البروتين الفلوري الأخضر

📅 آخر تحديث: ٢٦ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٦ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 17 صور
الموسوعة الحرة

البروتين الفلوري الأخضر ( GFP ) هو بروتين يُظهر فلورة خضراء عند تعرضه للضوء في نطاق الأشعة فوق البنفسجية إلى الزرقاء. [ 2 ] [ 3 ] يُشير مصطلح GFP تقليديًا إلى البروتين الذي عُزل لأول مرة من قنديل البحر Aequorea victoria، ويُسمى أحيانًا avGFP . مع ذلك، وُجدت بروتينات GFP في كائنات حية أخرى، بما في ذلك المرجان ، وشقائق النعمان البحرية ، والزوانيثيدات ، ومجدافيات الأرجل ، والرميح . [ 4 ]

يتميز البروتين الفلوري الأخضر ( GFP) المستخلص من طحلب A. victoria بذروة استثارة رئيسية عند طول موجي 395  نانومتر، وذروة ثانوية عند 475  نانومتر. أما ذروة انبعاثه فتقع عند 509  نانومتر، ضمن الجزء الأخضر السفلي من الطيف المرئي . ويبلغ مردود الكم الفلوري (QY) للبروتين الفلوري الأخضر 0.79. بينما يتميز البروتين الفلوري الأخضر المستخلص من زهرة البحر ( Renilla reniformis ) بذروة استثارة رئيسية واحدة عند 498  نانومتر. يُعد البروتين الفلوري الأخضر أداةً ممتازة في العديد من مجالات علم الأحياء، وذلك لقدرته على تكوين كروموفور داخلي دون الحاجة إلى أي عوامل مساعدة أو منتجات جينية أو إنزيمات / ركائز أخرى غير الأكسجين الجزيئي. [ 5 ] [ 6 ]

في علم الأحياء الخلوي والجزيئي ، يُستخدم جين البروتين الفلوري الأخضر (GFP) بشكل متكرر كمؤشر للتعبير الجيني . [ 7 ] وقد استُخدم بأشكال مُعدّلة لصنع أجهزة استشعار حيوية ، كما تم إنتاج العديد من الحيوانات التي تُعبّر عن GFP، مما يُثبت إمكانية التعبير عن جين في جميع أنحاء الكائن الحي، أو في أعضاء مُحددة، أو في خلايا مُستهدفة. يُمكن إدخال GFP إلى الحيوانات أو أنواع أخرى من خلال تقنيات التعديل الوراثي ، والحفاظ عليه في جينومها وجينوم نسلها. وقد تم التعبير عن GFP في العديد من الأنواع، بما في ذلك البكتيريا، والخمائر، والفطريات، والأسماك، والثدييات، بما في ذلك الخلايا البشرية. مُنح العلماء روجر واي. تسين ، وأوسامو شيمومورا ، ومارتن تشالفي جائزة نوبل في الكيمياء لعام 2008 في 10 أكتوبر 2008 لاكتشافهم وتطويرهم للبروتين الفلوري الأخضر.

يبلغ طول معظم الجينات المتوفرة تجاريًا لبروتين GFP والبروتينات الفلورية المشابهة حوالي 730 زوجًا من القواعد النيتروجينية. يتكون البروتين الطبيعي من 238 حمضًا أمينيًا، وكتلته الجزيئية 27 كيلو دالتون. [ 8 ] لذلك، فإن دمج جين GFP مع جين بروتين معين قد يزيد بشكل ملحوظ من حجم البروتين وكتلته الجزيئية، وقد يُضعف وظيفته الطبيعية أو يُغير موقعه أو مسار انتقاله داخل الخلية. [ 9 ]

خلفية

أيكوريا فيكتوريا
إعادة بناء ثلاثية الأبعاد لصورة مجهرية بؤرية للخلايا السلفية العصبية التي تُفرط في التعبير عن عامل نمو بطانة الأوعية الدموية (VEGF) (باللون الأحمر) وخلايا سلفية عصبية ضابطة موجبة لبروتين الفلورسنت الأخضر (GFP) (باللون الأخضر) في البصلة الشمية للفأر. الأوعية الدموية الموجبة لـ RECA-1 - باللون الأزرق.

البروتين الأخضر الفلوري من النوع البري (wtGFP)

في ستينيات وسبعينيات القرن العشرين، تم تنقية البروتين الفلوري الأخضر (GFP)، إلى جانب بروتين الإيكورين المضيء (وهو إنزيم يحفز تحلل اللوسيفيرين، مُطلقًا الضوء)، لأول مرة من قنديل البحر Aequorea victoria ، ودرس أوسامو شيمومورا خصائصه . [ 10 ] في قنديل البحر A. victoria ، يحدث تألق GFP عندما يتفاعل الإيكورين مع أيونات الكالسيوم (Ca2 +) ، مما يُحدث توهجًا أزرق. ينتقل جزء من هذه الطاقة المتألقة إلى GFP، مما يُغير اللون العام نحو الأخضر. [ 11 ] مع ذلك، لم يبدأ إدراك فائدته كأداة لعلماء الأحياء الجزيئية إلا في عام 1992 عندما نشر دوغلاس براشر استنساخ وتسلسل النيوكليوتيدات لـ wtGFP في مجلة Gene . [ 12 ] بعد نفاد تمويل هذا المشروع، أرسل براشر عينات cDNA إلى عدة مختبرات. قام مختبر مارتن تشالفي بتعبير التسلسل الترميزي لبروتين GFP الطبيعي (wtGFP)، مع حذف الأحماض الأمينية القليلة الأولى، في خلايا غير متجانسة من بكتيريا الإشريكية القولونية والديدان الأسطوانية ، ونشر النتائج في مجلة ساينس عام 1994. [ 13 ] وبعد شهر واحد، أبلغ مختبر فريدريك تسوجي بشكل مستقل عن تعبير البروتين المُعاد تركيبه. [ 14 ] ومن اللافت للنظر أن جزيء GFP طوى وأظهر تألقًا فلوريًا في درجة حرارة الغرفة، دون الحاجة إلى عوامل مساعدة خارجية خاصة بقنديل البحر. وعلى الرغم من أن هذا البروتين الشبيه بـ wtGFP كان متألقًا، إلا أنه كان يعاني من عدة عيوب، منها طيف إثارة ثنائي الذروة، وحساسية لدرجة الحموضة، وحساسية لأيونات الكلوريد، وانخفاض مردود الكم الفلوري، وضعف الثبات الضوئي، وضعف الطي عند 37 درجة مئوية (99 درجة فهرنهايت) .  

نُشرت أول بنية بلورية مُبلغ عنها لبروتين GFP في مجلة Science عام 1996، وتحديدًا في طفرة S65T. [ 15 ] وبعد شهر، نشرت مجموعة فيليبس، بشكل مستقل، بنية بروتين GFP من النوع البري في مجلة Nature Biotechnology . [ 16 ] وقد وفرت هذه البنى البلورية معلومات أساسية هامة حول تكوين الكروموفور وتفاعلات الأحماض الأمينية المجاورة. وقد عدّل الباحثون هذه الأحماض الأمينية باستخدام الطفرات الموجهة والعشوائية لإنتاج مجموعة واسعة من مشتقات GFP المستخدمة منذ ذلك الحين. وأظهرت أبحاث أخرى أن بروتين GFP مقاوم للمنظفات، والبروتيازات، ومعالجات كلوريد الغوانيدينيوم (GdmCl)، والتغيرات الحادة في درجات الحرارة. [ 17 ]

مشتقات البروتين الفلوري الأخضر

يتجلى تنوع الطفرات الجينية من خلال مشهد شاطئ سان دييغو المرسوم ببكتيريا حية تعبر عن 8 ألوان مختلفة من البروتينات الفلورية (المشتقة من GFP و dsRed).

نظراً لإمكانية الاستخدام الواسع النطاق واحتياجات الباحثين المتطورة، تم هندسة العديد من الطفرات المختلفة لبروتين GFP. [ 18 ] [ 19 ] كان أول تحسين رئيسي هو طفرة نقطية واحدة (S65T) نُشرت عام 1995 في مجلة Nature بواسطة روجر تسين . [ 20 ] حسّنت هذه الطفرة بشكل كبير الخصائص الطيفية لبروتين GFP، مما أدى إلى زيادة التألق، والثبات الضوئي، وانزياح ذروة الإثارة الرئيسية إلى 488  نانومتر، مع الحفاظ على ذروة الانبعاث عند 509  نانومتر. يتوافق هذا مع الخصائص الطيفية لمجموعات مرشحات FITC الشائعة ، مما زاد من سهولة استخدامها من قبل الباحثين عموماً.  في عام 1995، اكتشف مختبرا ثاستروب [ 21 ] وفالكو [ 22 ] طفرة نقطية أخرى (F64L) ذات كفاءة طي تبلغ 37 درجة مئوية لهذا الهيكل، مما أدى إلى إنتاج بروتين GFP مُحسَّن (EGFP). سمح بروتين EGFP بالاستخدام العملي لبروتينات GFP في خلايا الثدييات. يبلغ معامل امتصاص بروتين EGFP (يرمز له بـ ε) 55000 M⁻¹ cm⁻¹ . [ 23 ] ويبلغ مردود الكم الفلوري (QY) لبروتين EGFP 0.60. أما السطوع النسبي، المعبر عنه بـ ε•QY، فيبلغ 33000 M⁻¹ cm⁻¹ . مع ذلك ، قد ينتج عن تسلسل EGFP المستخدم على نطاق واسع بروتين غير مقصود، باستخدام الإطار +2 كقالب. [ 24 ]

تم الإبلاغ عن Superfolder GFP (sfGFP)، وهي سلسلة من الطفرات التي تسمح لـ GFP بالطي والنضوج بسرعة حتى عند دمجها مع الببتيدات ذات الطي الضعيف، في عام 2006. [ 25 ]

