كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة

📅 آخر تحديث: ٢٨ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٨ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 2 صور
الموسوعة الحرة

يُعدّ التحليل الكروماتوغرافي السائل المقترن بقياس الطيف الكتلي ( LC-MS ) تقنيةً في الكيمياء التحليلية تجمع بين قدرات الفصل الفيزيائي للكروماتوغرافيا السائلة (أو HPLC ) وقدرات تحليل الكتلة لتقنية قياس الطيف الكتلي (MS). تحظى أنظمة الكروماتوغرافيا المقترنة بقياس الطيف الكتلي بشعبية واسعة في التحليل الكيميائي، نظرًا لتكامل قدرات كل تقنية على حدة. فبينما تفصل الكروماتوغرافيا السائلة مخاليط متعددة المكونات، يوفر قياس الطيف الكتلي معلومات طيفية تُساعد في تحديد (أو تأكيد الهوية المشتبه بها) لكل مكون مفصول. [ 1 ] يتميز قياس الطيف الكتلي بحساسيته العالية، كما يوفر كشفًا انتقائيًا، مما يُغني عن الحاجة إلى الفصل الكروماتوغرافي الكامل. [ 2 ] يُعدّ التحليل الكروماتوغرافي السائل المقترن بقياس الطيف الكتلي مناسبًا أيضًا لعلم الأيض نظرًا لتغطيته الواسعة لمجموعة كبيرة من المواد الكيميائية. [ 3 ] يمكن استخدام هذه التقنية المزدوجة لتحليل المركبات الكيميائية الحيوية والعضوية وغير العضوية الشائعة في العينات المعقدة ذات الأصل البيئي والبيولوجي. لذا، يمكن تطبيق تقنية LC-MS في قطاعات واسعة النطاق، تشمل التكنولوجيا الحيوية ، ومراقبة البيئة، وتصنيع الأغذية ، والصناعات الدوائية ، والكيميائية الزراعية ، ومستحضرات التجميل . [ 4 ] [ 5 ] ومنذ أوائل العقد الأول من الألفية الثانية، بدأ استخدام تقنية LC-MS (أو تحديدًا LC- MS/MS ) [ 6 ] في التطبيقات السريرية. [ 7 ]

بالإضافة إلى أجهزة كروماتوغرافيا السائل وقياس الطيف الكتلي، يحتوي نظام LC-MS على واجهة تنقل بكفاءة المكونات المفصولة من عمود LC إلى مصدر أيونات MS. [ 5 ] [ 8 ] هذه الواجهة ضرورية لأن أجهزة LC وMS غير متوافقة أساسًا. فبينما يكون الطور المتحرك في نظام LC سائلًا مضغوطًا، تعمل أجهزة تحليل MS عادةً تحت فراغ عالٍ. لذا، لا يمكن ضخ الناتج مباشرةً من عمود LC إلى مصدر MS. عمومًا، تُعد الواجهة جزءًا بسيطًا ميكانيكيًا من نظام LC-MS، حيث تنقل أكبر كمية ممكنة من المادة المراد تحليلها ، وتزيل جزءًا كبيرًا من الطور المتحرك المستخدم في LC، وتحافظ على الهوية الكيميائية لمنتجات الكروماتوغرافيا ( خاملة كيميائيًا ). وكشرط أساسي، يجب ألا تتداخل الواجهة مع كفاءة التأين وظروف الفراغ في نظام MS. [ 5 ] تعتمد معظم واجهات LC-MS المستخدمة على نطاق واسع حاليًا على استراتيجيات التأين بالضغط الجوي (API) مثل التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI) والتأين الكيميائي بالضغط الجوي (APCI) والتأين الضوئي بالضغط الجوي (APPI). وقد أصبحت هذه الواجهات متاحة في التسعينيات بعد عقدين من البحث والتطوير. [ 9 ] [ 8 ]

تاريخ

يُعدّ اقتران الكروماتوغرافيا مع مطياف الكتلة استراتيجية تحليل كيميائي متطورة تعود إلى خمسينيات القرن الماضي. وقد طُرحت تقنية كروماتوغرافيا الغاز المقترنة بمطياف الكتلة (GC-MS) لأول مرة عام 1952، عندما كان أ. ت. جيمس وأ. ج. ب. مارتن يسعيان لتطوير تقنيات الفصل المتسلسل وتحليل الكتلة. [ 10 ] في كروماتوغرافيا الغاز، تُفصل المواد المراد تحليلها من عمود الفصل على شكل غاز، وكان ربطها بمصادر تأين الإلكترون ( EI ) أو التأين الكيميائي ( CI ) في نظام مطياف الكتلة تحديًا تقنيًا أبسط. ولهذا السبب، كان تطوير أنظمة GC-MS أسرع من أنظمة LC-MS، وقد تم تسويق هذه الأنظمة تجاريًا لأول مرة في سبعينيات القرن الماضي. [ 8 ] استغرق تطوير أنظمة LC-MS وقتًا أطول من أنظمة GC-MS، وكان ذلك مرتبطًا ارتباطًا مباشرًا بتطوير واجهات مناسبة. بدأ فيكتور تالروز وزملاؤه في روسيا تطوير تقنية كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) في أواخر الستينيات، [ 11 ] [ 12 ] عندما استخدموا لأول مرة الأنابيب الشعرية لربط عمود كروماتوغرافيا السائل بمصدر تأين إلكتروني (EI). [ 13 ] [ 9 ] وفي عام 1973، درس ماكلافيرتي وزملاؤه استراتيجية مماثلة، حيث ربطوا عمود كروماتوغرافيا السائل بمصدر تأين كيميائي (CI)، [ 14 ] مما سمح بتدفق أكبر للسائل إلى المصدر. كانت هذه الطريقة الأولى والأكثر وضوحًا لربط كروماتوغرافيا السائل بمطياف الكتلة، وعُرفت باسم واجهة مدخل الأنبوب الشعري. تميزت هذه الواجهة الرائدة لتقنية LC-MS بنفس قدرات التحليل لتقنية كروماتوغرافيا الغاز - مطياف الكتلة ( GC-MS) ، واقتصرت على المواد التحليلية المتطايرة نسبيًا والمركبات غير القطبية ذات الكتلة الجزيئية المنخفضة (أقل من 400 دالتون). في واجهة مدخل الأنبوب الشعري، كان تبخر الطور المتحرك داخل الأنبوب الشعري أحد المشكلات الرئيسية. خلال السنوات الأولى لتطوير تقنية LC-MS، طُرحت بدائل الربط المباشر وغير المباشر. عمومًا، تضمن الربط غير المباشر جمع الأجزاء، وتبخير المذيب، ونقل المواد المراد تحليلها إلى مطياف الكتلة باستخدام المجسات. كانت عملية معالجة المواد المراد تحليلها غير المباشرة تستغرق وقتًا طويلًا، كما أنها تنطوي على خطر تلوث العينة. وسرعان ما تبيّن أن تحليل الخلائط المعقدة يتطلب تطوير حل ربط مباشر مؤتمت بالكامل في تقنية LC-MS. [ 9 ]

يكمن سر نجاح تقنية LC-MS وانتشار استخدامها كأداة تحليلية روتينية في واجهة ومصدر الأيونات بين نظام LC السائل ونظام MS ذي الأساس الفراغي. وقد مثّلت الواجهات التالية مراحل تمهيدية للوصول إلى واجهات التأين الحديثة ذات الضغط الجوي، ويتم وصفها هنا لأهميتها التاريخية.

