تسلسل البروتين

📅 آخر تحديث: ٢٦ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٦ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 4 صور
الموسوعة الحرة
استخدام جهاز تسلسل البروتين والببتيد من بيكمان-سبينكو، 1970

يُعدّ تسلسل البروتينات عملية عملية لتحديد تسلسل الأحماض الأمينية لبروتين أو ببتيد ، سواءً كان كاملاً أو جزءاً منه . وقد يُستخدم هذا التسلسل لتحديد هوية البروتين أو لتوصيف تعديلاته اللاحقة للترجمة . عادةً، يوفر التسلسل الجزئي للبروتين معلومات كافية (علامة تسلسل واحدة أو أكثر) لتحديد هويته بالرجوع إلى قواعد بيانات تسلسلات البروتينات المستمدة من الترجمة النظرية للجينات .

الطريقتان الرئيسيتان المباشرتان لتحديد تسلسل البروتينات هما قياس الطيف الكتلي وتحليل إدمان باستخدام جهاز تسلسل البروتينات . تُعدّ طرق قياس الطيف الكتلي حاليًا الأكثر استخدامًا لتحديد تسلسل البروتينات والتعرف عليها، لكن تحليل إدمان لا يزال أداة قيّمة لتوصيف الطرف الأميني للبروتين .

تحديد تركيب الأحماض الأمينية

تفسير تسلسل البروتين: مخطط لبروتين جديد سيتم هندسته في الخميرة

غالبًا ما يكون من المستحسن معرفة التركيب غير المرتب للأحماض الأمينية في البروتين قبل محاولة إيجاد التسلسل المرتب، إذ يمكن استخدام هذه المعرفة لتسهيل اكتشاف الأخطاء في عملية التسلسل أو للتمييز بين النتائج الغامضة. كما يمكن استخدام معرفة تردد بعض الأحماض الأمينية لاختيار البروتياز المناسب لهضم البروتين. ويمكن أيضًا تحديد إدخال مستويات منخفضة من الأحماض الأمينية غير القياسية (مثل النورليوسين) في البروتينات. [ 1 ] إحدى الطرق العامة لتحديد تردد الأحماض الأمينية، والتي يُشار إليها غالبًا بتحليل الأحماض الأمينية [ 2 ] ، هي كما يلي:

  1. قم بتحليل كمية معروفة من البروتين إلى أحماضه الأمينية المكونة لها.
  2. افصل الأحماض الأمينية وقم بتحديد كميتها بطريقة ما.

التحلل المائي

تُجرى عملية التحلل المائي بتسخين عينة من البروتين في حمض الهيدروكلوريك بتركيز 6 مولار إلى درجة حرارة تتراوح بين 100 و110  درجة مئوية لمدة 24 ساعة أو أكثر. قد تتطلب البروتينات التي تحتوي على العديد من المجموعات الكارهة للماء فترات تسخين أطول. مع ذلك، فإن هذه الظروف قاسية لدرجة أنها تؤدي إلى تحلل بعض الأحماض الأمينية ( السيرين ، والثريونين ، والتيروسين ، والتريبتوفان ، والجلوتامين ، والسيستين ). ولتجاوز هذه المشكلة، يقترح موقع Biochemistry Online تسخين عينات منفصلة لفترات زمنية مختلفة، وتحليل كل محلول ناتج، ثم استقراء النتائج إلى زمن التحلل المائي الصفري. ويقترح راستال استخدام مجموعة متنوعة من الكواشف لمنع التحلل أو تقليله، مثل كواشف الثيول أو الفينول لحماية التريبتوفان والتيروسين من تأثير الكلور، وأكسدة السيستين مسبقًا. كما يقترح قياس كمية الأمونيا المتصاعدة لتحديد مدى تحلل الأميد .

الفصل والقياس الكمي

يمكن فصل الأحماض الأمينية باستخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني، ثم تحويلها إلى مشتقات لتسهيل الكشف عنها. والأكثر شيوعاً، يتم تحويل الأحماض الأمينية إلى مشتقات ثم فصلها باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس .

يُقدّم المركز الوطني للبحوث الفيزيائية (NTRC) مثالًا على كروماتوغرافيا التبادل الأيوني باستخدام البوليسترين المُسلفن كمادة أساسية، حيث تُضاف الأحماض الأمينية في محلول حمضي ويُمرّر محلول منظم ذو درجة حموضة متزايدة تدريجيًا عبر العمود. تُفصل الأحماض الأمينية عندما تصل درجة الحموضة إلى نقاط التعادل الكهربائي الخاصة بها . بعد فصل الأحماض الأمينية، تُحدد كمياتها بإضافة كاشف يُكوّن مشتقًا ملونًا. إذا كانت كميات الأحماض الأمينية تزيد عن 10 نانومول، يُمكن استخدام النينهيدرين لهذا الغرض؛ إذ يُعطي لونًا أصفر عند تفاعله مع البرولين، ولونًا أرجوانيًا زاهيًا مع الأحماض الأمينية الأخرى. يتناسب تركيز الحمض الأميني طرديًا مع امتصاص المحلول الناتج. أما مع الكميات الصغيرة جدًا، التي تصل إلى 10 بيكومول، فيُمكن تكوين مشتقات فلورية باستخدام كواشف مثل أورثو-فثالديهايد (OPA) أو فلوريسكامين .

قد تستخدم عملية الاشتقاق قبل العمود كاشف إدمان لإنتاج مشتق يُكشف عنه بواسطة الأشعة فوق البنفسجية. ويمكن تحقيق حساسية أعلى باستخدام كاشف يُنتج مشتقًا فلوريًا. تُخضع الأحماض الأمينية المشتقة لعملية فصل كروماتوغرافي عكسي الطور، عادةً باستخدام عمود سيليكا C8 أو C18 وتدرج إيلاج مُحسَّن . تُكشف الأحماض الأمينية المُستخلصة باستخدام كاشف للأشعة فوق البنفسجية أو كاشف فلوري، وتُقارن مساحات الذروة بمساحات الذروة للمعايير المشتقة لتحديد كمية كل حمض أميني في العينة.

تحليل الأحماض الأمينية الطرفية N

طريقة سانجر لتحليل المجموعة الطرفية للببتيد: أ- اشتقاق الطرف الأميني باستخدام كاشف سانجر (DNFB)، ب- التحلل المائي الحمضي الكامل لببتيد ثنائي نيتروفينيل

يُعدّ تحديد الحمض الأميني الذي يُشكّل الطرف الأميني (N -terminus) لسلسلة الببتيد مفيدًا لسببين: أولهما، تسهيل ترتيب تسلسل أجزاء الببتيد الفردية لتكوين سلسلة كاملة، وثانيهما، أن الجولة الأولى من تحليل إدمان غالبًا ما تكون ملوثة بالشوائب، وبالتالي لا تُعطي تحديدًا دقيقًا للحمض الأميني الطرفي N. فيما يلي طريقة عامة لتحليل الحمض الأميني الطرفي N :

  1. قم بتفاعل الببتيد مع كاشف يقوم بوضع علامة انتقائية على الحمض الأميني الطرفي.
  2. قم بتحليل البروتين.
  3. حدد الحمض الأميني عن طريق الكروماتوغرافيا والمقارنة مع المعايير.