أُجريت العديد من الطفرات الأخرى، بما في ذلك طفرات الألوان؛ وعلى وجه الخصوص، البروتين الفلوري الأزرق (EBFP، EBFP2، Azurite، mKalama1)، والبروتين الفلوري السماوي (ECFP، Cerulean، CyPet، mTurquoise2)، ومشتقات البروتين الفلوري الأصفر (YFP، Citrine، Venus، YPet). تحتوي مشتقات البروتين الفلوري الأزرق (باستثناء mKalama1) على استبدال Y66H. وتُظهر هذه المشتقات نطاق امتصاص واسع في منطقة الأشعة فوق البنفسجية يتمركز بالقرب من 380 نانومتر، وذروة انبعاث عند 448 نانومتر. كما طُوِّرَ بروتين فلوري أخضر متحور (BFPms1) يرتبط بشكل تفضيلي بأيونات الزنك (Zn(II)) والنحاس (Cu(II)). يحتوي BFPms1 على العديد من الطفرات المهمة، بما في ذلك طفرة Y66H في كروموفور البروتين الفلوري الأزرق، وطفرة Y145F لزيادة مردود الكم، وطفرة H148G لإحداث ثقب في البرميل بيتا، بالإضافة إلى العديد من الطفرات الأخرى التي تزيد من الذوبانية. يؤدي ارتباط أيونات الزنك (Zn(II)) إلى زيادة شدة التألق، بينما يؤدي ارتباط أيونات النحاس (Cu(II)) إلى إخماد التألق وإزاحة ذروة الامتصاص من 379 إلى 444  نانومتر. لذلك، يمكن استخدامها كمستشعر حيوي للزنك. [ 26 ]

مجموعة من المتغيرات لبروتين GFP وDsRed.

يُمكن الحصول على المزيد من تدرجات الألوان عبر ارتباط الكروموفور. الطفرة الحاسمة في مشتقات اللون السماوي هي استبدال Y66W، مما يؤدي إلى تكوين الكروموفور مع مكون إندول بدلاً من مكون فينول. يتطلب استعادة سطوع هذا الكروموفور المُعدَّل، نتيجةً لزيادة حجم مجموعة الإندول، عدة طفرات تعويضية إضافية في البرميل المحيط. في بروتينَي ECFP وCerulean، يُظهر النصف الطرفي N من السلسلة السابعة شكلين فراغيين. يرتبط كلا الشكلين بمجموعة معقدة من تفاعلات فان دير فالس مع الكروموفور. تعمل الطفرتان Y145A وH148D في Cerulean على تثبيت هذه التفاعلات، مما يسمح للكروموفور بأن يكون أكثر استواءً، وأكثر كثافة، وأقل عرضةً للتثبيط التصادمي. [ 27 ]

أدى استخدام طفرات عشوائية موجهة للموقع، بالإضافة إلى فحص قائم على قياس عمر الفلورة، إلى زيادة استقرار الشريط بيتا السابع، مما نتج عنه متغير ساطع، mTurquoise2، ذو مردود كمي (QY) قدره 0.93. [ 28 ] ويتحقق انزياح الطول الموجي نحو الأحمر لمشتقات YFP من خلال طفرة T203Y، ويعود ذلك إلى تفاعلات تكديس إلكترونات باي بين بقايا التيروسين المستبدلة والصبغة. [ 3 ] غالبًا ما تُستخدم هاتان الفئتان من المتغيرات الطيفية في تجارب نقل طاقة رنين فورستر (FRET). توفر مؤشرات FRET المشفرة جينيًا، والحساسة لجزيئات إشارات الخلية، مثل الكالسيوم أو الغلوتامات، وحالة فسفرة البروتين، وتكامل البروتين، وتكوين ثنائي المستقبلات، وغيرها من العمليات، قراءات بصرية عالية الدقة لنشاط الخلية في الوقت الحقيقي.

أدى التحوير شبه العقلاني لعدد من الأحماض الأمينية إلى ظهور طفرات حساسة للأس الهيدروجيني تُعرف باسم pHluorins، ولاحقًا pHluorins فائقة الحساسية. وباستغلال التغير السريع في الأس الهيدروجيني عند اندماج الحويصلات المشبكية، استُخدمت pHluorins الموسومة بـ synaptobrevin لتصوير النشاط المشبكي في الخلايا العصبية. [ 29 ]

تم هندسة البروتين الفلوري الأخضر الحساس للأكسدة والاختزال ( roGFP ) عن طريق إدخال السيستين في بنية البرميل بيتا. وتحدد حالة الأكسدة والاختزال للسيستين الخصائص الفلورية لـ roGFP . [ 30 ]

التسمية

غالبًا ما يكون تصنيف بروتينات GFP المعدلة مُربكًا نظرًا لتداخل استخدام عدة نسخ من GFP تحت اسم واحد. على سبيل المثال، يُشير mGFP عادةً إلى بروتين GFP ذي بلمرة طرفية N تُحفزه على الارتباط بأغشية الخلايا . مع ذلك، يُستخدم المصطلح نفسه أيضًا للإشارة إلى بروتين GFP أحادي الوحدة ، والذي غالبًا ما يُنتج عن طريق طفرة A206K التي تُعطل واجهة ثنائي الوحدات. [ 31 ] يتميز بروتين GFP من النوع البري بميل ضعيف لتكوين ثنائي الوحدات عند تركيزات أعلى من 5  ملغم/مل. يُشير mGFP أيضًا إلى "بروتين GFP المعدل"، والذي تم تحسينه من خلال استبدال الأحماض الأمينية للتعبير المستقر في الخلايا النباتية.

في الطبيعة

سحلية حية (B. floridae) تحت المجهر الفلوري.
سحلية حية ( B. floridae ) تحت المجهر الفلوري.
في مجدافيات الأرجل البحرية Pontella mimocerami

لا يزال الغرض من كلٍّ من التلألؤ البيولوجي (الأولي) (الناتج عن تأثير الإيكورين على اللوسيفيرين) والتألق (الثانوي) لبروتين GFP في قناديل البحر غير معروف. يُعبَّر عن بروتين GFP بالتزامن مع الإيكورين في حبيبات صغيرة حول حافة جسم قنديل البحر.  تمتص ذروة الإثارة الثانوية (480 نانومتر) لبروتين GFP جزءًا من الانبعاث الأزرق للإيكورين، مما يُضفي على التلألؤ البيولوجي لونًا أخضرًا. يُعدّ حمض السيرين 65 في كروموفور بروتين GFP مسؤولًا عن طيف الإثارة ثنائي الذروة لبروتين GFP من النوع البري. وهو محفوظ في جميع نظائر بروتين GFP الثلاثة التي استنسخها براشر في الأصل. تُؤدي جميع طفرات هذا الحمض تقريبًا إلى دمج طيف الإثارة في ذروة واحدة عند 395  نانومتر أو 480  نانومتر. إن الآلية الدقيقة لهذه الحساسية معقدة، ولكن يبدو أنها تتضمن تبرع السيرين 65 بذرة هيدروجين إلى الغلوتامات 222، مما يؤثر على تأين الكروموفور. [ 3 ] وبما أن طفرة واحدة يمكن أن تعزز بشكل كبير  ذروة الإثارة عند 480 نانومتر، مما يجعل البروتين الفلوري الأخضر (GFP) شريكًا أكثر كفاءة للأيكورين، يبدو أن قنديل البحر A. victoria يفضل تطوريًا طيف الإثارة الأقل كفاءة ذي الذروتين. وقد تكهن روجر تسين بأن تغير الضغط الهيدروستاتيكي مع العمق قد يؤثر على قدرة السيرين 65 على التبرع بذرة هيدروجين للكروموفور ويغير نسبة ذروتي الإثارة. وبالتالي، قد يغير قنديل البحر لون إضاءته الحيوية مع العمق. ومع ذلك، فإن انهيار أعداد قناديل البحر في ميناء فرايداي ، حيث اكتُشف البروتين الفلوري الأخضر (GFP) لأول مرة، قد أعاق إجراء المزيد من الدراسات حول دور هذا البروتين في بيئة قنديل البحر الطبيعية.

من المعروف أن معظم أنواع الرميح تنتج بروتين GFP في مناطق مختلفة من أجسامها. [ 32 ] على عكس A. victoria ، لا ينتج الرميح ضوءًا أزرق خاصًا به، ولا يزال أصل بروتين GFP الداخلي لديه مجهولًا. يتكهن البعض بأنه يجذب العوالق نحو فم الرميح، ما يمثل آلية صيد سلبية. وقد يعمل أيضًا كعامل حماية ضوئية في اليرقات، مانعًا الضرر الناجم عن الضوء الأزرق عالي الكثافة عن طريق تحويله إلى ضوء أخضر أقل كثافة. مع ذلك، لم تُختبر هذه النظريات.

وُجدت بروتينات شبيهة ببروتين GFP في أنواع متعددة من مجدافيات الأرجل البحرية ، وخاصةً من عائلتي Pontellidae و Aetideidae . [ 33 ] وقد أظهر بروتين GFP المعزول من Pontella mimocerami مستويات سطوع عالية مع مردود كمي يبلغ 0.92، مما يجعله أكثر سطوعًا بمرتين تقريبًا من بروتين EGFP الشائع الاستخدام والمعزول من A. victoria. [ 34 ]

بروتينات فلورية أخرى

رف من أنابيب الاختبار يعرض محاليل متوهجة بألوان مختلفة
تنتج البروتينات المختلفة ألوانًا فلورية مختلفة عند تعرضها للأشعة فوق البنفسجية.