واجهة الحزام المتحرك

طُوِّرت واجهة الحزام المتحرك (MBI) بواسطة ماكفادين وآخرون عام 1977، وسُوِّقت تجاريًا بواسطة فينيغان. [ 15 ] تتكون هذه الواجهة من حزام متحرك لا نهائي، يُرسب عليه ناتج عمود كروماتوغرافيا السائل (LC) على شكل شريط. على الحزام، يُبخر المذيب عن طريق التسخين اللطيف، ثم تُصرَّف أبخرة المذيب بكفاءة تحت ضغط منخفض في حجرتين مفرغتين. بعد إزالة الطور السائل، يمر الحزام فوق سخان يُزيل امتزاز المواد المراد تحليلها بسرعة إلى مصدر أيونات مطياف الكتلة (MS). من أهم مزايا واجهة الحزام المتحرك توافقها مع نطاق واسع من ظروف الكروماتوغرافيا. [ 9 ] استُخدمت واجهة الحزام المتحرك بنجاح في تطبيقات كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) بين عامي 1978 و1990، لأنها سمحت بربط أجهزة كروماتوغرافيا السائل بأجهزة مطياف الكتلة باستخدام مصادر أيونات التأين الإلكتروني (EI) والتأين الكيميائي (CI) وقصف الذرات السريعة (FAB). كانت أنظمة مطياف الكتلة الأكثر شيوعًا التي تُربط بأعمدة كروماتوغرافيا السائل عبر واجهات الحزام المتحرك هي أجهزة القطاع المغناطيسي وأجهزة رباعي الأقطاب . أتاحت واجهات MBI لتقنية LC-MS استخدام مطياف الكتلة على نطاق واسع في تحليل الأدوية والمبيدات الحشرية والستيرويدات والقلويدات والهيدروكربونات العطرية متعددة الحلقات . إلا أن هذه الواجهة لم تعد مستخدمة بسبب تعقيدها الميكانيكي والصعوبات المرتبطة بتجديد الحزام (أو تنظيفه)، فضلاً عن عدم قدرتها على التعامل مع الجزيئات الحيوية شديدة الحساسية.

واجهة إدخال السائل المباشر

طُوِّرت واجهة الإدخال المباشر للسائل (DLI) عام 1980. وكان الهدف من هذه الواجهة حل مشكلة تبخر السائل داخل مدخل الأنبوب الشعري. في هذه الواجهة، يُدفع جزء صغير من تدفق جهاز كروماتوغرافيا السائل (LC) عبر فتحة صغيرة أو غشاء (  قطره عادةً 10 ميكرومتر) لتشكيل نفاثة سائلة تتكون من قطرات صغيرة تُجفف لاحقًا في حجرة إزالة المذيبات. [ 12 ] تُؤيَّن المواد المراد تحليلها باستخدام مصدر تأين كيميائي بمساعدة المذيب، حيث تعمل مذيبات جهاز كروماتوغرافيا السائل كغازات كاشفة. لاستخدام هذه الواجهة، كان من الضروري تقسيم التدفق الخارج من عمود جهاز كروماتوغرافيا السائل، لأنه لا يمكن إدخال سوى جزء صغير من السائل الخارج (من 10 إلى 50 ميكرولتر/دقيقة من أصل 1 مل/دقيقة) إلى المصدر دون رفع ضغط الفراغ لنظام مطياف الكتلة إلى مستوى عالٍ جدًا. في المقابل، حقق هينيون في جامعة كورنيل نجاحًا باستخدام طرق كروماتوغرافيا السائل ذات التجويف الدقيق، مما أتاح الاستفادة الكاملة من التدفق المنخفض للكروماتوغرافيا السائلة. كانت إحدى المشكلات التشغيلية الرئيسية لواجهة DLI هي الانسداد المتكرر لفتحات الغشاء. استُخدمت واجهة DLI بين عامي 1982 و1985 لتحليل المبيدات الحشرية، والكورتيكوستيرويدات، ومستقلبات بول الخيول، والإريثروميسين، وفيتامين ب 12 . إلا أن هذه الواجهة استُبدلت بواجهة الرذاذ الحراري ، التي أزالت قيود معدل التدفق ومشاكل انسداد الأغشية. [ 5 ] [ 9 ]

كان جهاز واجهة حزمة الجسيمات (PBI) جهازًا مشابهًا ، وقد طوّره ويلوبي وبراونر عام 1984. [ 16 ] حلّت واجهات حزمة الجسيمات محلّ واجهة حزمة الجسيمات متعددة الطبقات (MBI) في تطبيقاتها الواسعة في تقنية كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) عام 1988. [ 9 ] [ 17 ] تعمل واجهة حزمة الجسيمات باستخدام مرذاذ غاز الهيليوم لرشّ المذيب في الفراغ، وتجفيف القطرات، وسحب بخار المذيب (باستخدام فاصل نفاث)، بينما يدخل تيار من الجسيمات المجففة أحادية التشتت التي تحتوي على المادة المراد تحليلها إلى المصدر. [ 12 ] يسمح تجفيف القطرات خارج حجم المصدر، واستخدام فاصل نفاث لسحب بخار المذيب، بدخول الجسيمات وتبخيرها في مصدر تأين إلكتروني منخفض الضغط. وكما هو الحال مع واجهة حزمة الجسيمات متعددة الطبقات، تُعدّ القدرة على توليد أطياف تأين إلكتروني قابلة للبحث في المكتبة ميزةً بارزةً للعديد من التطبيقات. وقد حققت هذه التقنية نجاحًا معتدلًا بعد تسويقها من قبل شركة هيوليت باكارد ، ولاحقًا من قبل شركتي VG و Extrel، ولكن تم استبدالها إلى حد كبير بواجهات الضغط الجوي مثل الرش الكهروستاتيكي و APCI التي توفر نطاقًا أوسع من تغطية المركبات والتطبيقات.

واجهة رذاذ حراري

طُوِّرت واجهة الرذاذ الحراري (TSP) عام 1980 على يد مارفن فيستال وزملاؤه في جامعة هيوستن. [ 18 ] وقد سوّقتها شركة فيستيك والعديد من كبرى شركات تصنيع أجهزة قياس الطيف الكتلي. نتجت هذه الواجهة عن مشروع بحثي طويل الأمد يهدف إلى إيجاد واجهة LC-MS قادرة على التعامل مع معدلات تدفق عالية (1 مل/دقيقة) وتجنب انقسام التدفق في واجهات DLI. تتكون واجهة TSP من مسبار مُسخَّن، وحجرة إزالة المذيبات، وجهاز تركيز الأيونات. يمر ناتج LC عبر المسبار المُسخَّن ويخرج على شكل تيار من البخار وقطرات صغيرة تتدفق إلى حجرة إزالة المذيبات تحت ضغط منخفض. في البداية، شُغِّلت الواجهة باستخدام خيط أو تفريغ كمصدر للأيونات (وبالتالي تعمل كمصدر للتأين الكيميائي للمادة المُحلَّلة المُبَخَّرة)، ولكن سرعان ما اكتُشف أنه يمكن رصد الأيونات حتى عند إيقاف تشغيل الخيط أو التفريغ. قد يُعزى ذلك إما إلى الانبعاث المباشر للأيونات من قطرات السائل أثناء تبخرها في عملية مرتبطة بالتأين بالرذاذ الكهربائي أو تبخر الأيونات، أو إلى التأين الكيميائي لجزيئات المادة المُحللة المُتبخرة من أيونات المحلول المنظم (مثل أسيتات الأمونيوم). ويشير رصد أيونات متعددة الشحنات من بعض المواد المُحللة الأكبر حجمًا إلى حدوث انبعاث مباشر لأيونات المادة المُحللة في ظل ظروف معينة على الأقل. [ 12 ] كانت الواجهة قادرة على معالجة ما يصل إلى 2 مل/دقيقة من الإيلاء من عمود كروماتوغرافيا السائل، وإدخاله بكفاءة إلى نظام فراغ مطياف الكتلة. كما كانت تقنية TSP أكثر ملاءمة لتطبيقات كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة التي تتضمن كروماتوغرافيا السائل ذات الطور المعكوس (RT-LC). ومع مرور الوقت، تم تبسيط التعقيد الميكانيكي لتقنية TSP، وأصبحت هذه الواجهة شائعة كأول واجهة مثالية لكروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة للتطبيقات الصيدلانية التي تشمل تحليل الأدوية ، والمستقلبات، والمقترنات، والنيوكليوسيدات ، والببتيدات ، والمنتجات الطبيعية ، والمبيدات . شكّل إدخال تقنية TSP تحسّنًا ملحوظًا لأنظمة LC-MS، وكانت الواجهة الأكثر استخدامًا حتى بداية التسعينيات، حين بدأت تُستبدل بواجهات تعتمد على التأين بالضغط الجوي (API). [ 5 ] [ 8 ] [ 17 ]

