التهجين الموضعي الفلوري

📅 آخر تحديث: ٢٨ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٢٨ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 11 صور
الموسوعة الحرة
التصوير المتعدد للحمض النووي الريبي في الخلايا باستخدام فحوصات ViewRNA FISH
خلية في الطور الاستوائي إيجابية لإعادة ترتيب جين bcr/abl (المرتبط بابيضاض الدم النخاعي المزمن ) باستخدام تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH). تظهر الكروموسومات باللون الأزرق. الكروموسوم المُلَوَّن ببقع خضراء وحمراء (أعلى اليسار) هو الكروموسوم الذي يحمل إعادة الترتيب.

التهجين الموضعي الفلوري ( FISH ) هو تقنية جزيئية في علم الوراثة الخلوية ، تستخدم مجسات فلورية ترتبط بأجزاء محددة من تسلسل الحمض النووي بدرجة عالية من التكامل التسلسلي . طُوِّرت هذه التقنية من قِبَل باحثين في مجال الطب الحيوي في أوائل ثمانينيات القرن العشرين [ 1 ] للكشف عن وجود أو غياب تسلسلات DNA محددة على الكروموسومات وتحديد موقعها . ويمكن استخدام المجهر الفلوري لتحديد مكان ارتباط المجس الفلوري بالكروموسومات. يُستخدم التهجين الموضعي الفلوري (FISH) غالبًا للعثور على سمات محددة في الحمض النووي لأغراض الاستشارة الوراثية ، والطب، وتحديد الأنواع. [ 2 ]

يمكن استخدام تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) أيضًا للكشف عن جزيئات الحمض النووي الريبوزي ( mRNA ، و lncRNA ، و miRNA ) وتحديد مواقعها [ 3 ] [ 4 ] [ 5 ] في الخلايا، والخلايا السرطانية المنتشرة، وعينات الأنسجة. وفي هذا السياق، تساعد هذه التقنية في تحديد الأنماط المكانية والزمانية للتعبير الجيني داخل الخلايا والأنسجة.

المجسات – الحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)

الكشف عن miR-133 (باللون الأخضر) وmRNA الميوجينين (باللون الأحمر) في خلايا C2C12 المتمايزة باستخدام برنامج ViewRNA

في علم الأحياء، المسبار عبارة عن شريط واحد من الحمض النووي DNA أو RNA مكمل لتسلسل النيوكليوتيدات محل الاهتمام.

يمكن تصميم مجسات الحمض النووي الريبوزي (RNA) لأي جين أو أي تسلسل داخله لتصوير الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) [ 6 ] [ 7 ] [ 8 ] ، والحمض النووي الريبوزي غير المشفر الطويل (lncRNA) [ 9 ] [ 10 ] [ 11 ] ، والحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA) في الأنسجة والخلايا. تُستخدم تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لفحص دورة التكاثر الخلوي، وتحديدًا الطور البيني للنوى، بحثًا عن أي تشوهات كروموسومية. [ 12 ] تُسهّل تقنية FISH تحليل سلسلة كبيرة من الحالات المحفوظة، وتُمكّن من تحديد الكروموسوم المُستهدف بدقة عن طريق إنشاء مجس ذي أساس كروموسومي اصطناعي يجذب الكروموسومات المُشابهة. [ 12 ] تُصدر كل مجس إشارة تهجين عند اكتشاف أي خلل نووي. [ 12 ] يتكون كل مجس للكشف عن mRNA وlncRNA من حوالي 20-50 زوجًا من النيوكليوتيدات قليلة العدد، يغطي كل زوج منها مسافة 40-50 زوجًا قاعديًا. وتعتمد التفاصيل على تقنية FISH المُستخدمة. بالنسبة للكشف عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي (miRNA)، تستخدم المجسات كيمياء خاصة للكشف المحدد عن الحمض النووي الريبوزي الميكروي وتغطي تسلسل الحمض النووي الريبوزي الميكروي بالكامل.

خلايا الظهارة البولية الموسومة بأربعة مجسات مختلفة

غالبًا ما تُستخلص المجسات من أجزاء من الحمض النووي (DNA) التي عُزلت ونُقيت وكُثِّفت لاستخدامها في مشروع الجينوم البشري . ونظرًا لكبر حجم الجينوم البشري مقارنةً بالطول الذي يمكن تسلسله مباشرةً، كان من الضروري تقسيمه إلى أجزاء. (في التحليل النهائي، رُتِّبت هذه الأجزاء عن طريق هضم نسخة من كل جزء إلى أجزاء أصغر باستخدام إنزيمات نووية داخلية متخصصة بالتسلسل، وقياس حجم كل جزء صغير باستخدام كروماتوغرافيا الاستبعاد الحجمي ، واستخدام هذه المعلومات لتحديد مواضع تداخل الأجزاء الكبيرة). وللحفاظ على الأجزاء مع تسلسلات الحمض النووي الخاصة بها، أُضيفت إلى نظام من تجمعات بكتيرية تتكاثر باستمرار. تُخزَّن تجمعات بكتيرية مستنسخة، يحتفظ كل تجمع منها بكروموسوم اصطناعي واحد، في مختبرات مختلفة حول العالم. ويمكن زراعة الكروموسومات الاصطناعية ( BAC ) واستخلاصها ووسمها في أي مختبر يحتوي على مكتبة. تُسمى المكتبات الجينومية غالبًا باسم المؤسسة التي طُوّرت فيها. ومن الأمثلة على ذلك مكتبة RPCI-11، التي سُميت نسبةً إلى مركز روزويل بارك الشامل للسرطان (المعروف سابقًا باسم معهد روزويل بارك للسرطان) في بوفالو، نيويورك . يبلغ طول هذه القطع حوالي 100 ألف زوج قاعدي، وهي أساس معظم مجسات التهجين الفلوري في الموقع (FISH).

عملية التحضير والتهجين – الحمض النووي الريبي

يهدف استخدام تقنية التهجين الفلوري في الموقع للحمض النووي الريبوزي (RNA FISH) إلى الكشف عن نسخ الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) المستهدفة في الخلايا أو مقاطع الأنسجة أو حتى العينات الكاملة. [ 13 ] تتم هذه العملية في 3 خطوات رئيسية: تحضير الأنسجة (ما قبل التهجين)، والتهجين، والغسل (ما بعد التهجين).