توجد العديد من البروتينات الشبيهة ببروتين GFP، والتي على الرغم من انتمائها لنفس عائلة بروتين GFP، إلا أنها ليست مشتقة مباشرة من قنديل البحر Aequorea victoria . تشمل هذه البروتينات dsRed وeqFP611 و Dronpa وTagRFPs وKFP و EosFP /IrisFP وDendra وغيرها. ونظرًا لتطويرها من بروتينات في كائنات حية مختلفة، فقد تُظهر هذه البروتينات أحيانًا أساليب غير متوقعة لتكوين الكروموفور. بعض هذه البروتينات، مثل KFP، مُطوَّر من بروتينات غير فلورية أو ضعيفة الفلورة بشكل طبيعي، ليتم تحسينها بشكل كبير عن طريق الطفرات. [ 35 ] عند استخدام براميل شبيهة ببروتين GFP ذات خصائص طيفية مختلفة، يمكن استخدام طيف الإثارة لكروموفور واحد لتنشيط كروموفور آخر (نقل طاقة الرنين الفلوري)، مما يسمح بالتحويل بين أطوال موجات الضوء. [ 36 ]

طُوِّرت البروتينات الفلورية المرتبطة بـ FMN (FbFPs) في عام 2007، وهي فئة من البروتينات الفلورية الصغيرة (11-16 كيلو دالتون) غير المعتمدة على الأكسجين ، والمشتقة من مستقبلات الضوء الأزرق. وهي مصممة خصيصًا للاستخدام في الظروف اللاهوائية أو نقص الأكسجين ، حيث لا يتطلب تكوين وارتباط كروموفور الفلافين وجود الأكسجين الجزيئي، كما هو الحال في تركيب كروموفور GFP. [ 37 ]

صورة الضوء الأبيض، أو الصورة التي تراها العين، للبروتينات الفلورية في الصورة أعلاه.

يمكن للبروتينات الفلورية التي تحتوي على كروموفورات أخرى، مثل بروتين UnaG مع البيليروبين ، أن تُظهر خصائص فريدة مثل انبعاث ضوئي مُزاح نحو الأحمر فوق 600  نانومتر أو تحويل ضوئي من حالة انبعاث الضوء الأخضر إلى حالة انبعاث الضوء الأحمر. ويمكن أن يكون لها أطوال موجية للإثارة والانبعاث متباعدة بما يكفي لتحقيق التحويل بين الضوء الأحمر والأخضر.

تم هندسة فئة جديدة من البروتينات الفلورية من ألفا- ألوفيوكوسيانين ، وهو بروتين فيكوبيلوبروتين موجود في البكتيريا الزرقاء تريكودسميوم إريثرايوم ، وأُطلق عليه اسم البروتين الفلوري الأحمر فائق الصغر ( smURFP ) في عام 2016. يُدمج smURFP تلقائيًا صبغة البيلفيردين دون الحاجة إلى بروتين خارجي يُعرف باسم اللياس . [ 38 ] [ 39 ] تتطلب البروتينات الشبيهة ببروتين GFP، والمستخلصة من قناديل البحر والشعاب المرجانية، الأكسجين وتُنتج كمية مكافئة من بيروكسيد الهيدروجين عند تكوين الصبغة. [ 40 ] لا يتطلب smURFP الأكسجين ولا يُنتج بيروكسيد الهيدروجين. يتميز بروتين smURFP بمعامل امتصاص عالٍ (180,000 M⁻¹ cm⁻¹ ) وعائد كمي متوسط ​​(0.20)، مما يجعله ذا سطوع فيزيائي حيوي مماثل لبروتين eGFP ، وأكثر سطوعًا بمرتين تقريبًا من معظم البروتينات الفلورية الحمراء أو الحمراء البعيدة المشتقة من المرجان. وتتشابه الخصائص الطيفية لبروتين smURFP مع صبغة Cy5 العضوية . [ 38 ] [ 41 ]

مستعمرات الإشريكية القولونية التي تعبر عن البروتينات الفلورية.

يمكن الاطلاع على مراجعات حول فئات جديدة من البروتينات الفلورية وتطبيقاتها في المراجعات المذكورة. [ 42 ] [ 43 ]

بناء

يتميز بروتين GFP ببنية برميل بيتا تتكون من أحد عشر خيطًا بيتا مرتبة على شكل صفائح مطوية، مع حلزون ألفا يحتوي على الكروموفور المرتبط تساهميًا 4-( بارا -هيدروكسي بنزيليدين) إيميدازوليدين-5-ون (HBI) يمر عبر المركز. [ 3 ] [ 15 ] [ 16 ] تشكل خمسة حلزونات ألفا أقصر أغطية على نهايات البنية. بنية برميل بيتا عبارة عن أسطوانة مثالية تقريبًا، طولها 42 أنغستروم وقطرها 24 أنغستروم (أشارت بعض الدراسات إلى قطر 30 أنغستروم [ 17 ] )، [ 15 ] مما يُشكل ما يُعرف بتكوين "علبة بيتا"، وهو تكوين فريد من نوعه لعائلة بروتينات GFP. [ 16 ] يُعدّ HBI، وهو الشكل المُعدَّل تلقائيًا من ثلاثي الببتيد Ser65–Tyr66–Gly67، غير مُشعّ في غياب هيكل GFP المطويّ بشكل صحيح، ويوجد بشكل رئيسي في صورة الفينول غير المتأين في wtGFP. [ 44 ] تُحفّز السلاسل الجانبية المُتجهة للداخل في البرميل تفاعلات حلقية مُحددة في Ser65–Tyr66–Gly67، مما يُؤدي إلى تأين HBI إلى صورة الفينولات وتكوين الكروموفور . تُعرف هذه العملية من التعديل ما بعد الترجمة بالنضج . [ 45 ] تُؤثر شبكة الروابط الهيدروجينية وتفاعلات تكديس الإلكترونات مع هذه السلاسل الجانبية على لون وشدة وثبات GFP ومشتقاته العديدة. [ 46 ] يمنع التراص المُحكم في البرميل جزيئات المذيب، مما يحمي تألق الكروموفور من التثبيط بواسطة الماء. بالإضافة إلى التكوين الحلقي الذاتي لـ Ser65-Tyr66-Gly67، يحدث تفاعل نزع هيدروجين 1،2 عند بقايا Tyr66. [ 17 ] إلى جانب البقايا الثلاث التي تُشكّل الكروموفور، تعمل بقايا أخرى مثل Gln94 وArg96 وHis148 وThr203 وGlu222 كمثبتات. تُساهم بقايا Gln94 وArg96 وHis148 في تثبيت الكروموفور عن طريق توزيع شحنته. يُعد Arg96 أهم بقايا التثبيت لأنه يُحفّز إعادة الترتيبات البنيوية اللازمة لحلقة HBI. أي طفرة في بقايا Arg96 ستؤدي إلى انخفاض معدل نمو الكروموفور نتيجة فقدان التفاعلات الكهروستاتيكية والفراغية المناسبة. يستقبل Tyr66 روابط هيدروجينية ولا يتأين، مما يُؤدي إلى توليد تفاعلات كهروستاتيكية مواتية. [ 47 ]

فيلم GFP يعرض التركيب الكامل مع تكبير للصبغة الفلورية.
جزيئات البروتين الفلوري الأخضر (GFP) مرسومة بأسلوب كرتوني، إحداها كاملة والأخرى مع قطع جانب البرميل بيتا لإظهار الكروموفور (مُظلل بنموذج الكرة والعصا ). من بنك بيانات البروتين (PDB) : 1GFL .
مخطط شريط GFP . من PDB : 1EMA .
بنية البروتين الفلوري الأخضر (GFP) برمز PDB 1EMA. تم تمييز بقايا التيروسين التي تخضع لطفرات استبدال في الموضعين 66 و145 باللون الأحمر. يجب استبدال هذين التيروسينين في الموضعين 66 و145 بالهيستيدين والفينيل ألانين، على التوالي، لكي يتألق هذا البروتين باللون الأزرق.

البروتين الفلوري الأزرق (BFP) هو الشكل الأزرق للبروتين الفلوري الأخضر (GFP). يتميز BFP ببنية مشابهة جدًا لـ GFP. في بنية BFP، يؤدي استبدال حمضين أمينيين إلى تغيير فلوريته من الأخضر إلى الأزرق. تحدث الطفرة الأولى داخل الكروموفور في GFP عند الموضع 66، حيث يتحول التيروسين إلى هيستيدين. أما الطفرة الثانية في BFP فتحدث عند التيروسين في الموضع 145، حيث يتحول إلى فينيل ألانين. ينتج عن التفاعل الحلقي الذاتي والأكسدة للسيرين والتيروسين والجليسين تكوين الكروموفور في GFP. تشكل هذه الأحماض الأمينية الثلاثة في المواضع 65-67 الكروموفور الفلوري الأخضر. عند استبدال التيروسين في الكروموفور بالهيستيدين، تتغير بنية طي البروتين وطيف انبعاثه. تُضاف طفرة T145F أيضًا لزيادة استقرار البروتين وتكثيف التألق. هذه الطفرات هي التي تُحوّل البروتين الأخضر الفلوري (GFP) إلى البروتين الأزرق الفلوري (BFP).

التكوين الذاتي المحفز للكروموفور في wtGFP

من الناحية الميكانيكية، تتضمن العملية تكوين حلقة بوساطة قاعدة، يليه نزع الماء والأكسدة. في تفاعل المركب 7a مع المركب 8، يتم تكوين الإينامين من الإيمين، بينما في تفاعل المركب 7b مع المركب 9، يتم انتزاع بروتون. [ 48 ] تم تمييز الفلوروفور HBI المتكون باللون الأخضر.

يتم تحفيز التفاعلات بواسطة بقايا Glu222 و Arg96. [ 48 ] [ 49 ] آلية مماثلة ممكنة أيضًا مع الثريونين بدلاً من Ser65.

