البيولوجيا الجزيئية

📅 آخر تحديث: ١ أغسطس ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ١ أغسطس ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 16 صور
الموسوعة الحرة
المبدأ المركزي لعلم الأحياء الجزيئي الذي يوضح تدفق المعلومات الوراثية داخل النظام البيولوجي.
مثال على مفهوم البيولوجيا الجزيئية. نموذج يوضح التفاعلات بين الحمض النووي والبروتينات أثناء تضاعف الحمض النووي : شريط الحمض النووي القالب (أصفر)، وشريط الحمض النووي البنت المصنّع حديثًا (سماوي)، وثلاث وحدات فرعية من PCNA (ظلال من اللون الأزرق)، والوحدة الفرعية المحفزة لبوليميراز الحمض النووي إبسيلون (أخضر).

علم الأحياء الجزيئي هو فرع من فروع علم الأحياء يسعى إلى فهم البنى الجزيئية والعمليات الكيميائية التي تُشكل أساس النشاط البيولوجي داخل الخلايا وفيما بينها . ويركز هذا العلم بشكل كبير على دراسة الأحماض النووية (مثل الحمض النووي DNA والحمض النووي RNA ) والبروتينات . ويدرس بنية هذه الجزيئات الكبيرة ووظائفها وتفاعلاتها، وكيفية تنظيمها لعمليات حيوية مثل التضاعف ، والنسخ ، والترجمة ، وتخليق البروتين ، والتفاعلات الجزيئية الحيوية المعقدة . يُعدّ مجال علم الأحياء الجزيئي متعدد التخصصات ، إذ يعتمد على مبادئ من علم الوراثة ، والكيمياء الحيوية ، والفيزياء، والرياضيات، ومؤخرًا علوم الحاسوب ( المعلوماتية الحيوية ). [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ]

على الرغم من رصد الخلايا وغيرها من التراكيب المجهرية في الكائنات الحية منذ القرن الثامن عشر، إلا أن الفهم الدقيق للآليات والتفاعلات التي تحكم سلوكها لم يتبلور إلا في القرن العشرين، عندما تطورت التقنيات المستخدمة في الفيزياء والكيمياء بما يكفي للسماح بتطبيقها في العلوم البيولوجية. وقد استخدم مصطلح "البيولوجيا الجزيئية" لأول مرة عام 1945 من قبل الفيزيائي الإنجليزي ويليام أستبري ، الذي وصفها بأنها منهج يركز على استكشاف أسس الظواهر البيولوجية، أي الكشف عن التراكيب والخصائص الفيزيائية والكيميائية للجزيئات البيولوجية، بالإضافة إلى تفاعلاتها مع جزيئات أخرى، وكيف تفسر هذه التفاعلات ملاحظات ما يُسمى بالبيولوجيا الكلاسيكية، التي تدرس العمليات البيولوجية على نطاقات أوسع ومستويات تنظيمية أعلى. [ 4 ] في عام 1953، كان فرانسيس كريك ، وجيمس واتسون ، وروزاليند فرانكلين ، وزملاؤهم في وحدة مجلس البحوث الطبية، مختبر كافنديش ، أول من وصف نموذج الحلزون المزدوج للبنية الكيميائية للحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA)، والذي يُعتبر حدثًا بارزًا في هذا المجال الناشئ، لأنه وفّر أساسًا فيزيائيًا كيميائيًا لفهم الفكرة الغامضة سابقًا للأحماض النووية باعتبارها المادة الأساسية للوراثة البيولوجية. وقد اقترحوا هذه البنية بناءً على بحث سابق أجرته فرانكلين، والذي نقله إليهم موريس ويلكنز وماكس بيروتز . [ 5 ] أدى عملهم إلى اكتشاف الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA) في كائنات دقيقة أخرى، ونباتات، وحيوانات. [ 6 ]