توجد العديد من الكواشف المختلفة التي يمكن استخدامها لتمييز الأحماض الأمينية الطرفية. تتفاعل جميعها مع مجموعات الأمين، وبالتالي ترتبط أيضًا بمجموعات الأمين في السلاسل الجانبية للأحماض الأمينية مثل الليسين. لهذا السبب، من الضروري توخي الحذر عند تفسير مخططات الكروماتوغرافيا لضمان اختيار الموضع الصحيح. من أكثر الكواشف شيوعًا كاشف سانجر ( 1-فلورو-2،4-ثنائي نيتروبنزين ) ومشتقات دانسيل مثل كلوريد دانسيل . يمكن أيضًا استخدام فينيل إيزوثيوسيانات ، وهو الكاشف المستخدم في تحلل إدمان. تنطبق هنا نفس الأسئلة كما في تحديد تركيب الأحماض الأمينية، باستثناء أنه لا حاجة إلى صبغة، حيث تنتج الكواشف مشتقات ملونة، ولا يلزم سوى التحليل النوعي. لذا، لا يلزم فصل الحمض الأميني من عمود الكروماتوغرافيا، بل يكفي مقارنته بمعيار. ومن الاعتبارات الأخرى التي يجب أخذها في الاعتبار أنه نظرًا لأن أي مجموعات أمينية ستتفاعل مع كاشف الوسم، فلا يمكن استخدام كروماتوغرافيا التبادل الأيوني، وينبغي استخدام كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة أو كروماتوغرافيا السائل عالي الضغط بدلاً من ذلك.

تحليل الأحماض الأمينية الطرفية C

عدد الطرق المتاحة لتحليل الأحماض الأمينية الطرفية C أقل بكثير من عدد الطرق المتاحة لتحليل الأحماض الأمينية الطرفية N. الطريقة الأكثر شيوعًا هي إضافة إنزيمات الكاربوكسيببتيداز إلى محلول البروتين، وأخذ عينات على فترات منتظمة، وتحديد الحمض الأميني الطرفي من خلال تحليل رسم بياني لتركيزات الأحماض الأمينية مع مرور الوقت. ستكون هذه الطريقة مفيدة جدًا في حالة عديدات الببتيد والنهايات الأمينية المحجوبة للبروتين. سيساعد تسلسل الطرف C بشكل كبير في التحقق من البنى الأولية للبروتينات المتوقعة من تسلسلات الحمض النووي، وفي الكشف عن أي معالجة لاحقة للترجمة لمنتجات الجينات من تسلسلات الكودونات المعروفة.

تدهور إدمان

يُعدّ تحلل إدمان تفاعلاً بالغ الأهمية في تحديد تسلسل البروتينات، إذ يُتيح اكتشاف التركيب المُرتب للأحماض الأمينية في البروتين. وتُستخدم أجهزة تسلسل إدمان الآلية على نطاق واسع حاليًا، وهي قادرة على تحديد تسلسل الببتيدات التي يصل طولها إلى 50 حمضًا أمينيًا تقريبًا. فيما يلي مخطط تفاعل لتحديد تسلسل البروتين باستخدام تحلل إدمان؛ وسيتم شرح بعض الخطوات بالتفصيل لاحقًا.

  1. قم بكسر أي روابط ثنائية الكبريتيد في البروتين باستخدام عامل مختزل مثل 2-مركابتوإيثانول . قد يكون من الضروري استخدام مجموعة حماية مثل حمض اليودوأسيتيك لمنع إعادة تكوين هذه الروابط.
  2. افصل ونقّي السلاسل الفردية للمركب البروتيني، إذا كان هناك أكثر من سلسلة واحدة.
  3. حدد تركيب الأحماض الأمينية لكل سلسلة.
  4. حدد الأحماض الأمينية الطرفية لكل سلسلة.
  5. قسّم كل سلسلة إلى أجزاء يقل طولها عن 50 حمضًا أمينيًا.
  6. افصل الأجزاء ونقّها.
  7. حدد تسلسل كل جزء.
  8. كرري العملية بنمط مختلف من الانقسام.
  9. قم ببناء تسلسل البروتين الكلي.