التطبيقات

تقارير المراسل

يمكن استخدام البروتين الفلوري الأخضر كجين مراسل . [ 50 ] [ 51 ]

على سبيل المثال، يمكن استخدام البروتين الفلوري الأخضر (GFP) كمؤشر لمستويات السمية البيئية. وقد ثبتت فعالية هذا البروتين في قياس مستويات سمية العديد من المواد الكيميائية، بما في ذلك الإيثانول، والفورمالديهايد ، والفينول ، والتريكلوسان، والبارابين. يتميز GFP بكونه بروتينًا مؤشرًا ممتازًا لأنه لا يؤثر على الخلية المضيفة عند إدخاله إلى بيئتها الخلوية. وبفضل هذه الخاصية، لا حاجة إلى صبغة خارجية أو ATP أو عوامل مساعدة. وفيما يتعلق بمستويات الملوثات، تم قياس الفلورة لتقييم تأثير الملوثات على الخلية المضيفة، كما تم قياس كثافة الخلايا المضيفة. وأظهرت نتائج دراسة أجراها سونغ وكيم وسيو (2016) انخفاضًا في كل من الفلورة وكثافة الخلايا مع ازدياد مستويات الملوثات، مما يشير إلى انخفاض النشاط الخلوي. ويلزم إجراء المزيد من الأبحاث حول هذا التطبيق تحديدًا لفهم آلية عمل GFP كمؤشر للملوثات. [ 52 ] وقد لوحظت نتائج مماثلة في أسماك الزيبرا، حيث كانت أسماك الزيبرا التي حُقنت ببروتين GFP أكثر عرضة بنحو عشرين مرة للتعرف على الإجهاد الخلوي من أسماك الزيبرا التي لم تُحقن ببروتين GFP. [ 53 ]

المزايا

تتمثل الميزة الأكبر لبروتين GFP في إمكانية توريثه، اعتمادًا على طريقة إدخاله، مما يسمح بمواصلة دراسة الخلايا والأنسجة التي يُعبَّر فيه. وتُعدّ رؤية بروتين GFP عملية غير جراحية، إذ لا تتطلب سوى إضاءة بالضوء الأزرق. لا يتداخل بروتين GFP وحده مع العمليات البيولوجية، ولكن عند دمجه مع البروتينات المستهدفة، يلزم تصميم روابط دقيقة للحفاظ على وظيفة البروتين المستهدف. علاوة على ذلك، إذا استُخدم مع مونومر، فإنه قادر على الانتشار بسهولة في جميع أنحاء الخلايا. [ 54 ]

المجهر الفلوري

التصوير فائق الدقة باستخدام بروتينين اندماجيين (GFP-Snf2H وRFP-H2A)، ودراسات التموضع المشترك (2CLM) في نواة خلية سرطان العظام. 120000 جزيء متمركز في منطقة واسعة (470  ميكرومتر مربع ).

أدى توفر البروتين الفلوري الأخضر (GFP) ومشتقاته إلى تغيير جذري في مفهوم المجهر الفلوري وكيفية استخدامه في بيولوجيا الخلية وغيرها من التخصصات البيولوجية. [ 55 ] في حين أن معظم الجزيئات الفلورية الصغيرة، مثل FITC (إيزوثيوسيانات الفلورسين)، سامة ضوئيًا بشدة عند استخدامها في الخلايا الحية، فإن البروتينات الفلورية، مثل GFP، عادةً ما تكون أقل ضررًا بكثير عند إضاءتها في الخلايا الحية. وقد حفز هذا على تطوير أنظمة مجهرية فلورية آلية للغاية للخلايا الحية، والتي يمكن استخدامها لمراقبة الخلايا بمرور الوقت وهي تُعبر عن بروتين واحد أو أكثر موسوم ببروتينات فلورية.

توجد تقنيات عديدة لاستخدام البروتين الفلوري الأخضر (GFP) في تجارب تصوير الخلايا الحية. وأكثر الطرق مباشرةً لاستخدام GFP هي ربطه مباشرةً بالبروتين المراد دراسته. على سبيل المثال، يمكن تضمين GFP في بلازميد يُعبّر عن جينات أخرى للإشارة إلى نجاح عملية نقل الجين المطلوب. وهناك طريقة أخرى تتمثل في استخدام GFP يحتوي على طفرة يتغير فيها لون الفلورة من الأخضر إلى الأصفر بمرور الوقت، وهو ما يُعرف بالمؤقت الفلوري. وباستخدام هذا المؤقت، يستطيع الباحثون دراسة حالة إنتاج البروتين، مثل التنشيط الحديث، أو التنشيط المستمر، أو التعطيل الحديث، وذلك بناءً على اللون الذي يُظهره البروتين الفلوري. [ 56 ] وفي مثال آخر، قام العلماء بتعديل GFP ليصبح نشطًا فقط بعد التعرض للإشعاع، مما يمنح الباحثين أداةً لتنشيط أجزاء معينة من الخلية بشكل انتقائي، ومراقبة مسار البروتينات الموسومة بـ GFP من موقعها الأصلي. [ 57 ] هذان مثالان فقط في مجال مزدهر من المجهر الفلوري ويمكن العثور على مراجعة أكثر اكتمالاً لأجهزة الاستشعار البيولوجية التي تستخدم GFP والبروتينات الفلورية الأخرى هنا [ 58 ].

على سبيل المثال، استُخدم بروتين GFP على نطاق واسع في وسم الحيوانات المنوية لكائنات حية مختلفة لأغراض التحديد، كما هو الحال في ذبابة الفاكهة (Drosophila melanogaster )، حيث يُمكن استخدام التعبير عن GFP كعلامة لصفة معينة. كما يُمكن التعبير عن GFP في تراكيب مختلفة تُتيح التمييز المورفولوجي. في هذه الحالات، يُدمج جين إنتاج GFP في جينوم الكائن الحي في منطقة الحمض النووي التي تُشفّر البروتينات المستهدفة والتي تُسيطر عليها نفس التسلسلات التنظيمية ؛ أي أن التسلسل التنظيمي للجين يُسيطر الآن على إنتاج GFP، بالإضافة إلى البروتين (البروتينات) الموسومة. في الخلايا التي يُعبّر فيها عن الجين، وتُنتج فيها البروتينات الموسومة، يُنتج GFP في الوقت نفسه. وبالتالي، فإن الخلايا التي يُعبّر فيها عن الجين الموسوم، أو تُنتج فيها البروتينات المستهدفة، هي فقط التي ستُظهر تألقًا عند فحصها بالمجهر الفلوري. أعاد تحليل أفلام التصوير الزمني تعريف فهم العديد من العمليات البيولوجية، بما في ذلك طي البروتين ونقله وديناميكيات الحمض النووي الريبي (RNA)، والتي كانت تُدرس سابقًا باستخدام مواد ثابتة (أي ميتة). تُستخدم البيانات المُستحصلة أيضًا لمعايرة النماذج الرياضية للأنظمة داخل الخلايا ولتقدير معدلات التعبير الجيني. [ 59 ] وبالمثل، يمكن استخدام البروتين الفلوري الأخضر (GFP) كمؤشر للتعبير البروتيني في الأنظمة غير المتجانسة. في هذه الحالة، تُدخل البروتينات المدمجة التي تحتوي على GFP بشكل غير مباشر، باستخدام الحمض النووي الريبي (RNA) الخاص بالبنية، أو بشكل مباشر، باستخدام البروتين الموسوم نفسه. تُعد هذه الطريقة مفيدة لدراسة الخصائص التركيبية والوظيفية للبروتين الموسوم على مستوى الجزيئات الكبيرة أو الجزيئات المفردة باستخدام المجهر الفلوري.

يستخدم مجهر Vertico SMI بتقنية SPDM Phymod ما يُعرف بتأثير "التبييض الضوئي العكسي" للأصباغ الفلورية مثل GFP ومشتقاته لتحديد مواقعها كجزيئات منفردة بدقة بصرية تبلغ 10  نانومتر. ويمكن أيضًا إجراء ذلك من خلال تحديد موقع مشترك لمشتقين من GFP (2CLM). [ 60 ]

من الاستخدامات الفعّالة الأخرى لبروتين GFP التعبير عنه في مجموعات صغيرة من خلايا محددة. وهذا يُمكّن الباحثين من الكشف البصري عن أنواع معينة من الخلايا في المختبر (في طبق بتري)، أو حتى في الكائن الحي. [ 61 ] يُعتبر بروتين GFP مؤشرًا موثوقًا للتعبير الجيني في الخلايا حقيقية النواة عند قياس الفلورة باستخدام قياس التدفق الخلوي. [ 62 ] يُعدّ الجمع الجيني بين عدة متغيرات طيفية من بروتين GFP حيلة مفيدة لتحليل دوائر الدماغ ( Brainbow ). [ 63 ] تشمل الاستخدامات الأخرى المثيرة للاهتمام للبروتينات الفلورية في الأدبيات العلمية استخدامها كمستشعرات لجهد غشاء الخلايا العصبية ، [ 64 ] وتتبع مستقبلات AMPA على أغشية الخلايا، [ 65 ] ودخول الفيروسات وإصابة فيروسات الإنفلونزا والفيروسات البطيئة، [ 66 ] [ 67 ] وغيرها.

وقد وُجد أيضاً أن سلالات جديدة من فئران GFP المعدلة وراثياً قد تكون ذات صلة بالعلاج الجيني والطب التجديدي. [ 68 ] وباستخدام GFP عالي التعبير، تُظهر الفئران المعدلة وراثياً تعبيراً عالياً في معظم الأنسجة، وفي العديد من الخلايا التي لم يتم توصيفها أو تم توصيفها بشكل غير كافٍ في فئران GFP المعدلة وراثياً السابقة.