تبدأ عملية تحضير الأنسجة بجمع شرائح الأنسجة المناسبة لإجراء تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) للحمض النووي الريبوزي (RNA). في البداية، تُثبّت الخلايا، سواء كانت خلايا سرطانية منتشرة (CTCs) أو شرائح أنسجة مثبتة بالفورمالين ومضمنة في البارافين (FFPE) أو مجمدة. تتضمن عملية التثبيت معالجة الخلايا الحية بمادة مثبتة كيميائية مثل الفورمالديهايد بنسبة 4% أو البارافورمالديهايد (PFA) في محلول ملحي فوسفاتي (PBS). [ 13 ] تحافظ عملية التثبيت هذه بشكل أساسي على السلامة الهيكلية للخلايا قبل نفاذية غشاء الخلية [ 14 ] ، والتي تُجرى عادةً باستخدام منظف مثل تريتون-إكس ، وهو أمر ضروري لتلوين الخلايا لأن الخلايا الميتة تفقد غشاءها الوظيفي. [ 15 ] يمكن أيضًا نفاذية الخلايا باستخدام محلول إيثانول بنسبة 70% والتبريد طوال الليل. [ 15 ] مع ذلك، فقد أُجريت تقنية FISH بنجاح على خلايا غير مثبتة. [ 16 ] بعد التثبيت، تُجرى عملية نفاذية للعينات للسماح باختراق كواشف التهجين. ويُستخدم عادةً استخدام المنظفات بتركيز 0.1% لتعزيز نفاذية الأنسجة، مثل توين-20 أو تريتون X-100. [ 17 ]

من الضروري توفير جميع الظروف المثلى لعملية التهجين لضمان نجاحها في الموقع، بما في ذلك درجة الحرارة، ودرجة الحموضة، وتركيز الملح، ومدة تفاعل التهجين. بعد التأكد من استيفاء جميع الشروط اللازمة، يمكن البدء بخطوات التهجين بإضافة مسبار مُخصص للهدف، مُكوّن من 20 زوجًا من النيوكليوتيدات، والذي يتهجن مع الحمض النووي الريبوزي المستهدف. تُمكّن أنظمة تضخيم الإشارة المنفصلة والمتوافقة من إجراء التحليل المتعدد (حتى هدفين لكل تحليل). ويتم تضخيم الإشارة عبر سلسلة من خطوات التهجين المتتابعة. [ 18 ]

بعد خطوات التهجين، تُجرى خطوات الغسل. تهدف هذه الخطوات إلى إزالة الهجائن غير النوعية والتخلص من جزيئات المجس غير المرتبطة بالعينات لتقليل أي إشارات خلفية. يُستخدم عادةً غسل الإيثانول في هذه المرحلة لتقليل التألق الذاتي في الأنسجة أو الخلايا. [ 19 ] في نهاية التحليل، تُفحص عينات الأنسجة تحت مجهر فلوري، مثل المجهر الفلوري متحد البؤر ومجهر Keyence. [ 17 ]

عملية التحضير والتهجين – الحمض النووي

مخطط لمبدأ تجربة التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لتحديد موقع جين في النواة.

أولًا، يتم تصنيع مسبار. يجب أن يكون المسبار كبيرًا بما يكفي للتهجين بشكلٍ خاص مع هدفه، ولكن ليس كبيرًا جدًا لدرجة إعاقة عملية التهجين. يُوسَم المسبار مباشرةً بفلوروفورات ، أو بأهداف للأجسام المضادة ، أو بالبيوتين . يمكن إجراء الوسم بطرقٍ مختلفة، مثل ترجمة النيك ، أو تفاعل البوليميراز المتسلسل باستخدام النيوكليوتيدات الموسومة .

بعد ذلك، يتم تحضير عينة من الكروموسومات في الطور البيني أو الطور الاستوائي . تُثبّت الكروموسومات بإحكام على ركيزة ، عادةً ما تكون زجاجية. يجب حجب تسلسلات الحمض النووي المتكررة بإضافة أجزاء قصيرة من الحمض النووي إلى العينة. ثم يُطبّق المجس على الحمض النووي للكروموسوم ويُحضن لمدة 12 ساعة تقريبًا أثناء عملية التهجين. تُزال المجسات غير المهجنة أو المهجنة جزئيًا بعدة خطوات غسل. تُعرض النتائج وتُقاس كميًا باستخدام مجهر قادر على إثارة الصبغة وتسجيل الصور.

إذا كانت الإشارة الفلورية ضعيفة، فقد يلزم تضخيمها لتجاوز عتبة الكشف للمجهر . تعتمد قوة الإشارة الفلورية على عوامل عديدة، مثل كفاءة وسم المجس، ونوع المجس، ونوع الصبغة. ترتبط الأجسام المضادة الموسومة فلوريًا أو الستربتافيدين بجزيء الصبغة. تُختار هذه المكونات الثانوية بحيث تُنتج إشارة قوية.

اختلافات في المجسات والتحليل

تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) تقنية عامة جدًا. وتعود الاختلافات بين تقنيات FISH المختلفة عادةً إلى التباينات في تسلسل ووسم المجسات، وكيفية استخدامها معًا. تُقسم المجسات إلى فئتين رئيسيتين: خلوية وغير خلوية. في التهجين الفلوري في الموقع، يُقصد بوضع المجس داخل الخلية.

يُعدّ حجم المجسّات مهمًا لأنّ المجسّات الأقصر تتهجّن بشكل أقلّ تحديدًا من المجسّات الأطول، ولذلك غالبًا ما تُستخدم سلاسل طويلة كافية من الحمض النووي (DNA) أو الحمض النووي الريبي (RNA) (عادةً من 10 إلى 25 نيوكليوتيدًا) تُكمّل تسلسلًا مستهدفًا مُحدّدًا لتحديد موقع الهدف. ويُحدّد التداخل دقة السمات القابلة للكشف. على سبيل المثال، إذا كان الهدف من تجربة ما هو الكشف عن نقطة انقطاع الانتقال الكروموسومي ، فإنّ تداخل المجسّات - أي مدى احتواء تسلسل DNA واحد في المجسّات المجاورة - يُحدّد الحدّ الأدنى للنطاق الذي يُمكن فيه الكشف عن نقطة الانقطاع.