الهضم إلى أجزاء ببتيدية

لا يمكن تحديد تسلسل الببتيدات التي يزيد طولها عن 50-70 حمضًا أمينيًا بدقة باستخدام طريقة إدمان. لذا، يجب تقسيم سلاسل البروتين الطويلة إلى أجزاء صغيرة يمكن تحديد تسلسلها بشكل فردي. تتم عملية الهضم إما بواسطة إنزيمات الببتيداز الداخلية مثل التربسين أو البيبسين ، أو بواسطة كواشف كيميائية مثل بروميد السيانوجين . تُنتج الإنزيمات المختلفة أنماطًا مختلفة من التحلل، ويمكن استخدام التداخل بين الأجزاء لبناء التسلسل الكلي.

رد فعل

يُمتص الببتيد المراد تحديد تسلسله على سطح صلب. ومن الركائز الشائعة ألياف زجاجية مغلفة بالبوليبرين ، وهو بوليمر كاتيون . يُضاف كاشف إدمان، فينيل إيزوثيوسيانات (PITC)، إلى الببتيد الممتص، مع محلول منظم قاعدي خفيف يحتوي على 12% من ثلاثي ميثيل أمين . يتفاعل هذا الكاشف مع مجموعة الأمين في الحمض الأميني الطرفي N.

يمكن بعد ذلك فصل الحمض الأميني الطرفي بشكل انتقائي بإضافة حمض لا مائي . ثم يتحول المشتق إلى فينيل ثيوهيدانتوين مُستبدل ، والذي يمكن غسله وتحديده بواسطة الكروماتوغرافيا، ويمكن تكرار هذه العملية. تبلغ كفاءة كل خطوة حوالي 98%، مما يسمح بتحديد حوالي 50 حمضًا أمينيًا بدقة.

جهاز تسلسل البروتين Beckman-Coulter Porton LF3000G

جهاز تسلسل البروتين

جهاز تسلسل البروتينات [ 3 ] هو آلة تُجري عملية تحلل إدمان بطريقة آلية. تُثبّت عينة من البروتين أو الببتيد في وعاء التفاعل الخاص بجهاز التسلسل، ثم تُجرى عملية تحلل إدمان. في كل دورة، يُحرر حمض أميني واحد من الطرف الأميني ( N -terminus) للبروتين أو الببتيد، ويُشتق منه حمض أميني، ثم يُحدد الحمض الأميني المشتق بواسطة كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC). تُكرر عملية التسلسل على كامل الببتيد حتى يتم الحصول على التسلسل القابل للقياس بالكامل، أو لعدد محدد مسبقًا من الدورات.

التعرف بواسطة مطياف الكتلة

تحديد البروتينات هو عملية تسمية بروتين معين (POI) بناءً على تسلسل الأحماض الأمينية الخاص به. عادةً، يكفي تحديد جزء من تسلسل البروتين تجريبيًا لتحديد هويته بالرجوع إلى قواعد بيانات تسلسلات البروتينات المستنتجة من تسلسلات الحمض النووي لجيناتها. قد تشمل المزيد من توصيف البروتين تأكيد النهايتين الأمينية والكربوكسيلية (N-terminal) للبروتين محل الاهتمام، وتحديد المتغيرات التسلسلية، وتحديد أي تعديلات ما بعد الترجمة.

الهضم البروتيني

تم وصف مخطط عام لتحديد البروتينات. [ 4 ] [ 5 ]