واجهات قائمة على تقنية FAB

طُوِّرت أولى واجهات قصف الذرات السريعة ( FAB ) وواجهات قصف الذرات السريعة بالتدفق المستمر (CF-FAB) في عامي 1985 و1986 على التوالي. [ 17 ] تشابهت الواجهتان، لكنهما اختلفتا في أن الأولى استخدمت مسبارًا مساميًا كقناة توصيل، بينما استخدمت CF-FAB طرف مسبار. من بين هاتين الواجهتين، حققت CF-FAB نجاحًا أكبر كواجهة LC-MS، وكانت مفيدة لتحليل المركبات غير المتطايرة والحساسة للحرارة. في هذه الواجهات، يمر سائل LC عبر قنوات المسبار أو CF-FAB لتشكيل طبقة سائلة متجانسة عند الطرف. هناك، يُقصف السائل بحزم أيونية أو ذرات عالية الطاقة (ذرات سريعة). ولضمان التشغيل المستقر، كانت واجهات FAB قادرة على التعامل مع معدلات تدفق سائل تتراوح بين 1 و15 ميكرولتر فقط، كما اقتصر استخدامها على الأعمدة الدقيقة والشعيرية. لاستخدامها في مصادر تأين مطياف الكتلة بتقنية التأين بالقصف الذري السريع (FAB MS)، كان لا بد من مزج المواد المراد تحليلها مع مادة مساعدة (مثل الجلسرين) يمكن إضافتها قبل أو بعد الفصل في عمود كروماتوغرافيا السائل. وقد استُخدمت واجهات FAB على نطاق واسع لتوصيف الببتيدات، لكنها فقدت جدواها مع ظهور واجهات التأين بالرذاذ الإلكتروني في عام 1988. [ 5 ] [ 9 ]

الاستشراب السائل

مخطط نظام LC-MS

الكروماتوغرافيا السائلة هي طريقة فصل فيزيائي يتم فيها توزيع مكونات خليط سائل بين طورين غير قابلين للامتزاج، يُطلق عليهما الطور الثابت والطور المتحرك. ويمكن تقسيم تطبيقات الكروماتوغرافيا السائلة إلى خمس فئات: كروماتوغرافيا الامتزاز ، وكروماتوغرافيا التوزيع ، وكروماتوغرافيا التبادل الأيوني ، وكروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي ، وكروماتوغرافيا التقارب . ومن بين هذه الفئات، يُعدّ نمط الطور العكسي (RP) في تقنية كروماتوغرافيا التوزيع الأكثر استخدامًا، حيث يعتمد على طور ثابت غير قطبي ( كاره للماء ) وطور متحرك قطبي. في التطبيقات الشائعة، يكون الطور المتحرك عبارة عن خليط من الماء ومذيبات قطبية أخرى (مثل الميثانول ، والإيزوبروبانول ، والأسيتونيتريل )، ويتم تحضير المصفوفة الثابتة عن طريق ربط مجموعات ألكيل طويلة السلسلة (مثل n-أوكتاديسيل أو C18 ) بالأسطح الخارجية والداخلية لجزيئات السيليكا المسامية غير المنتظمة أو الكروية الشكل، بقطر 5 ميكرومتر. [ 5 ]

في تقنية كروماتوغرافيا السائل عالي الأداء (HPLC)، يُحقن عادةً 20 ميكرولتر من العينة المراد تحليلها في تيار الطور المتحرك الذي يُضخ بواسطة مضخة ضغط عالٍ. يتخلل الطور المتحرك، الذي يحتوي على المواد المراد تحليلها، طبقة الطور الثابت في اتجاه محدد. تُفصل مكونات الخليط بناءً على انجذابها الكيميائي للطورين المتحرك والثابت. ويحدث الفصل بعد عمليات امتزاز وانفصال متكررة تحدث عند تفاعل السائل مع طبقة الطور الثابت. [ 9 ] يُضخ المذيب السائل (الطور المتحرك) تحت ضغط عالٍ (يصل إلى 400 بار أو 5800 رطل لكل بوصة مربعة) إلى عمود معبأ يحتوي على الطور الثابت. يُعد الضغط العالي ضروريًا لتحقيق معدل تدفق ثابت لإجراء تجارب كروماتوغرافية قابلة للتكرار. وبناءً على التوزيع بين الطورين المتحرك والثابت، تتدفق مكونات العينة خارج العمود في أوقات مختلفة. [ 17 ] يُعد العمود أهم مكون في نظام كروماتوغرافيا السائل، وهو مصمم لتحمل الضغط العالي للسائل. يبلغ طول أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة التقليدية 100-300 مم، بقطر خارجي 6.4 مم (ربع بوصة) وقطر داخلي 3.0-4.6 مم . أما في تطبيقات الكروماتوغرافيا السائلة المقترنة بمطياف الكتلة (LC-MS)، فيمكن أن تكون أعمدة الكروماتوغرافيا أقصر (30-50 مم) مع جزيئات تعبئة بقطر 3-5 ميكرومتر. بالإضافة إلى النموذج التقليدي، توجد أنواع أخرى من أعمدة الكروماتوغرافيا السائلة، مثل الأعمدة ذات القطر الداخلي الضيق، والأعمدة ذات القطر الداخلي الدقيق، والأعمدة الشعرية الدقيقة، وأعمدة الكروماتوغرافيا السائلة النانوية. تتميز هذه الأعمدة بأقطار داخلية أصغر، مما يسمح بفصل أكثر كفاءة، وتتعامل مع تدفقات سائلة أقل من 1 مل/دقيقة ( معدل التدفق التقليدي ). [ 9 ] ولتحسين كفاءة الفصل ودقة تحديد الذروة، يمكن استخدام الكروماتوغرافيا السائلة فائقة الأداء (UHPLC) بدلاً من الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). يستخدم هذا النوع من تقنية كروماتوغرافيا السائل أعمدة معبأة بجزيئات سيليكا أصغر حجماً (قطرها حوالي 1.7 ميكرومتر) ويتطلب ضغوط تشغيل أعلى تتراوح بين 310000 و775000 تور (6000 إلى 15000 رطل لكل بوصة مربعة، 400 إلى 1034 بار). [ 5 ]    