ثبتت فائدة البروتين الفلوري الأخضر (GFP) في علم الأحياء التجميدي كاختبار حيوية . وقد بلغت قيمة معامل الارتباط بين الحيوية المقاسة باختبارات التريبان الأزرق 0.97. [ 69 ] ومن التطبيقات الأخرى استخدام نقل الجينات المشترك مع البروتين الفلوري الأخضر كعنصر تحكم داخلي لكفاءة نقل الجينات في خلايا الثدييات. [ 70 ]

من الاستخدامات المبتكرة المحتملة لبروتين GFP استخدامه كجهاز مراقبة دقيق للعمليات الخلوية الداخلية عبر نظام ليزر eGFP مصنوع من خط خلوي لجنين كلوي بشري. يُصنع أول ليزر حيوي مُهندس عن طريق خلية تُعبّر عن بروتين eGFP داخل تجويف بصري عاكس، وتُسلط عليها نبضات من الضوء الأزرق. عند عتبة نبضة معينة، يصبح خرج eGFP البصري أكثر سطوعًا ومتجانسًا تمامًا بلون أخضر نقي بطول موجي 516  نانومتر. قبل أن يُشع كضوء ليزر، يرتد الضوء ذهابًا وإيابًا داخل تجويف الرنين ويمر عبر الخلية عدة مرات. من خلال دراسة التغيرات في النشاط البصري، قد يتمكن الباحثون من فهم العمليات الخلوية بشكل أفضل. [ 71 ] [ 72 ]

يُستخدم البروتين الفلوري الأخضر (GFP) على نطاق واسع في أبحاث السرطان لوسم وتتبع الخلايا السرطانية. وقد استُخدمت الخلايا السرطانية الموسومة بـ GFP لنمذجة عملية الانتقال السرطاني، وهي العملية التي تنتشر من خلالها الخلايا السرطانية إلى أعضاء بعيدة. [ 73 ]

بروتين GFP المنقسم

يمكن استخدام البروتين الفلوري الأخضر (GFP) لتحليل التموضع المشترك للبروتينات. ويتحقق ذلك بتقسيم البروتين إلى جزأين قادرين على التجميع الذاتي، ثم دمج كل جزء منهما مع البروتينين المراد دراستهما. لا تستطيع أجزاء GFP غير المكتملة هذه، منفردةً، إصدار الفلورة. ولكن، إذا كان البروتينان المراد دراستهما متوضعين في نفس الموقع، فإن جزئي GFP يتجمعان معًا لتكوين بنية شبيهة بـ GFP قادرة على إصدار الفلورة. وبالتالي، من خلال قياس مستوى الفلورة، يمكن تحديد ما إذا كان البروتينان المراد دراستهما متوضعين في نفس الموقع. [ 74 ]

التصوير الفوتوغرافي الماكرو

يمكن تتبع العمليات البيولوجية واسعة النطاق، مثل انتشار العدوى الفيروسية، باستخدام وسم البروتين الفلوري الأخضر (GFP). [ 75 ] في السابق، استُخدمت الأشعة فوق البنفسجية المُسببة للطفرات لإضاءة الكائنات الحية (انظر على سبيل المثال [ 76 ] ) للكشف عن تعبير البروتين الفلوري الأخضر وتصويره. ومؤخرًا، طُوّرت تقنية تستخدم مصابيح LED غير مُسببة للطفرات [ 77 ] للتصوير الفوتوغرافي واسع النطاق. [ 78 ] تعتمد هذه التقنية على ملحق كاميرا الإضاءة فوق البنفسجية [ 79 ] ، استنادًا إلى المبدأ نفسه المُستخدم في بناء مجاهر الإضاءة فوق البنفسجية .

الحيوانات الأليفة المعدلة وراثيًا

الفئران التي تعبر عن بروتين GFP تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية (يسار ويمين)، مقارنة بالفأر العادي (في المنتصف)

تم ابتكار الأرنب ألبا ، وهو أرنب أخضر متألق، في مختبر فرنسي بتكليف من إدواردو كاك باستخدام البروتين الفلوري الأخضر (GFP) لأغراض فنية وتعليق اجتماعي. [ 80 ] تسوّق شركة يوركتاون تكنولوجيز الأمريكية أسماك الزيبرا الخضراء المتألقة ( GloFish ) لمحلات بيع أحواض السمك، والتي طُوّرت في الأصل للكشف عن التلوث في المجاري المائية. وقد سوّقت شركة نيون بيتس، وهي شركة أمريكية، فئرانًا خضراء متألقة لقطاع الحيوانات الأليفة تحت اسم نيون مايس. [ 81 ] وقد قام فريق من الباحثين بقيادة وو شين تشيه في قسم علوم وتكنولوجيا الحيوان بجامعة تايوان الوطنية بتربية خنازير خضراء متألقة، تُعرف باسم نويل . [ 82 ] وقد ابتكر فريق ياباني أمريكي قططًا خضراء متألقة كإثبات لمفهوم استخدامها ككائنات نموذجية محتملة لدراسة الأمراض، وخاصة فيروس نقص المناعة البشرية . [ 83 ] وفي عام 2009، قام فريق من كوريا الجنوبية من جامعة سيول الوطنية بتربية أول كلاب بيغل معدلة وراثيًا باستخدام خلايا ليفية من شقائق النعمان البحرية. تُصدر الكلاب ضوءًا فلوريًا أحمر، وهي مصممة لتمكين العلماء من دراسة الجينات التي تسبب أمراضًا بشرية مثل الناركوليبسيا والعمى . [ 84 ]

فن

تمثال "قنديل البحر الفولاذي " (2006) للفنان جوليان فوس-أندريا، والمبني على بروتين GFP . تُظهر الصورة التمثال المصنوع من الفولاذ المقاوم للصدأ في مختبرات فرايداي هاربور في جزيرة سان خوان (واشنطن، الولايات المتحدة الأمريكية)، وهو المكان الذي تم فيه اكتشاف بروتين GFP.

ابتكر الفنان الألماني جوليان فوس-أندريا ، المتخصص في "المنحوتات البروتينية"، [ 85 ] منحوتات مستوحاة من بنية البروتين الفلوري الأخضر (GFP)، بما في ذلك منحوتة "البروتين الفلوري الأخضر" (2004) التي يبلغ ارتفاعها 1.70 متر (5 أقدام و7 بوصات) ، [ 86 ] ومنحوتة "قنديل البحر الفولاذي" (2006) التي يبلغ ارتفاعها 1.40 متر (4 أقدام و7 بوصات) . وتقع المنحوتة الأخيرة في موقع اكتشاف البروتين الفلوري الأخضر على يد شيمومورا عام 1962، في مختبرات فرايداي هاربور التابعة لجامعة واشنطن . [ 87 ]    