  1. يتم عزل البروتين المستهدف، عادةً عن طريق SDS-PAGE أو الكروماتوغرافيا .
  2. يمكن تعديل البروتين المعزول كيميائياً لتحقيق استقرار بقايا السيستين (مثل S-amidomethylation أو S-carboxymethylation).
  3. يُهضم البروتين المستهدف (POI) بواسطة بروتياز متخصص لإنتاج الببتيدات. يُعد التربسين ، الذي يقطع بشكل انتقائي من الطرف الكربوكسيلي لبقايا الليسين أو الأرجينين، البروتياز الأكثر استخدامًا. تشمل مزاياه ما يلي: أولًا، شيوع بقايا الليسين والأرجينين في البروتينات؛ ثانيًا، التخصص العالي للإنزيم؛ ثالثًا، استقرار الإنزيم؛ رابعًا، ملاءمة الببتيدات الناتجة عن هضم التربسين لتحليل الطيف الكتلي.
  4. يمكن إزالة الأملاح من الببتيدات للتخلص من الملوثات القابلة للتأين، ثم تحليلها باستخدام مطياف الكتلة MALDI-TOF . قد يوفر القياس المباشر لكتل ​​الببتيدات معلومات كافية لتحديد البروتين (انظر: بصمة كتلة الببتيد )، ولكن غالبًا ما يُستخدم تجزئة إضافية للببتيدات داخل مطياف الكتلة للحصول على معلومات حول تسلسلها. بدلاً من ذلك، يمكن إزالة الأملاح من الببتيدات وفصلها باستخدام كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء ذي الطور المعكوس (HPLC) ، ثم إدخالها إلى مطياف الكتلة عبر مصدر التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI) . قد يوفر مطياف الكتلة المقترن بالكروماتوغرافيا السائلة مع التأين بالرذاذ الإلكتروني (LC-ESI-MS) معلومات أكثر من مطياف الكتلة MALDI-MS لتحديد البروتين، ولكنه يستغرق وقتًا أطول للجهاز.
  5. بحسب نوع مطياف الكتلة، قد يحدث تفتت أيونات الببتيد عبر آليات متنوعة، مثل التفكك الناتج عن التصادم (CID) أو التحلل اللاحق للمصدر (PSD). وفي كلتا الحالتين، يوفر نمط أيونات التفتت للببتيد معلومات حول تسلسله.
  6. تُقارن المعلومات، بما في ذلك الكتلة المقاسة لأيونات الببتيد المفترضة وأيوناتها المجزأة، مع قيم الكتلة المحسوبة من التحليل البروتيني والتجزئة الحاسوبي لقواعد بيانات تسلسلات البروتينات. يُعتبر التطابق ناجحًا إذا تجاوزت نتيجته عتبةً محددة بناءً على معايير التحليل. حتى في حال عدم وجود البروتين الفعلي في قاعدة البيانات، فإن المطابقة المتسامحة مع الأخطاء تسمح بالتعرف المبدئي على البروتين بناءً على التشابه مع البروتينات المتماثلة . تتوفر العديد من حزم البرامج لإجراء هذا التحليل.
  7. تقوم حزم البرامج عادةً بإنشاء تقرير يوضح هوية (رمز الوصول) كل بروتين تم تحديده، ودرجة مطابقته، وتوفر مقياسًا للقوة النسبية للمطابقة عند تحديد بروتينات متعددة.
  8. يُستخدم غالبًا رسم تخطيطي للببتيدات المتطابقة على تسلسل البروتين المُحدد لإظهار تغطية التسلسل (نسبة البروتين المكتشف كببتيدات). عندما يُعتقد أن البروتين محل الاهتمام أصغر بكثير من البروتين المتطابق، قد يُشير الرسم التخطيطي إلى ما إذا كان هذا البروتين جزءًا من الطرف الأميني أو الطرف الكربوكسيلي للبروتين المُحدد.

التسلسل من الصفر

يُتيح نمط تجزئة الببتيد تحديد تسلسله مباشرةً عن طريق التسلسل من الصفر . ويمكن استخدام هذا التسلسل لمطابقة قواعد بيانات تسلسلات البروتينات أو لدراسة التعديلات اللاحقة للترجمة أو التعديلات الكيميائية. كما يُمكن أن يُقدّم أدلة إضافية لتحديد البروتينات التي أُجريت بالطريقة المذكورة أعلاه.