يُحدد مزيج تسلسلات المجسات نوع السمة التي يمكن للمجس الكشف عنها. تُستخدم المجسات التي تتهجن على طول كروموسوم كامل لحساب عدد كروموسوم معين، أو لإظهار عمليات الانتقال الكروموسومي، أو لتحديد أجزاء الكروماتين خارج الكروموسوم . يُطلق على هذه العملية غالبًا اسم "تلوين الكروموسوم الكامل". في حال استخدام كل مجس ممكن، سيتم وسم كل كروموسوم (الجينوم بأكمله) بمادة فلورية، وهو ما لن يكون مفيدًا بشكل خاص لتحديد سمات التسلسلات الفردية. مع ذلك، من الممكن إنشاء مزيج من مجسات أصغر حجمًا خاصة بمنطقة معينة (موقع) من الحمض النووي؛ تُستخدم هذه الخلائط للكشف عن طفرات الحذف . عند دمجها مع لون محدد، يُستخدم مزيج مجسات خاص بموقع معين للكشف عن عمليات انتقال كروموسومية دقيقة للغاية. غالباً ما تستخدم مخاليط المجسات الخاصة بالموقع لعد الكروموسومات، عن طريق الارتباط بالمناطق المركزية للكروموسومات، والتي تتميز بما يكفي لتحديد كل كروموسوم (باستثناء الكروموسومات 13 و 14 و 21 و 22 ).

تستخدم تقنيات أخرى متنوعة مزيجًا من المجسات ذات الألوان المختلفة. يمكن الكشف عن نطاق واسع من الألوان في مزيج الأصباغ الفلورية، مما يسمح بتحديد كل كروموسوم بشري بلون مميز باستخدام مزيج مجسات الكروموسوم الكامل ونسب مختلفة من الألوان. على الرغم من أن عدد الكروموسومات يفوق عدد ألوان الأصباغ الفلورية التي يسهل تمييزها، إلا أنه يمكن استخدام نسب مزيج المجسات لإنشاء ألوان ثانوية . على غرار التهجين الجينومي المقارن ، يتم إنشاء مزيج المجسات للألوان الثانوية عن طريق مزج النسبة الصحيحة لمجموعتين من المجسات ذات الألوان المختلفة لنفس الكروموسوم. تُعرف هذه التقنية أحيانًا باسم M-FISH.

يمكن استخدام نفس الآلية الفيزيائية التي تُتيح ظهور ألوان متنوعة في تقنية التهجين الفلوري متعدد الألوان (M-FISH) للكشف عن عمليات الانتقال الكروموسومي. أي أن الألوان المتجاورة تبدو وكأنها تتداخل، فيظهر لون ثانوي. صُممت بعض الاختبارات بحيث يظهر اللون الثانوي أو يغيب في الحالات المدروسة. ومن الأمثلة على ذلك الكشف عن عمليات الانتقال الكروموسومي BCR/ABL ، حيث يشير اللون الثانوي إلى وجود مرض. يُطلق على هذا النوع غالبًا اسم التهجين الفلوري المزدوج للاندماج (D-FISH). أما في الحالة المعاكسة، حيث يُعد غياب اللون الثانوي حالة مرضية، فيُوضح ذلك اختبار يُستخدم لدراسة عمليات الانتقال الكروموسومي التي يكون فيها أحد نقاط الانكسار معروفًا أو ثابتًا. تُصنع مجسات خاصة بموقع محدد لأحد جانبي نقطة الانكسار، بينما يكون الكروموسوم الآخر سليمًا. في الخلايا الطبيعية، يُلاحظ اللون الثانوي، ولكن عند حدوث الانتقال الكروموسومي، لا تُلاحظ سوى الألوان الأساسية. تُسمى هذه التقنية أحيانًا "التهجين الفلوري للانفصال".

تقنية التهجين الفلوري في الموقع للحمض النووي الريبي أحادي الجزيء

تقنية التهجين الفلوري في الموقع لجزيء واحد من الحمض النووي الريبوزي (RNA FISH)، والمعروفة أيضًا باسم Stellaris® RNA FISH [ 20 ] أو smFISH [ 21 ]، هي طريقة للكشف عن الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) وجزيئات الحمض النووي الريبوزي الطويلة الأخرى وتحديد كميتها في طبقة رقيقة من عينة نسيجية. يمكن تصوير الأهداف بدقة عالية من خلال استخدام مجسات قليلة النوكليوتيدات قصيرة متعددة مُوسومة بعلامة واحدة [ 22 ] . يوفر ارتباط ما يصل إلى 48 جزيئًا من قليل النوكليوتيدات المُوسومة بالفلورة بجزيء واحد من الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) فلورة كافية للكشف بدقة عن كل جزيء mRNA مستهدف وتحديد موقعه في صورة مجهرية فلورية واسعة المجال . أما المجسات التي لا ترتبط بالتسلسل المقصود، فلا تُحقق فلورة موضعية كافية لتمييزها عن الخلفية [ 23 ] .

يمكن إجراء فحوصات التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لجزيء واحد من الحمض النووي الريبي (RNA) بشكل أحادي أو متعدد ، ويمكن استخدامها كتجربة متابعة لتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) ، أو تصويرها بالتزامن مع فحص الأجسام المضادة الفلورية . وتتمتع هذه التقنية بتطبيقات محتملة في تشخيص السرطان ، [ 24 ] وعلم الأعصاب ، وتحليل التعبير الجيني ، [ 25 ] والتشخيص المصاحب .

سمك الألياف

في تقنية بديلة لتحضيرات الطور البيني أو الطور الاستوائي، وهي تقنية التهجين الفلوري في الموقع باستخدام الألياف (fiber FISH)، تُثبّت كروموسومات الطور البيني على شريحة زجاجية بحيث تمتد في خط مستقيم، بدلاً من أن تكون ملتفة بإحكام كما في تقنية التهجين الفلوري في الموقع التقليدية، أو تتخذ شكل منطقة الكروموسوم كما في تقنية التهجين الفلوري في الموقع للطور البيني. ويتم ذلك بتطبيق إجهاد قص ميكانيكي على طول الشريحة، إما على خلايا مثبتة على الشريحة ثم تم تحليلها ، أو على محلول من الحمض النووي النقي. وتُستخدم تقنية تُعرف باسم تمشيط الكروموسومات بشكل متزايد لهذا الغرض. يسمح الشكل الممتد للكروموسومات بدقة أعلى بكثير، تصل إلى بضعة كيلوبايتات . على الرغم من بساطة مفهوم تحضير عينات التهجين الفلوري في الموقع باستخدام الألياف، إلا أنه فن يتطلب مهارة عالية، ولا تستخدم هذه التقنية بشكل روتيني إلا في المختبرات المتخصصة. [ 26 ]

كيو فيش

تجمع تقنية Q-FISH بين تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) وتقنية الحمض النووي الببتيدي ( PNA) وبرامج الحاسوب لقياس شدة الفلورة. وتُستخدم هذه التقنية بشكل روتيني في أبحاث طول التيلومير .

