825 . 
  11. ديلون إس سي، دورمان سي جيه (مارس 2010). "البروتينات المرتبطة بالنواة البكتيرية، وبنية النواة، والتعبير الجيني". مجلة نيتشر ريفيوز. علم الأحياء الدقيقة . 8 (3): 185-195 . doi : 10.1038/nrmicro2261 . PMID 20140026. S2CID 33103160 .  
  12. نونيز جيه كيه، باي إل، هارينغتون إل بي، هيندر تي إل، دودنا جيه إيه (يونيو 2016). "الذاكرة المناعية لتقنية كريسبر تتطلب عاملًا مضيفًا لتحقيق الخصوصية" . الخلية الجزيئية . 62 (6): 824-833 . doi : 10.1016/j.molcel.2016.04.027 . PMID 27211867 . 
  13. لين جيه، تشين إتش، دروج بي، يان جيه (2012). "التنظيم الفيزيائي للحمض النووي بواسطة أنماط ارتباط متعددة غير محددة للحمض النووي لعامل مضيف التكامل (IHF)" . PLOS ONE . 7 (11) e49885. Bibcode : 2012PLoSO...749885L . doi : 10.1371/ journal.pone.0049885 . PMC 3498176. PMID 23166787 .  
  14. نونيز جيه كيه، باي إل، هارينغتون إل بي، هيندر تي إل، دودنا جيه إيه (يونيو 2016). "الذاكرة المناعية لتقنية كريسبر تتطلب عاملًا مضيفًا لتحقيق الخصوصية" . الخلية الجزيئية . 62 (6): 824-833 . doi : 10.1016/j.molcel.2016.04.027 . PMID 27211867 . 
  15. سوريك ر، لورانس سي إم، ويدينهيفت ب (2013). "أنظمة المناعة التكيفية بوساطة تقنية كريسبر في البكتيريا والعتائق" . المراجعة السنوية للكيمياء الحيوية . 82 (1): 237-266 . doi : 10.1146/annurev-biochem-072911-172315 . PMID 23495939 . 
  16. كيم إي إيه، بلير دي إف (أكتوبر 2015). "وظيفة البروتين الشبيه بالهيستون H-NS في حركة الإشريكية القولونية: أدوار تنظيمية متعددة بدلاً من التأثير المباشر على محرك السوط" . مجلة علم البكتيريا . 197 (19): 3110-20 . doi : 10.1128/JB.00309-15 . PMC 4560294. PMID 26195595 .  
  17. برونيه واي آر، خضر إيه، لوغر إل، أوسيل إل، مينيو تي، ريمسكي إس، كاسكاليس إي (يوليو 2015). "إسكات H-NS لنظام الإفراز من النوع السادس المشفر بواسطة جزيرة الممرضية 6 في السالمونيلا يحد من قدرة السالمونيلا المعوية النمط المصلي التيفيموريوم على قتل البكتيريا الأخرى" . العدوى والمناعة . 83 (7): 2738-50 . doi : 10.1128/IAI.00198-15 . PMC 4468533. PMID 25916986 .