النهايات الأمينية والكربوكسيلية

لا تتضمن الببتيدات المطابقة أثناء تحديد البروتين بالضرورة النهايات الأمينية أو الكربوكسيلية المتوقعة للبروتين المطابق. قد يعود ذلك إلى صعوبة تحديد الببتيدات الطرفية الأمينية أو الكربوكسيلية باستخدام مطياف الكتلة (كأن تكون قصيرة جدًا أو طويلة جدًا)، أو إلى تعديلها بعد الترجمة (كأستلة الطرف الأميني)، أو إلى اختلافها الحقيقي عن التوقع. يمكن تحديد التعديلات بعد الترجمة أو النهايات المبتورة من خلال فحص البيانات بدقة أكبر (أي التسلسل من الصفر ). كما قد يكون من المفيد إعادة الهضم باستخدام بروتياز ذي خصوصية مختلفة.

التعديلات اللاحقة للترجمة

بينما يمكن استخدام مقارنة تفصيلية لبيانات مطياف الكتلة مع التنبؤات المستندة إلى تسلسل البروتين المعروف لتحديد التعديلات اللاحقة للترجمة، يمكن أيضًا استخدام مناهج مُوجَّهة لاكتساب البيانات. على سبيل المثال، قد يُساعد الإثراء النوعي للببتيدات الفوسفورية في تحديد مواقع الفسفرة في البروتين. كما قد تُوفر طرق بديلة لتجزئة الببتيدات في مطياف الكتلة، مثل ETD أو ECD ، معلومات تسلسلية تكميلية.

تحديد الكتلة الكلية

الكتلة الكلية للبروتين هي مجموع كتل بقايا الأحماض الأمينية فيه، بالإضافة إلى كتلة جزيء الماء، مع مراعاة أي تعديلات لاحقة للترجمة. على الرغم من أن البروتينات تتأين بدرجة أقل من الببتيدات المشتقة منها، إلا أنه يمكن إخضاع البروتين في المحلول لتحليل الطيف الكتلي بالترذيذ الأيوني الكهربائي (ESI-MS) وقياس كتلته بدقة تصل إلى جزء واحد من 20,000 أو أفضل. غالبًا ما يكون هذا كافيًا لتأكيد النهايات (وبالتالي مطابقة الكتلة المقاسة للبروتين مع الكتلة المتوقعة من تسلسله) واستنتاج وجود أو عدم وجود العديد من التعديلات اللاحقة للترجمة.

القيود

لا ينتج عن التحلل البروتيني دائمًا مجموعة من الببتيدات سهلة التحليل تغطي التسلسل الكامل للبروتين محل الاهتمام. غالبًا لا ينتج عن تجزئة الببتيدات في مطياف الكتلة أيونات تتوافق مع الانقسام عند كل رابطة ببتيدية. وبالتالي، فإن التسلسل المستنتج لكل ببتيد ليس بالضرورة كاملاً. لا تميز طرق التجزئة القياسية بين بقايا الليوسين والإيزوليوسين نظرًا لكونهما متماثلين.

نظرًا لأن تحليل إدمان يبدأ من الطرف الأميني للبروتين، فلن ينجح إذا تم تعديل هذا الطرف كيميائيًا (مثلًا عن طريق الأسيتلة أو تكوين حمض البيروغلوتاميك). وبشكل عام، لا يُعد تحليل إدمان مفيدًا لتحديد مواقع روابط ثنائي الكبريتيد. كما أنه يتطلب كميات من الببتيد تبلغ 1 بيكومول أو أكثر للحصول على نتائج قابلة للتمييز، مما يجعله أقل حساسية من مطياف الكتلة .

التنبؤ من تسلسلات الحمض النووي DNA/RNA

في علم الأحياء، تُنتَج البروتينات عن طريق ترجمة الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA)، حيث يُشتق تسلسل البروتين من تسلسل الكودونات الموجودة في mRNA. ويتكون mRNA نفسه من خلال نسخ الجينات، وقد يخضع لتعديلات إضافية. هذه العمليات مفهومة بشكل كافٍ لاستخدام خوارزميات الحاسوب لأتمتة التنبؤ بتسلسلات البروتينات من تسلسلات الحمض النووي، كما هو الحال في مشاريع تسلسل الحمض النووي للجينوم الكامل، وقد أدى ذلك إلى إنشاء قواعد بيانات ضخمة لتسلسلات البروتينات مثل UniProt . تُعد تسلسلات البروتينات المتوقعة مصدرًا مهمًا لتحديد البروتينات باستخدام مطياف الكتلة.