Flow-FISH

تستخدم تقنية Flow-FISH قياس التدفق الخلوي لإجراء التهجين الفلوري في الموقع (FISH) تلقائيًا باستخدام قياسات الفلورة لكل خلية.

ما-فيش

تستخدم تقنية التهجين الفلوري في الموقع بمساعدة الموائع الدقيقة ( MA-FISH ) تدفقًا دقيقًا لزيادة كفاءة تهجين الحمض النووي، مما يقلل من استهلاك مجسات التهجين الفلوري في الموقع باهظة الثمن ويختصر وقت التهجين. تُستخدم تقنية MA-FISH للكشف عن جين HER2 في أنسجة سرطان الثدي. [ 27 ]

أسماك البحر

تقنية التهجين الفلوري في الموقع باستخدام التصوير الإشعاعي المجهري هي تقنية تجمع بين الركائز الموسومة إشعاعيًا وتقنية التهجين الفلوري التقليدية للكشف عن المجموعات التصنيفية والأنشطة الأيضية في آن واحد. [ 28 ]

الاندماج الهجين - التهجين الفلوري في الموقع

تستخدم تقنية التهجين الفلوري الهجين ( HF-FISH ) مزيجًا أوليًا من الإثارة والانبعاث الإضافيين للفلوروفورات لتوليد أطياف إضافية من خلال عملية وسم تُعرف باسم النقل البصري الديناميكي (DOT). تستطيع ثلاثة فلوروفورات أساسية توليد ما مجموعه 7 أطياف انبعاث قابلة للكشف بسهولة نتيجةً للوسم التجميعي باستخدام تقنية DOT. تُمكّن تقنية التهجين الفلوري الهجين من تطبيقات التهجين الفلوري متعددة الأهداف والموجهة ضمن لوحات الأورام السريرية. توفر هذه التقنية تقييمًا أسرع باستخدام مجسات فعالة يمكن الكشف عنها بسهولة باستخدام المجاهر الفلورية التقليدية.

سمكة الميرفيش

التهجين الموضعي الفلوري المقاوم للأخطاء والمتعدد الإرسال [ 29 ] هو نسخة متطورة من تقنية smFISH، تعتمد على الوسم التوافقي، متبوعًا بالتصوير، ثم التشفير المقاوم للأخطاء [ 29 ] لالتقاط عدد كبير من جزيئات الحمض النووي الريبوزي (RNA) وتحديد موقعها المكاني داخل الخلية. يُمكّن التقاط هذا العدد الكبير من جزيئات الحمض النووي الريبوزي من فهم شبكات تنظيم الجينات، والتنبؤ بوظائف الجينات غير المُعَلَّمة، وتحديد أنماط توزيع جزيئات الحمض النووي الريبوزي، والتي ترتبط بالبروتينات المرتبطة بها.

نجم البحر

ستارفيش عبارة عن مجموعة من الأدوات البرمجية طُوِّرت عام ٢٠١٩ من قِبَل مجموعة من العلماء لتحليل البيانات من تسعة أنواع مختلفة من تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH)، حيث تُنتج جميع الأنواع نفس مجموعة البيانات - قيم التعبير الجيني مُرتبطة بإحداثيات س و ص في الخلية. يقرأ البرنامج، المُصمَّم لجميع العلماء وليس فقط علماء المعلوماتية الحيوية، مجموعة من الصور، ويزيل التشويش، ويُحدِّد جزيئات الحمض النووي الريبوزي (RNA). يهدف هذا النهج إلى وضع مخطط تحليل قياسي لمجموعات بيانات FISH بطريقة مشابهة لتحليل النسخ الجيني للخلايا المفردة . [ ٣٠ ]

التطبيقات الطبية

غالبًا ما يرغب آباء الأطفال ذوي الإعاقة النمائية في معرفة المزيد عن حالة طفلهم قبل اتخاذ قرار إنجاب طفل آخر. ويمكن معالجة هذه المخاوف من خلال تحليل الحمض النووي للوالدين والطفل. في الحالات التي لا تُفهم فيها الإعاقة النمائية للطفل، يمكن تحديد سببها باستخدام تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) وتقنيات علم الوراثة الخلوية . ومن أمثلة الأمراض التي تُشخص باستخدام تقنية FISH: متلازمة برادر-ويلي ، ومتلازمة أنجلمان ، ومتلازمة حذف 22q13 ، وسرطان الدم النخاعي المزمن ، وسرطان الدم الليمفاوي الحاد ، ومتلازمة صرخة القطة ، ومتلازمة الوجه القلبي ، ومتلازمة داون . يُنصح بإجراء فحص FISH على الحيوانات المنوية للرجال الذين يعانون من خلل في النمط النووي الجسدي أو الانقسامي، وكذلك للرجال الذين يعانون من قلة النطاف ، حيث أن حوالي 50% من الرجال الذين يعانون من قلة النطاف لديهم معدل مرتفع من تشوهات كروموسومات الحيوانات المنوية. [ 31 ] يكفي تحليل الكروموسومات 21 وX وY لتحديد الأفراد المعرضين لخطر الإصابة بقلة النطاف. [ 31 ]