انظر أيضاً

مراجع

  1. ^ Ormö M، Cubitt AB، Kallio K، Gross LA، Tsien RY، Remington SJ (سبتمبر 1996). "التركيب البلوري لبروتين الفلورسنت الأخضر Aequorea victoria". علوم . 273 (5280): 1392– 5. بيب كود : 1996Sci...273.1392O . دوى : 10.1126/science.273.5280.1392 . بميد 8703075 . S2CID 43030290 .  
  2. ↑ بريندرغاست إف جي، مان كيه جي (أغسطس 1978). "الخواص الكيميائية والفيزيائية للأيكورين والبروتين الفلوري الأخضر المعزول من إيكوريا فورسكاليا". الكيمياء الحيوية . 17 (17): 3448-53 . doi : 10.1021/bi00610a004 . PMID 28749 . 
  3. 1 2 3 4 تسين، ر. ي. (1998). "البروتين الفلوري الأخضر" (ملف PDF) . المراجعة السنوية للكيمياء الحيوية . 67 : 509-44 . doi : 10.1146/annurev.biochem.67.1.509 . PMID 9759496 . 
  4. ↑ صالح أ (2019). "البروتينات الفلورية" . في كوكس ج (محرر). أساسيات التصوير الفلوري . بوكا راتون: دار نشر جيني ستانفورد. ص 122. doi : 10.1201/9781351129404 . ISBN  978-1-351-12940-4. S2CID 213688192 . 
  5. ↑ ستيبانينكو، أو. في.، فيرخوشا، في. في.، كوزنتسوفا، آي. إم.، أوفيرسكي، في. إن.، توروفيروف، ك. ك. (أغسطس 2008). "البروتينات الفلورية كعلامات حيوية ومستشعرات حيوية: إلقاء الضوء على العمليات الجزيئية والخلوية" . مجلة علوم البروتين والببتيد الحالية . 9 (4): 338-369 . doi : 10.2174/138920308785132668 . PMC 2904242. PMID 18691124 .  
  6. ↑ تشالفي إم، تو واي، أويسكيرشن جي، وارد دبليو دبليو، براشر دي سي (فبراير 1994). "البروتين الفلوري الأخضر كعلامة للتعبير الجيني". مجلة ساينس . 263 (5148). المكتبة الوطنية للطب: 802-805 . رمز Bibcode : 1994Sci...263..802C . doi : 10.1126/science.8303295 . PMID 8303295 . 
  7. ↑ فيليبس، جي جي (أكتوبر 2001). "البروتين الفلوري الأخضر - فكرة رائعة لدراسة توضع البروتينات البكتيرية". رسائل علم الأحياء الدقيقة FEMS . 204 (1): 9-18 . doi : 10.1111/j.1574-6968.2001.tb10854.x . PMID 11682170 . 
  8. ↑ أوكرت دبليو، بيدرسن إل، غونزبرغ دبليو (2000). "ناقل فيروسي قهقري للبروتين الفلوري الأخضر: توليد خلايا منتجة عالية التركيز ومستخلص فيروسي". العلاج الجيني للسرطان . طرق في الطب الجزيئي. المجلد 35. الصفحات 275-285 . doi : 10.1385/1-59259-086-1:275 . ISBN   1-59259-086-1PMID 21390811​​ 
  9. ↑ غودمان، إس آر، محرر (2008). "الفصل 1 - أدوات عالم الأحياء الخلوية: البروتين الفلوري الأخضر". بيولوجيا الخلية الطبية ( الطبعة الثالثة). أمستردام: إلسيفير/أكاديميك برس. الصفحات 14-25 . doi : 10.1016/B978-0-12-370458-0.50006-2 . ISBN   978-0-12-370458-0. S2CID 90224559 . 
  10. ↑ شيمومورا، أو.، جونسون، ف. هـ.، سايغا، ي. (يونيو 1962). "استخلاص وتنقية وخصائص الإيكورين، وهو بروتين مضيء بيولوجيًا من قنديل البحر المضيء، إيكوريا". مجلة علم وظائف الأعضاء الخلوية والمقارنة . 59 (3): 223-239 . doi : 10.1002/jcp.1030590302 . PMID 13911999 . 
  11. ↑ موريس هـ، شيمومورا أ، جونسون ف.هـ، وينانت ج (يونيو 1974). "انتقال الطاقة بين الجزيئات في النظام البيولوجي المتألق لـ Aequorea". الكيمياء الحيوية . 13 (12): 2656-2662 . Bibcode : 1974Bioc...13.2656M . doi : 10.1021/bi00709a028 . PMID 4151620 . 
  12. ↑ براشر دي سي، إيكنرود في كي، وارد دبليو دبليو، بريندرغاست إف جي، كورمييه إم جيه (فبراير 1992). "البنية الأولية للبروتين الأخضر الفلوري في قنفذ البحر Aequorea victoria". جين . 111 (2): 229-33 . doi : 10.1016/0378-1119(92)90691-H . PMID 1347277 . 
  13. ↑ تشالفي إم، تو واي، أويسكيرشن جي، وارد دبليو دبليو، براشر دي سي (فبراير 1994). "البروتين الفلوري الأخضر كعلامة للتعبير الجيني". مجلة ساينس . 263 (5148): 802-805 . رمز Bibcode : 1994Sci...263..802C . doi : 10.1126/science.8303295 . PMID 8303295. S2CID 9043327 .  
  14. ↑ إينوي إس، تسوجي إف آي (مارس 1994). "بروتين الفلورسنت الأخضر في قنديل البحر إيكوريا. التعبير عن الجين وخصائص الفلورة للبروتين المؤتلف" . رسائل FEBS . 341 ( 2-3 ): 277-280 . Bibcode : 1994FEBSL.341..277I . doi : 10.1016/0014-5793(94)80472-9 . PMID 8137953 . 
  15. 1 2 3 Ormö M, Cubitt AB, Kallio K, Gross LA, Tsien RY, Remington SJ (سبتمبر 1996). "التركيب البلوري لبروتين الفلورسنت الأخضر Aequorea victoria". علوم . 273 (5280): 1392– 5. بيب كود : 1996Sci...273.1392O . دوى : 10.1126/science.273.5280.1392 . بميد 8703075 . S2CID 43030290 .  
  16. 1 2 3 يانغ ف، موس إل جي، فيليبس جي إن (أكتوبر 1996). "البنية الجزيئية للبروتين الفلوري الأخضر" (ملف PDF) . مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 14 (10): 1246-1251 . doi : 10.1038/nbt1096-1246 . hdl : 1911/19233 . PMID 9631087. S2CID 34713931 .  
  17. 1 2 3 بريجك ك، سيكسما ت ك، كيتس ب أ، كاين س ر، تسين ر ي، أورمو م، وآخرون (مارس 1997). "الأساس البنيوي للإثارة المزدوجة والتماثل الضوئي للبروتين الفلوري الأخضر في قنديل البحر Aequorea victoria " . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 94 (6): 2306-2311 . Bibcode : 1997PNAS...94.2306B . doi : 10.1073/pnas.94.6.2306 . PMC 20083. PMID 9122190 .   
  18. ↑ شانر، ن. س.، شتاينباخ، ب. أ.، تسين، ر. ي. (ديسمبر 2005). "دليل لاختيار البروتينات الفلورية" (ملف PDF) . مجلة Nature Methods . 2 (12): 905-909 . doi : 10.1038/nmeth819 . PMID 16299475. S2CID 10024284 .  
  19. ↑ ويلهلمسون م، تور ي (2016). نظائر فلورية لوحدات بناء الجزيئات الحيوية: التصميم والتطبيقات . نيو جيرسي: وايلي. ISBN 978-1-118-17586-6.
  20. ↑ هايم ر، كوبيت أ ب، تسين ر ي (فبراير 1995). "تحسين التألق الأخضر" ( ملف PDF) . مجلة نيتشر . 373 (6516): 663-664 . Bibcode : 1995Natur.373..663H . doi : 10.1038/373663b0 . PMID 7854443. S2CID 40179694 .  
  21. ^ براءة الاختراع الأمريكية رقم 6172188 ، Thastrup O، Tullin S، Kongsbak Poulsen L، Bjørn S، "البروتينات الفلورية"، نُشرت في 2001-01-09 
  22. ↑ كورماك بي بي، فالديفيا آر إتش، فالكو إس (1996). "طفرات مُحسَّنة بتقنية فرز الخلايا المنشطة بالفلورة (FACS) للبروتين الفلوري الأخضر (GFP)" . جين . 173 (1 عدد خاص): 33-38 . doi : 10.1016/0378-1119(95)00685-0 . PMID 8707053 . 
  23. ↑ ماكراي إس آر، براون سي إل، بوشيل جي آر (مايو 2005). "تنقية سريعة لبروتينات EGFP وEYFP وECFP بنقاء وإنتاجية عاليتين". التعبير عن البروتين وتنقيته . 41 (1): 121-127 . doi : 10.1016/j.pep.2004.12.030 . PMID 15802229 . 
  24. ↑ وانغ ز، ما هـ، ماو ي، ما ك (2026-06-06). "تسلسل eGFP المستخدم على نطاق واسع ينتج عنه منتج بروتيني غير مقصود". bioRxiv 10.64898/2026.06.02.729456 . 
  25. ↑ Pédelacq JD, Cabantous S, Tran T, Terwilliger TC, Waldo GS (يناير 2006). "هندسة وتوصيف بروتين فلوري أخضر فائق الطي". Nature Biotechnology . 24 (1): 79–88 . doi : 10.1038/nbt1172 . PMID 16369541. S2CID 2966399 .  
  26. ↑ باروندو دي بي، كاسمان سي جيه، تاينر جيه إيه، جيتزوف إي دي (أبريل 2002). "الكيمياء البنيوية لمستشعر حيوي للزنك من البروتين الفلوري الأخضر". مجلة الجمعية الكيميائية الأمريكية . 124 (14): 3522-3524 . Bibcode : 2002JAChS.124.3522B . doi : 10.1021/ja0176954 . PMID 11929238 . 
  27. ↑ ليليموسين إم، نويركليرك-سافوي إم، لازارينو-سايز سي، بايتزولد بي، لو فوت إس، تشازال آر، وآخرون . (أكتوبر 2009). “الديناميكيات الجوهرية في ECFP و Cerulean للتحكم في إنتاجية الكم الفلوري”. الكيمياء الحيوية . 48 (42): 10038– 10046. بيب كود : 2009Bioc...4810038L . دوى : 10.1021/bi901093w . بميد 19754158 .  
  28. ^ جودهارت جيه، فون ستيتن د، نويركليرك-سافوي إم، ليليموسين إم، جوسين إل، هينك إم إيه، وآخرون . (2012). "التطور الموجه بالبنية لبروتينات الفلورسنت السماوي نحو إنتاج كمي بنسبة 93٪" . اتصالات الطبيعة . 3 751. بيب كود : 2012NatCo...3..751G . دوى : 10.1038/ncomms1738 . بمك 3316892 . بميد 22434194 .   
  29. ↑ ميسينبوك، جي، دي أنجيليس، دي إيه، روثمان، جي إي (يوليو 1998). "تصوير الإفراز والنقل المشبكي باستخدام البروتينات الفلورية الخضراء الحساسة للأس الهيدروجيني". نيتشر . 394 ( 6689): 192-195 . Bibcode : 1998Natur.394..192M . doi : 10.1038/28190 . PMID 9671304. S2CID 4320849 .  