تاريخياً، كانت تسلسلات البروتين القصيرة (من 10 إلى 15 حمضاً أمينياً) التي تُحدد بواسطة تحليل إدمان تُترجم عكسياً إلى تسلسلات الحمض النووي التي يمكن استخدامها كمجسات أو بادئات لعزل النسخ الجزيئية للجين المقابل أو الحمض النووي المكمل. ثم يُحدد تسلسل الحمض النووي المستنسخ ويُستخدم لاستنتاج التسلسل الكامل للأحماض الأمينية للبروتين.

أدوات المعلوماتية الحيوية

توجد أدوات المعلوماتية الحيوية للمساعدة في تفسير أطياف الكتلة (انظر تسلسل الببتيد من الصفر )، لمقارنة أو تحليل تسلسلات البروتين (انظر تحليل التسلسل )، أو البحث في قواعد البيانات باستخدام تسلسلات الببتيد أو البروتين (انظر BLAST ).

تطبيقات في علم التشفير

طُرحت صعوبة تسلسل البروتينات مؤخرًا كأساس لإنشاء برامج تعمل لـ k مرة بالضبط قبل أن تتلف ذاتيًا. من المستحيل بناء مثل هذا البرنامج باستخدام البرمجيات فقط، لأن جميع البرامج قابلة للاستنساخ بطبيعتها عددًا غير محدود من المرات.

انظر أيضاً

مراجع

  1. ↑ بوغوسيان، جي، فيولاند، بي إن، دوروارد-كينغ، إي جيه، وركمان، دبليو إي، جونغ، بي إي، كين، جيه إف (يناير 1989). "التخليق الحيوي ودمج النورليوسين في البروتين بواسطة الإشريكية القولونية" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 264 (1): 531-539 . doi : 10.1016/S0021-9258(17)31291-7 . PMID 2642478 . 
  2. ↑ ميخائيل أ. ألترمان؛ بيتر هونزيكر (2 ديسمبر 2011). تحليل الأحماض الأمينية: الطرق والبروتوكولات . دار هومانا للنشر. ISBN 978-1-61779-444-5.
  3. ↑ إدمان، ب.، وبيج، ج. (مارس 1967). "جهاز تسلسل البروتينات" . المجلة الأوروبية للكيمياء الحيوية . 1 (1): 80-91 . doi : 10.1111/j.1432-1033.1967.tb00047.x . PMID 6059350 . 
  4. ↑ شيفتشينكو أ، توماس هـ، هافليس ج، أولسن ج ف، مان م (2006). "الهضم داخل الهلام لتوصيف البروتينات والبروتيومات باستخدام مطياف الكتلة". بروتوكولات الطبيعة . 1 (6): 2856-2860 . doi : 10.1038/nprot.2006.468 . PMID 17406544. S2CID 8248224 .  
  5. ↑ غوندري آر إل، وايت إم واي، موراي سي آي، كين إل إيه، فو كيو، ستانلي بي إيه، فان إيك جيه إي (أكتوبر 2009). "تحضير البروتينات والببتيدات لتحليل مطياف الكتلة في سير عمل بروتيوميات من الأسفل إلى الأعلى" . البروتوكولات الحالية في البيولوجيا الجزيئية . الفصل 10: الوحدة 10.25. doi : 10.1002/0471142727.mb1025s88 . ISBN 978-0471142720. PMC 2905857 . PMID 19816929 .  

للمزيد من القراءة

  • ستين إتش، مان إم (سبتمبر 2004). "أساسيات (وتفاصيل) تسلسل الببتيدات". مجلة نيتشر ريفيوز لعلم الأحياء الخلوي الجزيئي . 5 (9): 699-711 . doi : 10.1038/nrm1468 . PMID 15340378. S2CID 5176895 .