في الطب، يُستخدم التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لتشخيص الأمراض ، وتقييم مآلها ، أو لتقييم هدأة المرض، كالسرطان . ومن ثمّ، يُمكن تصميم العلاج بما يتناسب مع كل حالة. غالبًا ما يعجز الفحص التقليدي الذي يعتمد على تحليل كروموسومات الطور الاستوائي عن تحديد السمات التي تُميّز مرضًا عن آخر، نظرًا لدقة هذه السمات الكروموسومية؛ بينما يُمكن لتقنية FISH توضيح هذه الاختلافات. كما يُمكن استخدام FISH للكشف عن الخلايا المريضة بسهولة أكبر من طرق علم الوراثة الخلوية التقليدية ، التي تتطلب خلايا منقسمة، وتستلزم تحضيرًا يدويًا وتحليلًا مُرهقًا للشرائح من قِبل فني متخصص. في المقابل، لا تتطلب تقنية FISH خلايا حية، ويمكن قياسها تلقائيًا، حيث يقوم الحاسوب بعدّ النقاط الفلورية الموجودة. مع ذلك، يتطلب الأمر فنيًا مُدرّبًا لتمييز الاختلافات الدقيقة في أنماط التخطيط على كروموسومات الطور الاستوائي المنحنية والملتوية. يُمكن دمج تقنية FISH في أجهزة المختبر على رقاقة (Lab-on-a-chip) الميكروفلويدية. لا تزال هذه التقنية في مرحلة التطوير، ولكنها، مثل غيرها من طرق المختبر على رقاقة، قد تؤدي إلى تقنيات تشخيصية أكثر سهولة في الحمل. [ 32 ] [ 33 ]

يوضح هذا الشكل عملية التهجين الموضعي الفلوري (FISH) المستخدمة لتحديد مسببات الأمراض. أولًا، تُؤخذ عينة من النسيج المصاب من المريض. ثم يُصنّع قليل النوكليوتيدات المكمل للشيفرة الوراثية لمسبب المرض المشتبه به، ويُوسم كيميائيًا بمسبار فلوري. بعد ذلك، تُعالج عينة النسيج كيميائيًا لجعل أغشية الخلايا نفاذة لقليل النوكليوتيدات الموسوم فلوريًا. بعد معالجة عينة النسيج، يُضاف قليل النوكليوتيدات المكمل الموسوم. يرتبط قليل النوكليوتيدات الموسوم فلوريًا فقط بالحمض النووي المكمل لمسبب المرض المشتبه به. إذا كان مسبب المرض موجودًا في عينة النسيج، فإن خلاياه ستتوهج/تتألق بعد المعالجة بقليل النوكليوتيدات الموسوم. أما باقي الخلايا فلن تتوهج بعد المعالجة.
العملية العامة للتهجين الموضعي الفلوري (FISH) المستخدمة لتحديد مسببات الأمراض البكتيرية. أولًا، تُؤخذ عينة من نسيج مصاب من المريض. ثم يُوسم جزيء أوليغونوكليوتيد مكمل للشيفرة الوراثية للممرض المشتبه به كيميائيًا بمسبار فلوري. تُعالج عينة النسيج كيميائيًا لجعل أغشية الخلايا نفاذة للأوليغونوكليوتيد الموسوم فلوريًا. بعد ذلك، يُضاف الوسم الفلوري ويرتبط فقط بالحمض النووي المكمل للممرض المشتبه به. إذا كان الممرض موجودًا في عينة النسيج، فإن خلايا الممرض ستتألق بعد المعالجة بالأوليغونوكليوتيد الموسوم، بينما لن تتألق أي خلايا أخرى.

تحديد الأنواع

خضعت تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لدراسات مستفيضة كتقنية تشخيصية لتحديد مسببات الأمراض في مجال علم الأحياء الدقيقة الطبية. [ 34 ] ورغم ثبوت جدواها وفعاليتها، إلا أنها لا تزال غير شائعة الاستخدام في مختبرات التشخيص. يُعدّ قصر مدة التشخيص (أقل من ساعتين) ميزةً رئيسيةً مقارنةً بالتشخيص الكيميائي الحيوي، إلا أن هذه الميزة تتراجع أمام تقنية مطياف الكتلة MALDI-TOF-MS التي تتيح تحديد نطاق أوسع من مسببات الأمراض مقارنةً بتقنيات التشخيص الكيميائي الحيوي. وقد أثبتت تقنية FISH جدواها في التشخيص عند الحاجة إلى تحديد فوري لأنواع الكائنات الحية، لا سيما عند فحص مزارع الدم، حيث تُعدّ FISH تقنيةً سهلةً واقتصاديةً للتشخيص الأولي السريع. [ 34 ]

يمكن استخدام تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لمقارنة جينومات نوعين بيولوجيين ، لاستنتاج العلاقات التطورية . وتُعرف تقنية تهجين مماثلة باسم " التلطيخ الحيواني" . غالبًا ما تكون مجسات التهجين الفلوري في الموقع للبكتيريا عبارة عن بادئات لمنطقة الحمض النووي الريبوزي 16S .

تُستخدم تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) على نطاق واسع في مجال علم البيئة الميكروبية لتحديد الكائنات الدقيقة . فالأغشية الحيوية ، على سبيل المثال، تتكون من تجمعات بكتيرية معقدة (غالباً) متعددة الأنواع. يُمكّن تحضير مجسات الحمض النووي لنوع واحد وإجراء تقنية FISH باستخدام هذه المجسات من تصوير توزيع هذا النوع المحدد داخل الغشاء الحيوي. كما يُمكّن تحضير مجسات (بلونين مختلفين) لنوعين من الباحثين من تصوير/دراسة التموضع المشترك لهذين النوعين في الغشاء الحيوي، وقد يكون ذلك مفيداً في تحديد البنية الدقيقة للغشاء الحيوي.

التهجين الجينومي المقارن

يمكن وصف التهجين الجينومي المقارن بأنه طريقة تستخدم تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) بشكل متوازٍ مع مقارنة قوة التهجين لاستذكار أي اضطرابات كبيرة في عملية تضاعف تسلسلات الحمض النووي في جينوم النواة. [ 35 ]

النمط النووي الطيفي

النمط النووي الطيفي هو صورة للكروموسومات الملونة. يعتمد هذا النمط على تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) باستخدام أنواع متعددة من المجسات، مما يسمح برؤية كل كروموسوم مُلوّن خلال طوره الاستوائي. يُستخدم هذا النوع من النمط النووي تحديدًا عند البحث عن ترتيب الكروموسومات.