مطياف الكتلة

طيف LC-MS لكل قمة مفصولة

مطيافية الكتلة (MS) هي تقنية تحليلية تقيس نسبة الكتلة إلى الشحنة ( m/z) للجسيمات المشحونة ( الأيونات ). على الرغم من وجود أنواع عديدة من مطيافات الكتلة، إلا أنها جميعًا تستخدم المجالات الكهربائية أو المغناطيسية للتحكم في حركة الأيونات الناتجة عن المادة المراد تحليلها وتحديد نسبة m/z الخاصة بها. [ 19 ] تتكون مطيافية الكتلة بشكل أساسي من مصدر الأيونات ، ومحلل الكتلة ، والكاشف، وأنظمة البيانات والتفريغ. في مصدر الأيونات، تُؤيَّن مكونات العينة المُدخلة إلى نظام مطيافية الكتلة باستخدام حزم الإلكترونات ، أو حزم الفوتونات ( الأشعة فوق البنفسجية )، أو حزم الليزر ، أو التفريغ الإكليلي . في حالة التأين بالرذاذ الكهربائي ، ينقل مصدر الأيونات الأيونات الموجودة في المحلول السائل إلى الحالة الغازية. يقوم مصدر الأيونات بتحويل جزيئات العينة المتعادلة وتفتيتها إلى أيونات غازية تُرسل إلى محلل الكتلة. بينما يقوم محلل الكتلة بتطبيق المجالين الكهربائي والمغناطيسي لفرز الأيونات حسب كتلها، يقيس الكاشف تيار الأيونات ويضخمه لحساب وفرة كل أيون مُحدد الكتلة. ولتوليد طيف كتلة يسهل على العين البشرية تمييزه، يقوم نظام البيانات بتسجيل البيانات ومعالجتها وتخزينها وعرضها في جهاز حاسوب. [ 5 ]

يمكن استخدام طيف الكتلة لتحديد كتلة المواد المراد تحليلها، وتركيبها العنصري والنظائري، أو لتوضيح بنيتها الكيميائية. [ 5 ] يتطلب تحليل طيف الكتلة إجراءه في الحالة الغازية وتحت ظروف فراغية (من 1.33 × 10⁻² إلى 1.33 × 10⁻⁶ باسكال ). لذا، كان تطوير أجهزة تُسهّل نقل العينات من حالة الضغط العالي وفي الحالة المكثفة (صلبة أو سائلة) إلى نظام فراغي أمرًا بالغ الأهمية لتطوير مطياف الكتلة كأداة فعّالة لتحديد وقياس المركبات العضوية، مثل الببتيدات . [ 20 ] يُستخدم مطياف الكتلة حاليًا على نطاق واسع في المختبرات التحليلية التي تدرس الخصائص الفيزيائية والكيميائية والبيولوجية لمجموعة كبيرة ومتنوعة من المركبات. من بين الأنواع العديدة المختلفة لأجهزة تحليل الكتلة، فإن تلك التي تجد تطبيقًا في أنظمة LC-MS هي أجهزة التحليل الرباعية الأقطاب ، وأجهزة تحليل زمن الطيران (TOF) ، وأجهزة مصائد الأيونات ، وأجهزة التحليل الهجينة الرباعية الأقطاب-زمن الطيران (QTOF) . [ 8 ]

واجهات

لطالما شكل الربط بين تقنية الطور السائل (HPLC) ذات الإليوت المتدفق باستمرار، وتقنية الطور الغازي التي تُجرى في الفراغ، تحديًا كبيرًا. إلا أن ظهور التأين بالرذاذ الإلكتروني غيّر هذا الواقع. حاليًا، تُعدّ واجهات LC-MS الأكثر شيوعًا هي التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI)، والتأين الكيميائي بالضغط الجوي (APCI)، والتأين الضوئي بالضغط الجوي (APPI). تُعتبر هذه مصادر أيونات حديثة في مطياف الكتلة، تُسهّل الانتقال من بيئة الضغط العالي (HPLC) إلى ظروف الفراغ العالي المطلوبة في محلل مطياف الكتلة. [ 21 ] [ 8 ] على الرغم من وصف هذه الواجهات بشكل منفصل، إلا أنها متوفرة تجاريًا أيضًا كمصادر أيونات مزدوجة ESI/APCI، أو ESI/APPI، أو APCI/APPI. [ 9 ] في الماضي، استُخدمت تقنيات ترسيب وتجفيف متنوعة، بما في ذلك الأحزمة المتحركة، ولكن أكثرها شيوعًا كان الترسيب باستخدام MALDI خارج الخط . [ 22 ] [ 23 ] هناك نهج جديد لا يزال قيد التطوير، يُسمى واجهة LC-MS بتقنية التأين الإلكتروني المباشر ، يربط نظام كروماتوغرافيا سائلة نانوية عالية الأداء (nano HPLC) ومطياف كتلة مزود بتقنية التأين الإلكتروني. [ 24 ] [ 25 ]

التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI)

طُوِّرت واجهة التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI) لأنظمة كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) بواسطة فين وزملاؤه عام 1988. [ 26 ] يُمكن استخدام مصدر/واجهة التأين هذه لتحليل الجزيئات متوسطة القطبية وحتى شديدة القطبية (مثل المستقلبات، والمواد الغريبة، والببتيدات، والنيوكليوتيدات، والسكريات المتعددة). يُوجَّه السائل الخارج من عمود كروماتوغرافيا السائل إلى أنبوب شعري معدني مُحافظ على جهد يتراوح بين 3 و5 كيلوفولت، ويُرَذَّذ بواسطة تدفق غاز محوري عالي السرعة عند طرف الأنبوب الشعري، مما يُنتج رذاذًا دقيقًا من القطرات المشحونة أمام مدخل حجرة التفريغ. ولتجنب تلوث نظام التفريغ بالمحاليل المنظمة والأملاح ، يُوضع هذا الأنبوب الشعري عادةً بشكل عمودي عند مدخل نظام مطياف الكتلة، وفي بعض الحالات مع تيار معاكس من النيتروجين الجاف أمام المدخل، حيث يُوجَّه الأيونات من خلاله بواسطة المجال الكهربائي. في بعض المصادر، يُحقق التبخر السريع للقطرات، وبالتالي أقصى انبعاث للأيونات، عن طريق مزج تيار إضافي من الغاز الساخن مع رذاذ التأين أمام مدخل الفراغ. وفي مصادر أخرى، تُسحب القطرات عبر أنبوب شعري مُسخّن عند دخولها الفراغ، مما يُعزز تبخرها وانبعاث الأيونات. تُتيح هذه الطرق لزيادة تبخر القطرات استخدام معدلات تدفق سائل تتراوح بين 1 و2 مل/دقيقة مع الحفاظ على كفاءة التأين [ 27 ] وحساسية عالية. ونتيجةً لذلك، فبينما كان استخدام  أعمدة دقيقة بقطر 1-3 مم ومعدلات تدفق منخفضة تتراوح بين 50 و200 ميكرولتر/دقيقة يُعتبر ضروريًا للتشغيل الأمثل في السابق، لم يعد هذا القيد ذا أهمية كبيرة، ويمكن الآن الاستفادة من السعة الأكبر للأعمدة ذات القطر الأكبر مع أنظمة كروماتوغرافيا السائل-مطياف الكتلة بتقنية التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI LC-MS). يمكن توليد أيونات موجبة وسالبة الشحنة عن طريق عكس القطبية، ومن الممكن الحصول على أطياف الوضع الموجب والسالب بالتناوب بسرعة خلال نفس عملية الفصل الكروماتوغرافي السائل. في حين أن معظم الجزيئات الكبيرة (أكبر من 1500-2000 دالتون) تُنتج أيونات متعددة الشحنة في مصدر التأين بالرذاذ الإلكتروني، فإن غالبية الجزيئات الأصغر تُنتج أيونات أحادية الشحنة. [ 8 ]

التأين الكيميائي بالضغط الجوي (APCI)