يشمل مجال البيولوجيا الجزيئية تقنيات تمكّن العلماء من دراسة العمليات الجزيئية. [ 7 ] تُستخدم هذه التقنيات لاستهداف الأدوية الجديدة بكفاءة، وتشخيص الأمراض، وفهم وظائف الخلايا بشكل أفضل. [ 8 ] تندرج بعض الأبحاث السريرية والعلاجات الطبية الناشئة عن البيولوجيا الجزيئية تحت مسمى العلاج الجيني ، بينما يُشار الآن إلى استخدام البيولوجيا الجزيئية أو بيولوجيا الخلية الجزيئية في الطب باسم الطب الجزيئي . [ 9 ]

تاريخ البيولوجيا الجزيئية

وصف الزاوية في بنية الحمض النووي
تمثيل تخطيطي لبنية الحمض النووي (DNA) الخاصة بواتسون وكريك

يقع علم الأحياء الجزيئي عند تقاطع الكيمياء الحيوية وعلم الوراثة ؛ فمع ظهور هذين التخصصين العلميين وتطورهما في القرن العشرين، بات من الواضح أنهما يسعيان إلى تحديد الآليات الجزيئية التي تقوم عليها الوظائف الخلوية الحيوية. [ 10 ] [ 11 ] وقد ارتبطت التطورات في علم الأحياء الجزيئي ارتباطًا وثيقًا بتطوير التقنيات الجديدة وتحسينها. [ 12 ]

نشأ علم الوراثة من محاولات فهم مجموعة القواعد التي تحكم التكاثر والوراثة ، وطبيعة الوحدات الوراثية الافتراضية المعروفة بالجينات . وقد كان غريغور مندل رائدًا في هذا المجال عام 1866، عندما وصف لأول مرة قوانين الوراثة التي لاحظها في دراساته على التزاوج في نباتات البازلاء. [ 13 ] أحد هذه القوانين هو قانون الانعزال ، الذي ينص على أن الأفراد ثنائيي المجموعة الكروموسومية الذين يحملون أليلين لجين معين سينقلون أحد هذين الأليلين إلى نسلهم. [ 14 ] وبفضل عمله المحوري، يُشار إلى دراسة الوراثة عادةً باسم علم الوراثة المندلي . [ 15 ]

كان اكتشاف بنية الحمض النووي (DNA) علامة فارقة في علم الأحياء الجزيئي . بدأ هذا العمل عام 1869 على يد فريدريك ميشر ، عالم الكيمياء الحيوية السويسري، الذي اقترح لأول مرة بنية تُسمى النيوكليين ، والتي نعرفها الآن باسم الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA). [ 16 ] اكتشف ميشر هذه المادة الفريدة من خلال دراسة مكونات الضمادات المليئة بالصديد، وملاحظة الخصائص الفريدة للمواد المحتوية على الفوسفور. [ 17 ] ومن المساهمين البارزين الآخرين في نموذج الحمض النووي، فوبوس ليفين ، الذي اقترح "نموذج عديد النوكليوتيدات" للحمض النووي عام 1919 نتيجة لتجاربه الكيميائية الحيوية على الخميرة. [ 18 ] وفي عام 1950، وسّع إروين تشارغاف نطاق عمل ليفين، وكشف عن بعض الخصائص الأساسية للأحماض النووية: أولًا، يختلف تسلسل الأحماض النووية بين الأنواع. [ 19 ] ثانيًا، يكون التركيز الكلي للبيورينات (الأدينين والجوانين) مساويًا دائمًا للتركيز الكلي للبيريميدينات (السيتوزين والثايمين). [ 16 ] تُعرف هذه القاعدة الآن بقاعدة تشارجاف. في عام 1953، نشر جيمس واتسون وفرانسيس كريك التركيب الحلزوني المزدوج للحمض النووي DNA، [ 20 ] استنادًا إلى دراسة البلورات بالأشعة السينية التي أجرتها روزاليند فرانكلين، والتي نقلها إليهما موريس ويلكنز وماكس بيروتز . [ 5 ] وصف واتسون وكريك تركيب الحمض النووي DNA، وتكهنا بآثار هذا التركيب الفريد على الآليات المحتملة لتضاعف الحمض النووي DNA. [ 20 ] مُنح واتسون وكريك جائزة نوبل في الطب أو علم وظائف الأعضاء عام 1962، إلى جانب ويلكنز، لاقتراحهم نموذجًا لتركيب الحمض النووي DNA. [ 6 ]