البدائل

النمط النووي الافتراضي

يُعدّ النمط النووي الافتراضي بديلاً فعالاً من حيث التكلفة ومتاحاً سريرياً لألواح التهجين الفلوري في الموقع (FISH)، حيث يستخدم آلافاً إلى ملايين المجسات على شريحة واحدة للكشف عن تغيرات عدد النسخ على مستوى الجينوم بدقة غير مسبوقة. حالياً، لا يكشف هذا النوع من التحليل إلا عن الزيادات والنقصان في المادة الكروموسومية، ولا يكشف عن عمليات إعادة الترتيب المتوازنة، مثل الانتقالات والانقلابات، وهي تشوهات مميزة تُلاحظ في العديد من أنواع سرطان الدم وسرطان الغدد الليمفاوية.

تطور الكروموسومات

تم تلوين الكروموسومات البشرية باستخدام الحمض النووي من كروموسوم الفأر رقم 11، مما يُظهر إشارات التهجين على الكروموسومات البشرية 17 و5 و2 و7 و22 وبعض الكروموسومات الأخرى. أي أن كروموسومًا سلفيًا انقسم إلى أجزاء متعددة لا تزال موجودة في العديد من الكروموسومات البشرية. [ 36 ]

يمكن استخدام تقنية التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لدراسة تطور الكروموسومات . تمتلك الأنواع المتقاربة كروموسومات متشابهة. ويمكن الكشف عن هذا التشابه من خلال تسلسل الجينات أو الجينوم ، وكذلك باستخدام تقنية FISH. على سبيل المثال، تتشابه كروموسومات الإنسان والشمبانزي تشابهًا كبيرًا، ويمكن لتقنية FISH أن تُظهر أن السلف المشترك للشمبانزي والإنسان كان يمتلك كروموسومين أصغر حجمًا، وفي السلالة البشرية اندمجا ليشكلا كروموسومًا بشريًا واحدًا. وبالمثل، تمتلك الأنواع الأقل تقاربًا كروموسومات متشابهة، ولكن مع ازدياد التباعد الجيني، تميل الكروموسومات إلى الانكسار والاندماج، مما ينتج عنه كروموسومات فسيفسائية. ويمكن إثبات ذلك بوضوح باستخدام تقنية FISH (انظر الشكل). [ 36 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. ↑ لانجر-سيفر، بي آر، ليفين، إم، وارد، دي سي (يوليو 1982). "طريقة مناعية لرسم خرائط الجينات على كروموسومات ذبابة الفاكهة متعددة الخيوط" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 79 (14): 4381-4385 . Bibcode : 1982PNAS...79.4381L . doi : 10.1073/pnas.79.14.4381 . PMC 346675. PMID 6812046 .  
  2. ↑ أمان ر، فوكس ب م (مايو 2008). "تحديد الخلايا المفردة في المجتمعات الميكروبية باستخدام تقنيات التهجين الموضعي الفلوري المحسّنة". مراجعات الطبيعة. علم الأحياء الدقيقة . 6 (5): 339-348 . doi : 10.1038/nrmicro1888 . PMID 18414500. S2CID 22498325 .  
  3. ↑ ريس، م.م.؛ ديتريش، ر.أ.؛ فون فارتبرغ، ج.ب. (15-10-1975). "تثبيط الإنزيمات المتماثلة لإنزيم مختزلة الألدهيد في دماغ الإنسان والفأر". علم الأدوية الكيميائية الحيوية . 24 (20): 1865-1869 . doi : 10.1016/0006-2952(75)90405-0 . ISSN 0006-2952 . PMID 18 .  
  4. ↑ تيرنر، أ. ج.؛ هيك، ب. إ. (15-09-1975). "تثبيط مختزلة الألدهيد بواسطة المستقلبات الحمضية للأمينات الحيوية". علم الأدوية الكيميائية الحيوية . 24 (18): 1731-1733 . doi : 10.1016/0006-2952(75)90016-7 . ISSN 0006-2952 . PMID 16 .  
  5. ↑ ماكار، أ.ب.؛ ماكمارتن، ك.إ.؛ باليس، م.؛ تيفلي، ت.ر. (يونيو 1975). "تحليل الفورمات في سوائل الجسم: تطبيق في حالات التسمم بالميثانول". الطب الكيميائي الحيوي . 13 (2): 117-126 . doi : 10.1016/0006-2944(75)90147-7 . ISSN 0006-2944 . PMID 1 .  
  6. ↑ أنتوني إس جيه، سانت ليجر جيه إيه، بولياريس كيه، إيب إتش إس، تشان جيه إم، كاربنتر زد دبليو، وآخرون (2012). " ظهور إنفلونزا الطيور المميتة في فقمات ميناء نيو إنجلاند" . mBio . 3 (4) e00166-12: e00166– e00112. Bibcode : 2012mBio....3E...1A . doi : 10.1128/mBio.00166-12 . PMC 3419516. PMID 22851656 .   
  7. ↑ إيفريت إيه آر، كلير إس، بيرتل تي، جون إس بي، واش آر إس، سميث إس إي، وآخرون . (مارس 2012). "يحد IFITM3 من معدل الإصابة والوفيات المرتبطة بالإنفلونزا" . مجلة نيتشر . 484 (7395): 519-523 . Bibcode : 2012Natur.484..519 . doi : 10.1038/ nature10921 . PMC 3648786. PMID 22446628 .   
  8. ↑ لوزادا إس، أديغا إف، تشافيز آر (2012). "تحديد سلالات خلايا ورم الثدي الشقيقة في الفئران HH-16 cl.2/1 وHH-16 cl.4 كنموذج خلوي مخبري لـ Erbb2" . PLOS ONE . 7 (1) e29923. Bibcode : 2012PLoSO...729923L . doi : 10.1371/ journal.pone.0029923 . PMC 3254647. PMID 22253826 .  
  9. ↑ تينغ دي تي، ليبسون دي، بول إس، برانيغان بي دبليو، أخافانفارد إس، كوفمان إي جيه، وآخرون . (فبراير 2011). "فرط التعبير الشاذ عن التكرارات الساتلية في سرطان البنكرياس وأنواع أخرى من السرطانات الظهارية" . مجلة ساينس . 331 (6017): 593-596 . Bibcode : 2011Sci...331..593T . doi : 10.1126/science.1200801 . PMC 3701432. PMID 21233348 .   