بدأ تطوير واجهة التأين الكيميائي عند الضغط الجوي (APCI) لتقنية كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) على يد هورنينج وزملاؤه في أوائل عام 1973. [ 28 ] إلا أن تطبيقها التجاري بدأ في مطلع التسعينيات بعد أن قام هينيون وزملاؤه بتحسين واجهة LC-APCI-MS في عام 1986. [ 9 ] يمكن استخدام مصدر/واجهة التأين APCI لتحليل الجزيئات الصغيرة، المتعادلة، غير القطبية نسبيًا، والمستقرة حراريًا (مثل الستيرويدات، والدهون، والفيتامينات الذائبة في الدهون). لا تتأين هذه المركبات جيدًا باستخدام تقنية التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI). بالإضافة إلى ذلك، يمكن لتقنية APCI التعامل مع تيارات الطور المتحرك التي تحتوي على عوامل مُنظِّمة. يُضخ السائل من نظام كروماتوغرافيا السائل عبر أنبوب شعري، ويحدث أيضًا رذاذ عند طرفه، حيث يحدث تفريغ كورونا. في البداية، يتعرض الغاز المؤين المحيط بالواجهة ومذيب الطور المتحرك للتأين الكيميائي عند مصدر التأين. لاحقًا، تتفاعل هذه الأيونات مع المادة المراد تحليلها وتنقل شحنتها. تمر أيونات العينة بعد ذلك عبر مقشدات ذات فتحات صغيرة باستخدام عدسات تركيز الأيونات. وبمجرد دخولها منطقة الفراغ العالي، تخضع الأيونات لتحليل الكتلة. يمكن تشغيل هذه الواجهة في وضعيات الشحنة الموجبة والسالبة، وتُنتج بشكل رئيسي أيونات أحادية الشحنة. [ 8 ] كما يمكن لمصدر أيونات APCI التعامل مع معدلات تدفق تتراوح بين 500 و2000 ميكرولتر/دقيقة، ويمكن توصيله مباشرةً بأعمدة تقليدية  بقطر داخلي 4.6 مم. [ 17 ]

التأين الضوئي بالضغط الجوي (APPI)

طُوِّرت واجهة التأين الضوئي عند الضغط الجوي (APPI) لتقنية كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) بشكل متزامن من قِبَل بروينز وسياج في عام 2000. [ 29 ] [ 9 ] تُعدّ APPI مصدرًا/واجهةً أخرى للتأين في تقنية LC-MS لتحليل المركبات المتعادلة التي لا يمكن تأيينها باستخدام التأين بالرذاذ الإلكتروني (ESI). [ 8 ] تُشبه هذه الواجهة مصدر التأين الكيميائي عند الضغط الجوي (APCI)، ولكن بدلًا من التفريغ الإكليلي، يحدث التأين باستخدام فوتونات منبعثة من مصباح تفريغ . في وضع التأين الضوئي المباشر عند الضغط الجوي (Direct-APPI)، تتشكل أيونات جزيئية أحادية الشحنة للمادة المُحلَّلة عن طريق امتصاص فوتون وانبعاث إلكترون. أما في وضع التأين الضوئي المُضاف (Dopant-APPI)، فيُضاف مُركَّب سهل التأين (المُضاف ) إلى الطور المتحرك أو غاز التذرية لتعزيز تفاعل تبادل الشحنة بين أيون جزيء المُضاف والمادة المُحلَّلة. تُنقل العينة المُؤيَّنة لاحقًا إلى محلل الكتلة تحت فراغ عالٍ أثناء مرورها عبر مُقشِّرات ذات فتحات صغيرة. [ 9 ]

التطبيقات

يُعدّ دمج مطياف الكتلة مع أنظمة كروماتوغرافيا السائل (LC) جذابًا، إذ تُتيح كروماتوغرافيا السائل فصلَ الخلائط الطبيعية الدقيقة والمعقدة التي تتطلب تحديدًا دقيقًا لتركيبها الكيميائي، مثل السوائل البيولوجية والعينات البيئية والأدوية. علاوة على ذلك، تُستخدم تقنية LC-MS في تحليل بقايا المتفجرات المتطايرة. [ 30 ] وقد أصبحت LC-MS اليوم من أكثر تقنيات التحليل الكيميائي استخدامًا، نظرًا لأن أكثر من 85% من المركبات الكيميائية الطبيعية قطبية وغير مستقرة حراريًا ، ولا تستطيع تقنية GC-MS معالجة هذه العينات. [ 5 ] فعلى سبيل المثال، تُعتبر تقنية HPLC-MS التقنية التحليلية الرائدة في مختبرات البروتينات والصيدلة. [ 8 ] [ 5 ] وتشمل التطبيقات المهمة الأخرى لتقنية LC-MS تحليل الأغذية والمبيدات الحشرية والفينولات النباتية . [ 9 ]

الحركية الدوائية

يُستخدم التحليل الطيفي الكتلي المقترن بالكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS) على نطاق واسع في مجال التحليل الحيوي ، وخاصةً في دراسات الحركية الدوائية للأدوية. تُعدّ دراسات الحركية الدوائية ضرورية لتحديد سرعة إزالة الدواء من أعضاء الجسم وتدفق الدم الكبدي . تتميز أجهزة تحليل الطيف الكتلي بفائدتها في هذه الدراسات نظرًا لقصر وقت التحليل، وحساسيتها ودقتها العالية مقارنةً بكواشف الأشعة فوق البنفسجية المستخدمة عادةً في أنظمة الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC). ومن أهم مزاياها استخدام تقنية MS-MS الترادفية ، حيث يُمكن برمجة الكاشف لاختيار أيونات معينة لتفتيتها. الكمية المقاسة هي مجموع أجزاء الجزيئات التي يختارها المُشغّل. طالما لا توجد تداخلات أو تثبيط أيوني في LC-MS ، يُمكن إجراء فصل الكروماتوغرافيا السائلة بسرعة كبيرة. [ 31 ]

علم البروتينات/علم الأيض

يُستخدم التحليل الطيفي الكتلي المقترن بالكروماتوغرافيا السائلة (LC-MS) في علم البروتينات كطريقة للكشف عن مكونات المخاليط المعقدة وتحديدها. تعتمد طريقة LC-MS في علم البروتينات، والتي تُعرف بالتحليل من الأسفل إلى الأعلى ، على هضم البروتينات باستخدام إنزيم التربسين، واليوريا لتفكيك بنيتها الثلاثية، واليودوأسيتاميد لتعديل بقايا السيستين. بعد الهضم، يُستخدم LC-MS لتحديد بصمة كتلة الببتيدات ، أو يُستخدم LC-MS/MS ( مطياف الكتلة الترادفي ) [ 32 ] لاستخلاص تسلسلات الببتيدات الفردية. [ 33 ] يُستخدم LC-MS/MS بشكل شائع في تحليل البروتينات للعينات المعقدة حيث قد تتداخل كتل الببتيدات حتى مع مطياف الكتلة عالي الدقة. يمكن تحليل عينات من مواد بيولوجية معقدة، مثل مصل الدم البشري ، باستخدام أنظمة LC-MS/MS الحديثة، والتي يمكنها تحديد أكثر من 1000 بروتين. مع ذلك، لا يمكن تحقيق هذا المستوى العالي من تحديد البروتينات إلا بعد فصل العينة باستخدام هلام SDS-PAGE أو HPLC-SCX. [ 31 ] وقد طُبقت تقنية LC-MS/MS مؤخرًا للبحث عن المؤشرات الحيوية الببتيدية . ومن الأمثلة على ذلك الاكتشاف والتحقق من صحة المؤشرات الحيوية الببتيدية لأربعة من مسببات الأمراض البكتيرية الرئيسية في الجهاز التنفسي ( المكورات العنقودية الذهبية ، والموراكسيلة النزلية ، والمستدمية النزلية ، والمكورات الرئوية ) وفيروس SARS-CoV-2 . [ 34 ] [ 35 ]