في عام 1961، تم إثبات أنه عندما يُشفّر جينٌ ما بروتينًا ، فإن ثلاث قواعد متسلسلة من الحمض النووي (DNA) للجين تُحدد كل حمض أميني متتالٍ في البروتين. [ 21 ] وبالتالي، فإن الشفرة الوراثية هي شفرة ثلاثية، حيث تُحدد كل ثلاثية (تُسمى كودونًا ) حمضًا أمينيًا معينًا. علاوة على ذلك، تبين أن الكودونات لا تتداخل مع بعضها البعض في تسلسل الحمض النووي الذي يُشفّر البروتين، وأن كل تسلسل يُقرأ من نقطة بداية ثابتة. خلال الفترة 1962-1964، ومن خلال استخدام طفرات مميتة مشروطة لفيروس بكتيري، [ 22 ] تحققت إنجازات جوهرية في فهمنا لوظائف وتفاعلات البروتينات المستخدمة في آلية تضاعف الحمض النووي ، وإصلاح الحمض النووي ، وإعادة تركيب الحمض النووي ، وفي تجميع التراكيب الجزيئية. [ 23 ]

تجربة غريفيث

تجربة غريفيث

في عام ١٩٢٨، اكتشف فريدريك غريفيث خاصية ضراوة في بكتيريا المكورات الرئوية ، كانت تقتل فئران التجارب. ووفقًا لمندل، الذي كان سائدًا آنذاك، فإن انتقال الجينات لا يحدث إلا من الخلايا الأم إلى الخلايا البنت. وقدّم غريفيث نظرية أخرى، مفادها أن انتقال الجينات الذي يحدث بين أفراد الجيل نفسه يُعرف باسم الانتقال الجيني الأفقي. وتُعرف هذه الظاهرة الآن بالتحول الجيني. [ ٢٤ ]

تناولت تجربة غريفيث بكتيريا المكورات الرئوية، التي تضم سلالتين مختلفتين، إحداهما ضارية وملساء، والأخرى غير ضارية وخشنة. تتميز السلالة الملساء بمظهر لامع نتيجة وجود نوع محدد من عديد السكاريد - وهو بوليمر من الجلوكوز وكبسولة حمض الجلوكورونيك. وبسبب هذه الطبقة السكرية، لا يستطيع جهاز المناعة لدى المضيف التعرف على البكتيريا، مما يؤدي إلى قتل المضيف. أما السلالة الخشنة فتفتقر إلى هذه الكبسولة السكرية، مما ينتج عنه مظهر باهت وخشن للمستعمرة، ويجعلها غير ضارية لأن جهاز المناعة لدى المضيف يتعرف عليها ويدمرها بسهولة أكبر. [ 25 ]

من المعروف أن وجود أو غياب الكبسولة في السلالة محدد وراثيًا. توجد السلالات الملساء والخشنة في عدة أنواع مختلفة مثل SI وS-II وS-III، إلخ، وRI وR-II وR-III، إلخ، على التوالي. تختلف جميع هذه الأنواع الفرعية من بكتيريا S وR عن بعضها البعض في نوع المستضد الذي تنتجه. [ 6 ]