  30. ↑ هانسون جي تي، أغيلر آر، أوغلسبي دي، كانون إم، كابالدي آر إيه، تسين آر واي، وآخرون (مارس 2004). "دراسة جهد الأكسدة والاختزال للميتوكوندريا باستخدام مؤشرات البروتين الفلوري الأخضر الحساسة للأكسدة والاختزال" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 279 (13): 13044-53 . Bibcode : 2004JBiCh.27913044H . doi : 10.1074/jbc.M312846200 . PMID 14722062 .  
  31. ↑ زكرياس، د. أ.، فيولين، ج. د.، نيوتن، أ. س.، تسين، ر. ي. (مايو 2002). "تقسيم بروتينات GFP أحادية الوحدة المعدلة بالدهون إلى نطاقات دقيقة غشائية للخلايا الحية". مجلة ساينس . 296 (5569): 913-916 . رمز Bibcode : 2002Sci...296..913Z . doi : 10.1126/science.1068539 . PMID: 11988576. S2CID : 14957077 .  
  32. ↑ يو جيه إكس، هولاند إن دي، هولاند إل زد، ديهين دي دي (يونيو 2016). "تطور الجينات المشفرة للبروتينات الفلورية الخضراء: رؤى من رأسيات الحبل (الرميح)" . التقارير العلمية . 6 (1) 28350. Bibcode : 2016NatSR...628350Y . doi : 10.1038/srep28350 . PMC 4911609. PMID 27311567 .  
  33. ↑ هانت، إم إي، وشيرر، إم بي، وفيراري، إف دي، وماتز، إم في (يوليو 2010). "بروتينات فلورية خضراء شديدة السطوع من مجدافيات الأرجل من نوع Pontellid، Pontella mimocerami" . PLOS ONE . 5 (7) e11517. Bibcode : 2010PLoSO...511517H . doi : 10.1371/journal.pone.0011517 . PMC 2904364. PMID 20644720 .  
  34. ↑ "eGFP" . FPbase .
  35. ↑ تشوداكوف دي إم، بيلوسوف في في، زارايسكي إيه جي، نوفوسيلوف في في، ستاروفيروف دي بي، زوروف دي بي، وآخرون . (فبراير 2003). "تحفيز البروتينات الفلورية لوضع علامات ضوئية دقيقة في الجسم الحي". مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 21 (2): 191-194 . doi : 10.1038/nbt778 . PMID 12524551. S2CID 52887792 .   
  36. ↑ وينز، إم دي، وشين، واي، ولي، إكس، وسالم، إم إيه، وسميسدوم، إن، وتشانغ، دبليو، وآخرون . (ديسمبر 2016). "بروتين فلوري ثنائي الوحدات متغاير أخضر-أحمر ذو كفاءة عالية في نقل طاقة الرنين الفلوري". ChemBioChem . 17 (24): 2361-2367 . doi : 10.1002/cbic.201600492 . PMID 27781394. S2CID 4301322 .   
  37. ↑ دريبر تي، إيغرت تي، سيركولون إف، هيك إيه، كراوس يو، غوتيرل جيه كيه، وآخرون (أبريل 2007). "بروتينات مُبلِّغة للتألق الحيوي في الجسم الحي بدون أكسجين". مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 25 (4): 443-445 . Bibcode : 2007NatBi..25..443D . doi : 10.1038/nbt1293 . PMID 17351616. S2CID 7335755 .   
  38. 1 2 رودريغيز إي إيه، تران جي إن، غروس إل إيه، كريسب جيه إل، شو إكس، لين جيه واي، وآخرون . (سبتمبر 2016). "بروتين فلوري أحمر بعيد تطور من بروتين فيكوبيلوبروتين بكتيري أزرق" . نيتشر ميثودز . 13 (9): 763-769 . doi : 10.1038/nmeth.3935 . PMC 5007177. PMID 27479328 .   
  39. ↑ ماتسون إس، تران جي إن، رودريغيز إي إيه (2023). "التطور الموجه للبروتينات الفلورية في البكتيريا". في شارما إم (محرر). البروتينات الفلورية . طرق في البيولوجيا الجزيئية. المجلد 2564. نيويورك، نيويورك: سبرينغر الولايات المتحدة. الصفحات 75-97 . doi : 10.1007/978-1-0716-2667-2_4 . ISBN   978-1-0716-2666-5PMID 36107338​​ 
  40. ↑ تسين، ر. ي . (1998-01-01). "البروتين الفلوري الأخضر". المراجعة السنوية للكيمياء الحيوية . 67 (1): 509-44 . doi : 10.1146/annurev.biochem.67.1.509 . PMID 9759496. S2CID 8138960 .  
  41. ↑ مايتي أ، بافالو سي زد، سوراب إس، مونتيسينوس-فرانجولا إف، هاشي جيه إس، كونلون دبليو جيه، وآخرون . (يوليو 2023). "الخصائص البنيوية والضوئية الفيزيائية للبروتين الفلوري الأحمر الصغير" . نيتشر كوميونيكيشنز . 14 (1) 4155. Bibcode : 2023NatCo..14.4155M . doi : 10.1038/ s41467-023-39776-9 . PMC 10338489. PMID 37438348 .   
  42. ↑ رودريغيز إي إيه، كامبل آر إي، لين جيه واي، لين إم زد، مياواكي إيه، بالمر إيه إي، وآخرون . (فبراير 2017). "مجموعة الأدوات المتنامية والمتألقة للبروتينات الفلورية والنشطة ضوئيًا" . اتجاهات في العلوم البيوكيميائية . 42 (2): 111-129 . doi : 10.1016/j.tibs.2016.09.010 . PMC 5272834. PMID 27814948 .   
  43. ↑ مونتيسينوس-فرانجولا، ف.، لين، ج. ي.، رودريغيز، إ. أ. (16 نوفمبر 2020). "البروتينات الفلورية للتصوير الحيوي، أين البيلفيردين؟". معاملات الجمعية الكيميائية الحيوية . 48 (6): 2657-2667 . doi : 10.1042/BST20200444 . PMID 33196077. S2CID 226971864 .  
  44. ↑ بوكمان إس إتش، وورد دبليو دبليو (1982). "التمسخ العكسي لبروتين الفلورسنت الأخضر في قنفذ البحر: الفصل الفيزيائي وتوصيف البروتين المُعاد تكوينه". الكيمياء الحيوية . 21 (19): 4535-4540 . doi : 10.1021/bi00262a003 . PMID 6128025 . 
  45. ↑ باولز إل جيه، تشانغ إل، تشان إن إتش، دورستين بي سي، واشتر آر إم (سبتمبر 2008). "دراسات تأثير النظائر الحركية على معدل تكوين الكروموفور من الصفر في متغيرات GFP سريعة وبطيئة النضج" . الكيمياء الحيوية . 47 (38): 10111-22 . doi : 10.1021/bi8007164 . PMC 2643082. PMID 18759496 .  
  46. ↑ تشوداكوف د.م، ماتز م.ف، لوكيانوف س، لوكيانوف ك.أ (يوليو 2010). "البروتينات الفلورية وتطبيقاتها في تصوير الخلايا والأنسجة الحية". المراجعات الفيزيولوجية . 90 (3): 1103-1163 . doi : 10.1152/physrev.00038.2009 . PMID 20664080. S2CID 10767597 .  
  47. ↑ ستيبانينكو، أو. في.، فيرخوشا، في. في.، شافلوفسكي، إم. إم.، كوزنتسوفا، آي. إم.، أوفيرسكي، في. إن.، توروفيروف، ك. ك. (نوفمبر 2008). " فهم دور الأرجينين 96 في بنية واستقرار البروتين الفلوري الأخضر" . البروتينات . 73 (3): 539-551 . doi : 10.1002/prot.22089 . PMC 2908022. PMID 18470931 .  
  48. 1 2 روزينو إم إيه، هوفمان إتش إيه، فيل إم إي، واشتر آر إم (أبريل 2004). "يدعم التركيب البلوري لمتغير Y66L من البروتين الفلوري الأخضر آلية التكوين الحلقي والأكسدة والتجفيف لنضج الكروموفور". الكيمياء الحيوية . 43 (15): 4464-4472 . doi : 10.1021/bi0361315 . PMID 15078092 . 
  49. ↑ ما ي، يو جي جي، صن كيو، لي زد، سميث إس سي (2015-07-01). "آلية الجفاف في نضج الكروموفور للبروتين الفلوري الأخضر من النوع البري: دراسة نظرية". رسائل الفيزياء الكيميائية . 631-632 : 42-46 . Bibcode : 2015CPL...631...42M . doi : 10.1016/j.cplett.2015.04.061 . ISSN 0009-2614 . 
  50. ↑ Jugder BE, Welch J, Braidy N, Marquis CP (2016-07-26). "بناء واستخدام مُحفِّز الهيدروجيناز القابل للذوبان H16 من Cupriavidus necator (PSH) المدمج مع البروتين الفلوري الأخضر (GFP)" . PeerJ . 4 e2269 . Bibcode : 2016PeerJ...4e2269J . doi : 10.7717/peerj.2269 . PMC 4974937. PMID 27547572 .  
  51. ↑ أرون كيه إتش، كاول سي إل، راماراو بي (2005). "البروتينات الفلورية الخضراء في أبحاث المستقبلات: أداة ناشئة لاكتشاف الأدوية". مجلة الأساليب الدوائية والسمية . 51 (1): 1-23 . doi : 10.1016/j.vascn.2004.07.006 . PMID 15596111 . 
  52. ↑ سونغ واي إتش، كيم سي إس، سيو جيه إتش (أبريل 2016). "الرصد غير الجراحي للسمية البيئية باستخدام بروتين الفلورسنت الأخضر في بكتيريا الإشريكية القولونية". المجلة الكورية للهندسة الكيميائية . 33 (4): 1331-1336 . doi : 10.1007/s11814-015-0253-1 . S2CID 62828580 . 
  53. ↑ بان واي، ليفرت إيه، غراف إم، شيفر إف، ثورو-بوفيليث إس، برودا جيه، وآخرون . (مارس 2013). "تحليل عالي الحساسية في الوقت الحقيقي لسمية الجسيمات النانوية في أسماك الزيبرا المُعبرة عن البروتين الفلوري الأخضر". سمول . 9 (6). فاينهايم آن دير بيرغشتراسه، ألمانيا: 863-869 . doi : 10.1002/smll.201201173 . PMID 23143852 .  
  54. ↑ تشالفي م (يونيو 2009). "البروتين الفلوري الأخضر: إنارة الحياة" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 106 (25): 10073-10080 . Bibcode : 2009PNAS..10610073C . doi : 10.1073 / pnas.0904061106 . PMC 2700921. PMID 19553219 .  
  55. ↑ يوست ر (ديسمبر 2005). "المجهر الفلوري اليوم". نيتشر ميثودز . 2 ( 12 ): 902-904 . Bibcode : 2005NaMet...2..902Y . doi : 10.1038/nmeth1205-902 . PMID 16299474. S2CID 205418407 .  