برزت تقنية LC-MS كإحدى أكثر التقنيات شيوعًا في تحليل الأيضات الشاملة للأنسجة البيولوجية، مثل بلازما الدم والمصل والبول. [ 36 ] كما تُستخدم هذه التقنية لتحليل المنتجات الطبيعية وتحديد الأيضات الثانوية في النباتات. [ 37 ] وفي هذا السياق، تُعدّ الأنظمة القائمة على قياس الطيف الكتلي مفيدةً للحصول على معلومات أكثر تفصيلًا حول طيف واسع من المركبات من عينات بيولوجية معقدة. ويُستخدم أيضًا الرنين المغناطيسي النووي ( NMR ) المقترن بالكروماتوغرافيا السائلة في علم الأيض النباتي، إلا أن هذه التقنية لا تستطيع سوى الكشف عن الأيضات الأكثر وفرةً وتحديد كميتها. وقد ساهمت تقنية LC-MS في تطوير مجال علم الأيض النباتي، الذي يهدف إلى دراسة النظام النباتي على المستوى الجزيئي، مما يوفر توصيفًا غير متحيز للأيض النباتي استجابةً لبيئته. [ 38 ] كان أول تطبيق لتقنية LC-MS في علم الأيض النباتي هو الكشف عن مجموعة واسعة من المستقلبات شديدة القطبية، والسكريات قليلة التعدد ، والأحماض الأمينية ، والسكريات الأمينية ، والنيوكليوتيدات السكرية من أنسجة اللحاء في نبات القرع (Cucurbita maxima) . [ 39 ] ومن الأمثلة الأخرى على استخدام تقنية LC-MS في علم الأيض النباتي الفصل الفعال وتحديد الجلوكوز ، والسكروز ، والرافينوز ، والستاكيوز ، والفيرباسكوز من مستخلصات أوراق نبات الرشاد (Arabidopsis thaliana) . [ 40 ]