  10. ↑ تشانغ ب، أرون ج، ماو ي س، لازار ز، هونغ ج، بهاتاشارجي ج، وآخرون (يوليو 2012). "إن الحمض النووي الريبوزي الطويل غير المشفر Malat1 غير ضروري لنمو الفأر ، لكن نسخه يلعب دورًا تنظيميًا في مرحلة البلوغ" . تقارير الخلية . 2 (1): 111-123 . doi : 10.1016/j.celrep.2012.06.003 . PMC 3408587. PMID 22840402 .   
  11. ↑ لي ك، كونكيو ن، جيون ش، لي إي، جونسون ب ه، كانغ ج ي، وآخرون . (يونيو 2011). "الـ miR-886 السلفي، وهو حمض نووي ريبوزي غير مشفر جديد يتم تثبيطه في السرطان، يرتبط بـ PKR ويعدل نشاطه" . RNA . 17 (6): 1076-1089 . doi : 10.1261/rna.2701111 . PMC 3096040. PMID 21518807 .   
  12. 1 2 3 بيرناسكوني بي، كاراميتوبولو-ديامانتيس إي، كاراميتوبولو-ديامانتيس إي، تورنيلو إل، لوجلي إيه، دي فيزيو دي، وآخرون . (أبريل 2008). “عدم الاستقرار الكروموسومي في الأورام اللمفاوية المرتبطة بالغشاء المخاطي في المعدة: دراسة تهجين الفلورسنت في الموقع باستخدام نهج ميكروأري الأنسجة”. علم الأمراض البشرية . 39 (4): 536-542 . دوى : 10.1016/j.humpath.2007.08.009 . بميد 18234275 .  
  13. 1 2 يونغ إيه بي، جاكسون دي جيه، ويث آر سي (19 مارس 2020). " مراجعة فنية ودليل لتهجين الحمض النووي الريبي الموضعي الفلوري" . PeerJ . 8 e8806. doi : 10.7717/peerj.8806 . PMC 7085896. PMID 32219032 .  
  14. ↑ جامور، ماريا سيليا؛ أوليفر، كونستانس (2010). "نفاذية أغشية الخلايا". طرق وبروتوكولات الكيمياء المناعية الخلوية . طرق في البيولوجيا الجزيئية (كليفتون، نيوجيرسي). المجلد 588. الصفحات 63-66 . doi : 10.1007/978-1-59745-324-0_9 . ISBN   978-1-58829-463-0ISSN 1940-6029 . PMID 20012820 .​  
  15. 1 2 فيبوه، كيشاندا؛ أجاميان، لارا؛ مولاند، أندرو ج. (2012-05-05). "الكشف عن الحمض النووي الريبي الفيروسي بواسطة التهجين الموضعي الفلوري (FISH)" . مجلة التجارب المصورة (63) e4002. doi : 10.3791/4002 . ISSN 1940-087X . PMC 3466955. PMID 22588480 .   
  16. ↑ هارون إم إف، سكينرتون سي تي، ستين جيه إيه، لاخنر إن، هوغنهولتز بي، تايسون جي دبليو (2013). "التهجين الموضعي الفلوري في المحلول وفرز الخلايا المنشط بالفلورة لاستعادة جينوم الخلية المفردة وجينوم المجموعة". علم الجينوم الميكروبي، وعلم النسخ الميكروبي، وعلم البروتينات الميكروبية . طرق في علم الإنزيمات. المجلد 531. الصفحات 3-19 . doi : 10.1016/B978-0-12-407863-5.00001-0 . ISBN   978-0-12-407863-5PMID 24060113​​ 
  17. 1 2 كوي سي، شو دبليو، لي بي (2016). "التهجين الموضعي الفلوري: تطبيقات التشخيص والبحث الجيني القائمة على الخلايا" . مجلة فرونتيرز في بيولوجيا الخلية والتطور . 4 : 89. doi : 10.3389/fcell.2016.00089 . PMC 5011256. PMID 27656642 .  
  18. ↑ Xie F, Timme KA, Wood JR (مايو 2018). "استخدام التهجين الموضعي الفلوري لجزيء mRNA المفرد (RNA-FISH) لتحديد كمية mRNA في بويضات وأجنة الفئران الفردية" . التقارير العلمية . 8 (1) 7930. Bibcode : 2018NatSR...8.7930X . doi : 10.1038/s41598-018-26345-0 . PMC 5962540. PMID 29785002 .  
  19. ↑ أوليفيرا، في سي، كارارا، آر سي، سيمويس، دي إل، ساجيورو، إف بي، كارلوتي، سي جي، كوفاس، دي تي، نيدر، إل (أغسطس 2010). "معالجة سودان بلاك بي تقلل من التألق الذاتي وتحسن دقة الإشارات الفلورية الخاصة بالتهجين الموضعي في مقاطع الدماغ". علم الأنسجة وعلم الأمراض النسيجية . 25 (8): 1017-1024 . doi : 10.14670/HH-25.1017 . PMID 20552552 . 
  20. ↑ أورجالو إيه في، يوهانسون إتش إي (2016-01-01). "تقنية التهجين الموضعي الفلوري للحمض النووي الريبي (Stellaris® RNA Fluorescence in Situ Hybridization for the Simultaneous Detection of Immature and Mature long noncoded RNAs in Adherent Cells". في: فينغ واي، تشانغ إل (محرران). الحمض النووي الريبي الطويل غير المشفر . طرق في البيولوجيا الجزيئية. المجلد 1402. سبرينغر نيويورك. الصفحات 119-134 . doi : 10.1007/978-1-4939-3378-5_10 . ISBN   978-1-4939-3376-1PMID 26721487​​ 
  21. ↑ تشين جيه، ماكسويجين دي، أونال إي (مايو 2018). "تحليل التهجين الموضعي الفلوري لجزيء واحد (smFISH) في النمو الخضري والانقسام الاختزالي لخميرة التبرعم" . مجلة التجارب المصورة (135). doi : 10.3791/57774 . PMC 6101419. PMID 29889208 .  