  56. ^ تيرسكيخ أ، فرادكوف أ، إرماكوفا جي، زارايسكي أ، تان بي، كاجافا إيه في، وآخرون . (نوفمبر 2000). " "مؤقت فلوري": بروتين يتغير لونه مع مرور الوقت. مجلة ساينس . 290 (5496): 1585-1588 . رمز Bibcode : 2000Sci...290.1585T . doi : 10.1126/science.290.5496.1585 . PMID 11090358 . 
  57. ↑ باترسون، جي إتش، وليبينكوت-شوارتز، جيه (سبتمبر 2002). "بروتين فلوري أخضر قابل للتنشيط الضوئي لوضع علامات ضوئية انتقائية على البروتينات والخلايا". مجلة ساينس . 297 (5588): 1873-1877 . Bibcode : 2002Sci...297.1873P . doi : 10.1126/science.1074952 . PMID 12228718. S2CID 45058411 .  
  58. ↑ لين و، ميهتا س، تشانغ ج (أكتوبر 2019). "المستشعرات الحيوية الفلورية المشفرة جينيًا تُسلط الضوء على إشارات الكيناز في السرطان" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 294 (40): 14814-14822 . doi : 10.1074/jbc.REV119.006177 . PMC 6779441. PMID 31434714 .  
  59. ↑ كوموروفسكي م، فينكنشتات ب، راند د (يونيو 2010). "استخدام جين مراسل فلوري واحد لاستنتاج نصف عمر الضوضاء الخارجية ومعايير أخرى للتعبير الجيني" . مجلة الفيزياء الحيوية . 98 (12): 2759-2769 . Bibcode : 2010BpJ....98.2759K . doi : 10.1016/j.bpj.2010.03.032 . PMC 2884236. PMID 20550887 .  
  60. ↑ غونكل م، إردل ف، ريب ك، ليمر ب، كوفمان ر، هورمان س، وآخرون (يونيو 2009). " مجهر تحديد الموقع ثنائي اللون للهياكل النانوية الخلوية" . مجلة التكنولوجيا الحيوية . 4 (6): 927-38 . doi : 10.1002/biot.200900005 . PMID 19548231. S2CID 18162278 .   
  61. ↑ تشوداكوف د.م، لوكيانوف س، لوكيانوف ك.أ (ديسمبر 2005). "البروتينات الفلورية كأداة للتصوير الحيوي". اتجاهات في التكنولوجيا الحيوية . 23 (12): 605-13 . doi : 10.1016/j.tibtech.2005.10.005 . PMID 16269193 . 
  62. ↑ سوبوليسكي إم آر، أوكس جيه، هالفورد دبليو بي (مارس 2005). "البروتين الفلوري الأخضر هو مؤشر كمي للتعبير الجيني في الخلايا حقيقية النواة الفردية" . مجلة FASEB . 19 (3): 440-442 . doi : 10.1096/fj.04-3180fje . PMC 1242169. PMID 15640280 .  
  63. ↑ ليفيت جيه، وايس مان تي إيه، كانغ إتش، درافت آر دبليو، لو جيه، بينيس آر إيه، وآخرون . (نوفمبر 2007) . "استراتيجيات التعديل الوراثي للتعبير التوافقي عن البروتينات الفلورية في الجهاز العصبي". نيتشر . 450 (7166): 56-62 . Bibcode : 2007Natur.450...56L . doi : 10.1038/nature06293 . PMID 17972876. S2CID 4402093 .   
  64. ↑ بيكر بي جيه، موتو إتش، ديميتروف دي، أكيمان دبليو، بيرون إيه، إيواموتو واي، وآخرون . (أغسطس 2008). " مستشعرات فلورية مشفرة جينيًا لجهد الغشاء" . بيولوجيا خلية الدماغ . 36 ( 1-4 ): 53-67 . doi : 10.1007/s11068-008-9026-7 . PMC 2775812. PMID 18679801 .   
  65. ↑ أديسنيك هـ، نيكول ر.أ، إنجلاند ب.م (ديسمبر 2005). "التثبيط الضوئي لمستقبلات AMPA الأصلية يكشف عن نقلها في الوقت الحقيقي" . نيرون . 48 (6): 977-85 . doi : 10.1016/j.neuron.2005.11.030 . PMID 16364901 . 
  66. ↑ لاكاداميالي م، راست م ج، بابكوك ه ب، تشوانغ إكس (أغسطس 2003). "تصوير عدوى فيروسات الإنفلونزا الفردية" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 100 (16): 9280-5 . Bibcode : 2003PNAS..100.9280L . doi : 10.1073/pnas.0832269100 . PMC 170909. PMID 12883000 .  
  67. ↑ جو كي، وانغ ب (أكتوبر 2008). "تصوير النقل الجيني الموجه بواسطة نواقل فيروسية عدسية مُهندسة" . العلاج الجيني . 15 (20): 1384-1396 . doi : 10.1038/gt.2008.87 . PMC 2575058. PMID 18480844 .  
  68. ↑ ريمي إس، تيسون إل، أوسال سي، مينوريه إس، بونامين في، نيريير-داغوين في، وآخرون . (أكتوبر 2010). "سلالات جديدة من فئران معدلة وراثيًا تحمل جين البروتين الفلوري الأخضر (GFP) ذات صلة بالطب التجديدي والعلاج الجيني". أبحاث الكائنات المعدلة وراثيًا . 19 (5): 745-763 . doi : 10.1007/s11248-009-9352-2 . PMID 20094912. S2CID 42499768 .   
  69. ↑ إليوت جي، ماكغراث جيه، كروكيت-تورابي إي (يونيو 2000). "البروتين الفلوري الأخضر: اختبار جديد لجدوى الخلايا في التطبيقات البيولوجية التجميدية". علم الأحياء التجميدي . 40 (4): 360-369 . doi : 10.1006/cryo.2000.2258 . PMID 10924267 . 
  70. ↑ فخر الدين ن، لادورنر أ، أتاناسوف أ.ج، هيس إ.هـ، بومغارتنر ل، ماركت ب، وآخرون . (أبريل 2010). " الاكتشاف والتحقق والتحليل الآلي بمساعدة الحاسوب لمنشطات النيوليغنان الجديدة لمستقبلات جاما المنشطة لمكاثرات البيروكسيسوم" . علم الأدوية الجزيئية . 77 (4): 559-66 . doi : 10.1124/mol.109.062141 . PMC 3523390. PMID 20064974 .   
  71. ↑ غاذر إم سي، يون إس إتش (2011). "الليزر البيولوجي أحادي الخلية". نيتشر فوتونيكس . 5 (7): 406-410 . Bibcode : 2011NaPho...5..406G . doi : 10.1038/nphoton.2011.99 . S2CID 54971962 . 
  72. ↑ ماتسون ج (2011). "البروتين الفلوري الأخضر يصنع ليزرات حية" . مجلة ساينتفك أمريكان . تم الاسترجاع في 13 يونيو 2011 .
  73. ↑ كوروس-مهر هـ، بيشيس س ك، سلوراش إي إم، ليتلبيدج إل إي، إيغبلاد م، إيوالد إيه جيه، وآخرون . (فبراير 2008). "يربط GATA-3 تمايز الورم وانتشاره في نموذج لسرطان الثدي اللمعي" . خلية السرطان . 13 (2): 141-152 . doi : 10.1016/j.ccr.2008.01.011 . PMC 2262951. PMID 18242514 .   
  74. ↑ كابانتوس إس، تيرويليجر تي سي، والدو جي إس (يناير 2005). "وسم البروتين والكشف عنه باستخدام أجزاء مُهندسة ذاتية التجميع من البروتين الفلوري الأخضر". مجلة نيتشر للتكنولوجيا الحيوية . 23 (1): 102-107 . Bibcode : 2005NatBi..23..102C . doi : 10.1038/nbt1044 . PMID 15580262. S2CID 25833063 .  
  75. ↑ رودمان إم كيه، ياداف إن إس، أرتوس إن إن (سبتمبر 2002). "يرتبط تطور إسكات الجينات المنقولة بفعل فيروس الجيميني بمثيلة الجينات المنقولة". مجلة نيو فايتولوجيست . 155 (3): 461-468 . Bibcode : 2002NewPh.155..461R . doi : 10.1046/j.1469-8137.2002.00467.x . PMID 33873315 . 
  76. ↑ Zhu YJ, Agbayani R, Moore PH (أبريل 2004). "البروتين الفلوري الأخضر كعلامة اختيار بصرية لتحويل البابايا (Carica papaya L.)". تقارير خلية النبات . 22 (9): 660-7 . Bibcode : 2004PCelR..22..660M . doi : 10.1007/s00299-004-0755-5 . PMID 14749892. S2CID 23198182 .  
  77. ↑ نيوا، واي.، هيرانو، تي.، يوشيموتو، ك.، شيميزو، إم.، كوباياشي، إتش. (1999). " الكشف الكمي غير الجراحي وتطبيقات البروتين الفلوري الأخضر غير السام من النوع S65T في النباتات الحية" . مجلة النبات . 18 (4): 455-463 . Bibcode : 1999PlJ....18..455N . doi : 10.1046/j.1365-313X.1999.00464.x . PMID 10406127. S2CID 292648 .  
  78. ↑ بيكر إس إس، فيديكان سي بي، كاميرون دي إس، غريب إتش جي، جاروكي سي سي، سيتابوتري إيه دبليو، وآخرون . (2012-01-01). "تحسين التصوير الرقمي لنبات رشاد أذن الفأر (Arabidopsis thaliana) المُعبِّر عن البروتين الفلوري الأخضر ذي الإزاحة الحمراء باستخدام ملحق الإضاءة فوق البنفسجية" . مجلة AoB Plants . 2012 pls003. doi : 10.1093/aobpla/pls003 . PMC 3296078. PMID 22479674 .   
  79. ↑ "PlantEdDL - استخدام كاميرات SRL الرقمية في الدراسات الكمية للنباتات التي تُنتج البروتين الفلوري الأخضر (GFP)" . planted.botany.org . تاريخ الاسترجاع: 23 مارس 2016 .
  80. ↑ كاك إي. "أرنب GFP" .
  81. ↑ "فئران نيون تتوهج في الظلام" . مؤرشف من الأصل في 14 فبراير 2009. تم الاطلاع عليه في 30 أغسطس 2016 .
  82. ↑ علماء في تايوان يربون خنازير خضراء فلورية
  83. ^ Wongsrikeao P، Saenz D، Rinkoski T، Otoi T، Poeschla E (2011). "تحور عامل التقييد المضاد للفيروسات في القطط المنزلية" . طرق الطبيعة . 8 (10): 853– 9. دوى : 10.1038/nmeth.1703 . بمك 4006694 . بميد 21909101 .  
  84. ↑ كالاواي إي (23 أبريل 2009). "جرو متوهج هو أول كلب معدل وراثيًا في العالم" . مجلة نيو ساينتست .
  85. ↑ فوس-أندريا ج (2005). "منحوتات البروتين: لبنات بناء الحياة تلهم الفن". ليوناردو . 38 : 41-45 . doi : 10.1162/leon.2005.38.1.41 . S2CID 57558522 . 
  86. ^ باولاك أ (2005). "بروتين إنسبيريريندي" . مجلة الفيزياء . 4 : 12.
  87. ↑ "نحت جوليان فوس-أندريا" . تم الاطلاع عليه بتاريخ 14-06-2007 .

للمزيد من القراءة