تطوير الأدوية

يُستخدم التحليل الكروماتوغرافي السائل - مطياف الكتلة (LC-MS) بكثرة في تطوير الأدوية ، إذ يُتيح تأكيد الوزن الجزيئي وتحديد البنية بسرعة. تُسرّع هذه الميزات عملية توليد واختبار والتحقق من صحة الاكتشافات، انطلاقًا من مجموعة واسعة من المنتجات ذات التطبيقات المحتملة. تشمل تطبيقات LC-MS في تطوير الأدوية أساليب آلية للغاية تُستخدم في رسم خرائط الببتيدات، ورسم خرائط البروتينات السكرية ، وعلم الدهون ، واكتشاف المنتجات الطبيعية، وفحص التقارب الحيوي، وفحص الأدوية في الجسم الحي ، وفحص الاستقرار الأيضي، وتحديد المستقلبات، وتحديد الشوائب، والتحليل الحيوي الكمي ، ومراقبة الجودة . [ 41 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. ↑ دي هوفمان، إدموند؛ ستروبانت، فنسنت (2002). مطيافية الكتلة (المبادئ والتطبيقات) (الطبعة الثانية  ). وايلي. الصفحات 157-158 . ISBN  0-471-48566-7.
  2. ↑ بيت، جيمس جيه (فبراير 2009). " مبادئ وتطبيقات كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة في الكيمياء الحيوية السريرية" . مجلة الكيمياء الحيوية السريرية . 30 (1): 19-34 . PMC 2643089. PMID 19224008 .  
  3. ↑ تشو، بين؛ شياو، جون فنغ؛ تولي، ليبكا؛ ريسوم، هابتوم و (فبراير 2012). "علم الأيض القائم على تقنية LC-MS" . بيولوجيا الأنظمة الجزيئية . 8 (2): 470-481 . doi : 10.1039/c1mb05350g . PMC 3699692. PMID 22041788 .  
  4. ↑ شيمبو، باتريك (2014-01-01). "الفن الحديث لتحديد المواد الطبيعية في النباتات الكاملة". في: جاكوب، كلاوس؛ كيرش، جيلبرت؛ سلوسارينكو، آلان؛ وينارد، بول ج.؛ بوركهولز، تورستن (محررون). التطورات الحديثة في منتجات النباتات والميكروبات النشطة في تفاعلات الأكسدة والاختزال . سبرينغر هولندا. ص 31-94 . doi : 10.1007/978-94-017-8953-0_3 . ISBN  978-94-017-8952-3.
  5. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 داس، شابيل (2007-01-01). "تقنيات الفصل الموصولة". أساسيات قياس الطيف الكتلي المعاصر . جون وايلي وأولاده، ص 151-194 . doi : 10.1002/9780470118498.ch5 . ISBN  978-0-470-11849-8.
  6. ↑ أيسبورنا، آريس؛ ويب، بيل؛ أوريتبونتاي، ويني؛ هوانغ، لينه؛ بيلينغز، إليزابيث م.؛ هوانغ، كوري؛ بلامب، روبرت؛ سيوزداك، غاري (28-10-2025). "النمذجة التكيفية لبيانات مطياف الكتلة الترادفي: إنشاء قاعدة بيانات METLIN 960K MRM" . الكيمياء التحليلية . doi : 10.1021/acs.analchem.5c04639 . ISSN 0003-2700 . PMC 12613142 .  
  7. ↑ سيجر، كريستوف؛ سالزمان، ليندا (2020-08-01). "بعد عقد آخر: أصبح التحليل الطيفي الكتلي بالاقتران مع كروماتوغرافيا السائل (LC-MS/MS) إجراءً روتينيًا في التشخيص السريري" . الكيمياء الحيوية السريرية . تطورات وتطبيقات قياس الطيف الكتلي في الطب المخبري. 82 : 2-11 . doi : 10.1016/j.clinbiochem.2020.03.004 . ISSN 0009-9120 . PMID 32188572. S2CID 213186669 .   
  8. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 بيت، جيمس ج. (12 مارس 2017). "مبادئ وتطبيقات كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة في الكيمياء الحيوية السريرية" . مجلة مراجعات الكيمياء الحيوية السريرية . 30 (1): 19-34 . ISSN 0159-8090 . PMC 2643089. PMID 19224008 .   
  9. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 نيسن، ويلفريد م. أ. (2006). كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة، الطبعة الثالثة . بوكا راتون: سي آر سي تايلور وفرانسيس. الصفحات 50-90 . ISBN  978-0-8247-4082-5. OCLC 232370223 . 
  10. ↑ جيمس، أ. ت.؛ مارتن، أ. ج. ب. (1952-03-01). "الكروماتوغرافيا التقسيمية بين الغاز والسائل: فصل وتقدير دقيق للأحماض الدهنية المتطايرة من حمض الفورميك إلى حمض الدوديكانويك" . مجلة الكيمياء الحيوية . 50 (5): 679-690 . doi : 10.1042/bj0500679 . ISSN 0264-6021 . PMC 1197726. PMID 14934673 .   
  11. ↑ تالروز، ف. ل؛ كاربوف، ج. ف؛ جوردتسكي، إ. ج؛ سكورات، ف. إ (1968). "أنظمة شعرية لإدخال مخاليط سائلة في مطياف الكتلة التحليلي". المجلة الروسية للكيمياء الفيزيائية 42 : 1658-1664 .
  12. 1 2 3 4 أربينو، باتريك (2006). "تاريخ تطوير وربط تقنية LC-MS". موسوعة قياس الطيف الكتلي . المجلد 8. إلسيفير. ISBN  978-0-08-043847-4.
  13. ↑ تالروز، ف. ل.؛ غوروديتسكي، إ. ج.؛ زولوتوي، ن. ب.؛ كاربوف، ج. ف.؛ سكورات، ف. إ.؛ ماسلينيكوفا، ف. يا. (1978). "نظام شعيري للإدخال المستمر للسوائل المتطايرة في مطياف الكتلة التحليلي وتطبيقاته". مجلة التقدم في مطياف الكتلة . 7 : 858.
  14. ↑ بالدوين، م.أ.؛ ماكلافيرتي، ف.و. (1973). "واجهة كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة - الجزء الأول: الإدخال المباشر للمحاليل السائلة في مطياف الكتلة ذي التأين الكيميائي". مطيافية الكتلة العضوية . 7 (9): 1111-1112 . doi : 10.1002/oms.1210070913 . ISSN 0030-493X . 
  15. ↑ بولين، فرانل (2010). "التاريخ الرائع لتطوير تقنية LC-MS؛ منظور شخصي" . مجلة كروماتوغرافيا اليوم (فبراير/مارس): 4-6 .
  16. ↑ دي كوستر، كريس ج.؛ شوينماكرز، بيتر ج. (2020). "الفصل 3.1 - تاريخ كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة". في ترانشيدا، بيتر كيو.؛ مونديلو، لويجي (محرران). وصلات كروماتوغرافيا الشعيرات الدموية مع مطياف الكتلة . إلسيفير. ص 279-295 . ISBN  978-0-12-809638-3.
  17. 1 2 3 4 5 أردري، روبرت إي. (2003-01-01). "مقدمة". كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة: مقدمة . التقنيات التحليلية في العلوم (AnTS). جون وايلي وأولاده المحدودة. ص 1-5 . doi : 10.1002/0470867299.ch1 . ISBN  978-0-470-86729-7.
  18. ↑ بلاكلي، سي آر؛ كارمودي، جيه جيه؛ فيستال، إم إل (1980). "تقنية تأين جديدة لطيفة لتحليل الطيف الكتلي للعينات المعقدة". مجلة الجمعية الكيميائية الأمريكية 102 : 5931-5933 . doi : 10.1021/ja00538a050 .
  19. ↑ روبرتس، جوردون (2013). روبرتس، جوردون سي. كيه (محرر). موسوعة الفيزياء الحيوية - سبرينغر . doi : 10.1007/978-3-642-16712-6 . ISBN 978-3-642-16711-9. S2CID 44856071 . 
  20. ↑ شارب، توماس ر. (2009-01-01). "مطيافية الكتلة". في: نصار، علاء ف.؛ كوليجيتيسور، بول ف. هولنبرغ؛ في بي، جوان سكاتينا (محررون). دليل استقلاب الأدوية . جون وايلي وأولاده، ص 167-227 . doi : 10.1002/9780470439265.ch8 . ISBN  978-0-470-43926-5.
  21. ↑ أربينو، باتريك (1992). "التحليل الطيفي الكتلي بالكروماتوغرافيا السائلة المدمجة. الجزء الثالث: تطبيقات الرش الحراري". مراجعات قياس الطيف الكتلي . 11 (1): 3-40 . Bibcode : 1992MSRv...11....3A . doi : 10.1002/mas.1280110103 .
  22. ↑ أربينو، باتريك (1989). "الاقتران بين كروماتوغرافيا السائل وقياس الطيف الكتلي. الجزء الأول: الربط بواسطة واجهة حزام متحرك". مراجعات قياس الطيف الكتلي . 8 (1): 35-55 . Bibcode : 1989MSRv....8...35A . doi : 10.1002/mas.1280080103 .
  23. ↑ موراي، كيرميت ك. (1997). "ربط التأين/الامتزاز الليزري بمساعدة المصفوفة بفصل السوائل". مراجعات مطياف الكتلة . 16 (5): 283-299 . Bibcode : 1997MSRv...16..283M . doi : 10.1002/(SICI)1098-2787(1997)16:5 < 283::AID-MAS3 > 3.0.CO ; 2-D .
  24. ^ كابيلو ، أشيل. فاميجليني، جورجيو؛ بالما، بيرانجيلا؛ بيريني، إليزابيتا؛ تيرموبولي، فيرونيكا؛ تروفيلي ، هيلجا (2008/12/01). “التغلب على تأثيرات المصفوفة في التحليل اللوني السائل − قياس الطيف الكتلي”. الكيمياء التحليلية . 80 (23): 9343–9348 . دوى : 10.1021/ac8018312 . ISSN 0003-2700 . بميد 19551950 .  