  22. ^ راج أ، فان دن بوجارد ب، ريفكين إس إيه، فان أوديناردن أ، تياجي إس (أكتوبر 2008). "تصوير جزيئات الرنا المرسال الفردية باستخدام مجسات متعددة ذات علامات فردية" . طرق الطبيعة . 5 (10): 877-879 . دوى : 10.1038/nmeth.1253 . بمك 3126653 . بميد 18806792 .  
  23. ↑ شركة Biosearch Technologies توقع ترخيصًا حصريًا لتقنيات التهجين الفلوري في الموقع (FISH) لجزيء واحد من جامعة UMDNJ. مؤرشف بتاريخ 2 أبريل 2016 في أرشيف الإنترنت (Wayback Machine ). biosearchtech.com
  24. ↑ كاغير ب، جيلمان أ، بارك ج، فافا ت، تانكيليفيتش أ، بيتنر إي دبليو، وآخرون . (ديسمبر 1999). "يُعدّ الحمض النووي الريبوزي الرسول لإنزيم غوانيل سيكلاز سي مؤشرًا حيويًا لسرطان القولون والمستقيم المتكرر في المرحلة الثانية". حوليات الطب الباطني . 131 (11): 805-812 . doi : 10.7326/0003-4819-131-11-199912070-00024 . PMID 10610624 .  
  25. ↑ كوسمان د، ميزوتاني سي إم، ليمونز د، كوكس دبليو جي، ماكجينيس دبليو، بير إي (أغسطس 2004). "الكشف المتعدد عن التعبير الجيني للرنا في أجنة ذبابة الفاكهة". مجلة ساينس . 305 (5685): 846. doi : 10.1126/science.1099247 . PMID 15297669. S2CID 26313219 .  
  26. ↑ هيسكانين م، كاليونيمي أ، بالوتي أ (مارس 1996). "تقنية التهجين الفلوري في الألياف: تجارب وبروتوكول مُحسَّن". التحليل الجيني . 12 ( 5-6 ): 179-184 . doi : 10.1016/S1050-3862(96)80004-0 . PMID 8740834 . 
  27. ↑ نغوين إتش تي، ترويلون آر، ماتسوكا إس، فيش إم، دي ليفال إل، بيسيج بي، جيس إم إيه (يناير 2017). "التهجين الموضعي الفلوري بمساعدة الموائع الدقيقة لتقييم مستقبل عامل نمو البشرة البشري 2 بشكل مفيد في سرطان الثدي" . مجلة التحقيقات المختبرية؛ مجلة الأساليب التقنية وعلم الأمراض . 97 (1): 93-103 . doi : 10.1038/labinvest.2016.121 . PMID 27892928 . 
  28. ↑ أوكابي إس، كيندايتشي تي، إيتو تي (2004). "MAR-FISH - منهج بيئي فيزيولوجي لربط الانتماء التطوري والنشاط الأيضي في الموقع للكائنات الدقيقة بدقة الخلية الواحدة" . الميكروبات والبيئات . 19 (2): 83-98 . Bibcode : 2004MbEnv..19...83O . doi : 10.1264/jsme2.19.83 .
  29. 1 2 تشين كيه إتش، بوتيجر إيه إن، موفيت جيه آر، وانغ إس، تشوانغ إكس (أبريل 2015). "تصوير الحمض النووي الريبوزي. تحليل مكاني عالي الدقة ومتعدد القنوات للحمض النووي الريبوزي في الخلايا المفردة" . ساينس . 348 ( 6233) aaa6090. doi : 10.1126/science.aaa6090 . PMC 4662681. PMID 25858977 .  
  30. ↑ بيركل، ج. م. (أغسطس 2019). "مشروع نجم البحر: اكتشاف أنماط الحمض النووي الريبوزي في الخلايا المفردة". مجلة نيتشر . 572 (7770): 549-551 . Bibcode : 2019Natur.572..549P . doi : 10.1038/d41586-019-02477-9 . PMID 31427807. S2CID 201064966 .  
  31. 1 2 ساراتي ز، فيدال ف، بلانكو ج (أبريل 2010). "دور دراسات التهجين الموضعي الفلوري للحيوانات المنوية في المرضى الذين يعانون من العقم: المؤشرات، ومنهجية الدراسة، والأهمية السريرية" . الخصوبة والعقم . 93 (6): 1892-1902 . doi : 10.1016/j.fertnstert.2008.12.139 . PMID 19254793 . 
  32. ↑ كورتز سي إم، موسديك إس في، ثيليكي إتش، فيلتن تي (2011). "نحو منصة تحليل خلوي متعددة المعايير: التهجين الموضعي الفلوري (FISH) على رقائق مصفوفة الثقوب الدقيقة". المؤتمر الدولي السنوي لعام 2011 لجمعية مهندسي الكهرباء والإلكترونيات في الهندسة الطبية والبيولوجية . المجلد 2011. الصفحات 8408-8411 . doi : 10.1109/IEMBS.2011.6092074 . ISBN   978-1-4577-1589-1PMID 22256298 . S2CID 4955677 .​  
  33. ↑ ديل ك، ليو ر، غرودزينسكي ب، محرران. (2008). المصفوفات الدقيقة: التحضير، والموائع الدقيقة، وطرق الكشف، والتطبيقات البيولوجية . سبرينغر. ص 323. ISBN  978-0-387-72716-5.
  34. 1 2 فريكمان هـ، زوتنر أ.إ، موتر أ، كيخني ج، هاجن ر.م، ستيندر هـ، بوبرت س (مايو 2017). "التهجين الموضعي الفلوري (FISH) في مختبر التشخيص الميكروبيولوجي الروتيني: مراجعة". المراجعات النقدية في علم الأحياء الدقيقة . 43 (3): 263-293 . doi : 10.3109/1040841X.2016.1169990 . PMID 28129707. S2CID 25252460 .  
  35. ↑ "التهجين الجينومي المقارن" . قاموس ماكجرو هيل للمصطلحات العلمية والتقنية . تم الاطلاع عليه في 19 سبتمبر 2013 .
  36. 1 2 فيرغسون-سميث، إم. إيه.، بيريرا، جيه. سي.، بورخيس، إيه.، كاساي، إف. (أكتوبر 2022). "ملاحظات حول التسلسل الخاص بالكروموسومات لبناء خرائط تماثل الكروموسومات بين الأنواع وحلها لتماثل الإنسان والألبكة" . علم الوراثة الخلوية الجزيئية . 15 (1) 44. doi : 10.1186/s13039-022-00622-0 . PMC 9547437. PMID 36207754 .  

للمزيد من القراءة