  25. ↑ كابيلو، أكيلي؛ فاميغليني، جورجيو؛ مانغاني، فيليبو؛ بالما، بييرانجيلا (1 مارس 2002). "نهج بسيط لربط كروماتوغرافيا السائل وقياس الطيف الكتلي باستخدام التأين الإلكتروني" . مجلة الجمعية الأمريكية لعلم قياس الطيف الكتلي . 13 (3): 265-273 . doi : 10.1016/S1044-0305(01)00363-4 . ISSN 1044-0305 . PMID 11908806 .  
  26. ↑ فين، جيه بي؛ مان، إم؛ مينغ، سي كيه؛ وونغ، إس إف؛ وايت هاوس، سي إم (1989-10-06). "التأين بالرذاذ الإلكتروني لتحليل الطيف الكتلي للجزيئات الحيوية الكبيرة". مجلة ساينس . 246 (4926): 64-71 . Bibcode : 1989Sci...246...64F . CiteSeerX 10.1.1.522.9458 . doi : 10.1126/science.2675315 . ISSN 0036-8075 . PMID 2675315 .   
  27. ↑ كوفي، توم (30 أغسطس 2022). "أين ذهبت كل الأيونات بعد مرور وقت طويل؟ مطيافات الكتلة الرباعية الأقطاب المترادفة ذات حساسية التأين بالضغط الجوي المُحسّنة منذ منتصف سبعينيات القرن الماضي. منظور" . الاتصالات السريعة في مطيافية الكتلة e9354. doi : 10.1002/rcm.9354 . ISSN 0951-4198 . PMC 12062782. PMID 35830299. S2CID 250491726 .    
  28. ↑ هورنينغ، إي سي؛ هورنينغ، إم جي؛ كارول، دي آي؛ دزيديتش، آي؛ ستيلويل، آر إن (1973-05-01). "نظام جديد للكشف عن البيكوغرامات يعتمد على مطياف الكتلة مع مصدر تأين خارجي عند الضغط الجوي". الكيمياء التحليلية . 45 (6): 936-943 . doi : 10.1021/ac60328a035 . ISSN 0003-2700 . 
  29. ↑ روب، لا يوجد؛ كوفي، لا يوجد؛ بروينز، لا يوجد (2000-08-01). "التأين الضوئي بالضغط الجوي: طريقة تأين لتحليل الكروماتوغرافيا السائلة - مطياف الكتلة". الكيمياء التحليلية . 72 (15): 3653-3659 . doi : 10.1021/ac0001636 . ISSN 1520-6882 . PMID 10952556 .  
  30. ↑ ويدمر، ليو؛ واتسون، ستيوارت؛ شلاتر، كونراد؛ كراوسون، أندرو (2002). "تطوير طريقة LC/MS لتحليل آثار ثلاثي أسيتون ثلاثي البيروكسيد (TATP)". المحلل . 127 (12): 1627-1632 . Bibcode : 2002Ana...127.1627W . doi : 10.1039/b208350g . ISSN 0003-2654 . PMID 12537371 .  
  31. 1 2 سودهاكار، ب.؛ لاثا، ب.؛ ريدي، ب. ف. (2016-04-05). تصنيف النباتات المحصولية للصفات الفيزيولوجية والكيميائية الحيوية . دار النشر الأكاديمية. ISBN 978-0-12-804110-9.
  32. ↑ أيسبورنا، آريس؛ ويب، بيل؛ أوريتبونتاي، ويني؛ هوانغ، لينه؛ بيلينغز، إليزابيث م.؛ هوانغ، كوري؛ بلامب، روبرت؛ سيوزداك، غاري (28-10-2025). "النمذجة التكيفية لبيانات مطياف الكتلة الترادفي: إنشاء قاعدة بيانات METLIN 960K MRM" . الكيمياء التحليلية . doi : 10.1021/acs.analchem.5c04639 . ISSN 0003-2700 . PMC 12613142 .  
  33. ↑ ويسوكي، في إتش، ريسينغ، كيه إيه، تشانغ، كيو، تشنغ، جي (2005). "مطيافية الكتلة للببتيدات والبروتينات". طرق . 35 (3): 211-222 . doi : 10.1016/j.ymeth.2004.08.013 . PMID 15722218 . {{cite journal}}: صيانة CS1: أسماء متعددة: قائمة المؤلفين ( رابط )
  34. ↑ كارلسون، روجر؛ ثورسيل، أنيكا؛ غوميلا، مارغريتا؛ سالفا-سيرا، فرانسيسكو؛ جاكوبسون، هيدفيغ إي.؛ غونزاليس-سيليس، لوسيا؛ خاين-لوتشورو، دانيال؛ سكوفبيرغ، سوزان؛ فوكس، يوهانس؛ كارلسون، أندرس؛ بولوند، فريدريك (2020-03-01). "اكتشاف المؤشرات الحيوية الببتيدية الفريدة لأنواع مسببات الأمراض البكتيرية عن طريق التنميط البروتيني القائم على قياس الطيف الكتلي الترادفي" . علم البروتينات الجزيئي والخلوي . 19 (3): 518-528 . doi : 10.1074/mcp.RA119.001667 . ISSN 1535-9476 . PMC 7050107 . PMID 31941798 .   
  35. ^ فان بويفيلدي، ب. فان أويتفانغي ، ك . تيتغات، أوه؛ فان أودنهوف، إل؛ غابرييلز، ر. بوميستر، ر؛ دالد، س؛ فان دن بوش، تي؛ راماسامي، ف؛ فيرهيلست، س؛ دي كليرك، إل؛ كورفيلين ، إل. ويليمز، س؛ ديبون، ن؛ وينينديل، إي؛ دي شبيجلير، ب؛ جوداك، ف؛ رولز ، ك. دي وايلد، إل؛ فان إينو، ف؛ رينز، تي؛ شيرليت، م؛ دومونت، إي؛ ديبيزر ، جي. كيندت، ر؛ ساندرا، ك. جوبتا ، س . دروين ، ن. هارمز، أ؛ هانكمير، تي؛ جونز، دي جي إل؛ غوبتا، ف؛ لين، د؛ لين، CS؛ الوادي، س؛ فينسينديت، جي بي؛ موريس، ن؛ أورلي، إس؛ تانا، إن؛ سيلفستر، إس؛ هانام، إس؛ سيغلوخ، إف سي؛ بانغو-أولمان، إيه؛ كليريبودت، جيه؛ أندرسون، إن إل؛ رازاوي، إم؛ ديغروف، إس؛ كويبرز، إل؛ ستوف، سي؛ لاغرو، كيه؛ مارتنز، جي إيه؛ ديفورس، دي؛ مارتنز، إل؛ فيسيرز، جيه بي سي؛ دينينز، إم (28 يونيو 2021). "Cov-MS: اختبار نموذجي مجتمعي للكشف عن البروتين باستخدام مطياف الكتلة لدى مرضى SARS-CoV-2" . مجلة الجمعية الكيميائية الأمريكية (JACS Au) . 1 (6): 750-765 . doi : 10.1021/jacsau.1c00048 . PMC 8230961. PMID 34254058 .  
  36. ↑ جيكا، هيلين ج.؛ ثيودوريديس، جورجيوس أ.؛ بلومب، روبرت س.؛ ويلسون، إيان د. (يناير 2014). "الممارسات الحالية لتقنية كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة في علم الأيض وعلم الأيضيات". مجلة التحليل الصيدلاني والحيوي . 87 : 12-25 . doi : 10.1016/j.jpba.2013.06.032 . ISSN 0731-7085 . PMID 23916607 .  
  37. ↑ ستوبيكي، م.؛ سكيريتش، أ.؛ كيرواس، ل.؛ كاتشليكي، ب.؛ موث، د.؛ أينهورن، ج.؛ مولر-روبر، ب. (2006). "تحليل المركبات الفينولية الجليكوسيدية في أوراق نبات رشاد أذن الفأر باستخدام تقنية LC/MS". علم الأيض . 2 (4): 197-219 . doi : 10.1007/s11306-006-0031-5 . S2CID 39140266 . 
  38. ^ خورخي، تياجو ف. رودريغز، جواو أ؛ كالدانا، كاميلا؛ شميدت، رومي. فان دونجن، جوست تي؛ توماس أوتس, جين ; أنطونيو ، كارلا (2016/09/01). “الاستقلاب النباتي القائم على قياس الطيف الكتلي: استجابات الأيض للإجهاد اللاأحيائي”. مراجعات قياس الطيف الكتلي . 35 (5): 620–649 . بيب كود : 2016MSRv...35..620J . دوى : 10.1002/mas.21449 . ردمك 1098-2787 . بميد 25589422 . S2CID 206232111 .   
  39. ↑ تولستيكوف، فلاديمير ف.؛ فيهن، أوليفر (2002). "تحليل المركبات شديدة القطبية ذات الأصل النباتي: الجمع بين كروماتوغرافيا التفاعل المحب للماء ومطياف الكتلة ذي مصيدة الأيونات بالرذاذ الإلكتروني". الكيمياء الحيوية التحليلية . 301 (2): 298-307 . doi : 10.1006/abio.2001.5513 . PMID 11814300. S2CID 3156968 .  
  40. ↑ أنطونيو، كارلا؛ لارسون، توني؛ جيلداي، أليسون؛ غراهام، إيان؛ بيرغستروم، إد؛ توماس-أوتس، جين (2008). "تحليل مستقلبات الكربوهيدرات من أنسجة أوراق نبات رشاد أذن الفأر باستخدام كروماتوغرافيا التفاعل المحب للماء/مطياف الكتلة بالرذاذ الإلكتروني". اتصالات سريعة في مطياف الكتلة . 22 (9): 1399-1407 . Bibcode : 2008RCMS...22.1399A . doi : 10.1002/rcm.3519 . PMID 18384194 . 
  41. ↑ لي، مايك س.؛ كيرنز، إدوارد هـ. (1999). "تطبيقات LC/MS في تطوير الأدوية". مراجعات قياس الطيف الكتلي . 18 ( 3-4 ): 187-279 . Bibcode : 1999MSRv...18..187L . doi : 10.1002/(SICI)1098-2787(1999)18:3/4 < 187::AID-MAS2 > 3.0.CO ; 2-K . PMID 10568041 . 

للمزيد من القراءة

  • ثورمان، إي إم؛ فيرير، إيما (2003). كروماتوغرافيا السائل/مطياف الكتلة، مطياف الكتلة المتسلسل، ومطياف الكتلة بزمن الطيران: تحليل الملوثات الناشئة . كولومبوس، أوهايو: الجمعية الكيميائية الأمريكية. ISBN 978-0-8412-3825-1.
  • فيرير، إيما؛ ثورمان، إي إم (2009). كروماتوغرافيا السائل - مطياف الكتلة بزمن الطيران: المبادئ والأدوات والتطبيقات لتحليل الكتلة الدقيق . نيويورك، نيوجيرسي: وايلي. ISBN 978-0-470-13797-0.
  • ماكماستر، مارفن سي. (2005). LC/MS: دليل المستخدم العملي . نيويورك: جون وايلي. ISBN 978-0-471-65531-2.
  • ييرجي، ألفريد ل. (1990). كروماتوغرافيا السائل/مطياف الكتلة: التقنيات والتطبيقات . نيويورك: مطبعة بلينوم. ISBN 978-0-306-43186-9.