تجربة أفيري-ماكلويد-مكارتي

كانت تجربة أفيري-ماكلويد-مكارتي تجربةً عمليةً أجراها أوزوالد أفيري وكولين ماكلويد وماكلين مكارتي عام 1944، حيث أفادوا بأن الحمض النووي (DNA) هو المادة التي تُسبب التحول البكتيري ، في حقبةٍ كان يُعتقد فيها على نطاق واسع أن البروتينات هي التي تحمل المعلومات الوراثية (حتى أن كلمة "بروتين" نفسها صِيغت للدلالة على الاعتقاد بأن وظيفتها أساسية ). وقد كانت هذه التجربة تتويجًا لأبحاثٍ أُجريت في ثلاثينيات القرن العشرين وأوائل القرن العشرين في معهد روكفلر للأبحاث الطبية، بهدف تنقية وتوصيف "المبدأ المُحوِّل" المسؤول عن ظاهرة التحول التي وُصفت لأول مرة في تجربة غريفيث عام 1928: حيث أدى حقن بكتيريا المكورات الرئوية القاتلة من السلالة الضارية III-S مع بكتيريا المكورات الرئوية الحية غير الضارية من النوع II-R إلى عدوى مميتة من النوع III-S. في ورقتهم البحثية بعنوان " دراسات حول الطبيعة الكيميائية للمادة المحفزة لتحول أنواع المكورات الرئوية: تحفيز التحول بواسطة جزء من الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين المعزول من المكورات الرئوية من النوع الثالث "، والمنشورة في عدد فبراير 1944 من مجلة الطب التجريبي ، اقترح أفيري وزملاؤه أن الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين، وليس البروتين كما كان شائعًا في ذلك الوقت، قد يكون المادة الوراثية للبكتيريا، وقد يكون مماثلاً للجينات و/أو الفيروسات في الكائنات الحية العليا. [ 26 ] [ 27 ]

تجربة هيرشي-تشيس

تجربة هيرشي-تشيس

تأكد أن الحمض النووي (DNA) هو المادة الوراثية المسببة للعدوى من خلال تجربة هيرشي-تشيس . استخدم الباحثان بكتيريا الإشريكية القولونية (E. coli) وفيروسات بكتيرية (bacteriophage) في هذه التجربة. تُعرف هذه التجربة أيضًا بتجربة الخلاط، نظرًا لاستخدام الخلاط المنزلي كأداة رئيسية. أثبت ألفريد هيرشي ومارثا تشيس أن الحمض النووي الذي يحقنه الفيروس البكتيري في البكتيريا يحتوي على جميع المعلومات اللازمة لتخليق فيروسات بكتيرية جديدة. استخدم الباحثان النشاط الإشعاعي لوسم الغلاف البروتيني للفيروس البكتيري بالكبريت المشع، والحمض النووي بالفوسفور المشع، في أنبوبي اختبار منفصلين. بعد مزج الفيروس البكتيري وبكتيريا الإشريكية القولونية في أنبوب الاختبار، تبدأ فترة الحضانة التي يحقن فيها الفيروس مادته الوراثية في خلايا الإشريكية القولونية . ثم يُخلط المزيج أو يُرجّ، مما يفصل الفيروس عن خلايا الإشريكية القولونية . يُخضع المزيج بأكمله للطرد المركزي، ثم يُفحص الراسب الذي يحتوي على خلايا الإشريكية القولونية ، ويُتخلص من السائل الطافي. وقد أظهرت خلايا الإشريكية القولونية وجود الفوسفور المشع، مما يشير إلى أن المادة المحقونة كانت حمضًا نوويًا ريبوزيًا منقوص الأكسجين (DNA) وليس الغلاف البروتيني.

يتضاعف الحمض النووي المحقون داخل خلايا الإشريكية القولونية ، ويوجه عملية تخليق جزيئات العاثيات الوليدة. وتُعد عملية النقل الجيني ، التي وصفها زيندر وليدربيرغ، نوعًا من أنواع النقل الجيني الأفقي. النقل الجيني هو عملية تحمل فيها العاثية جزءًا من الحمض النووي البكتيري وتنقله إلى بكتيريا أخرى. وهذا أيضًا نوع من أنواع النقل الجيني الأفقي. [ 6 ]

تجربة ميسلسون-ستال

تجربة ميسلسون-ستال

تجربة ميسلسون-ستال هي تجربة أجراها ماثيو ميسلسون وفرانكلين ستال عام 1958، دعمت فرضية واتسون وكريك القائلة بأن تضاعف الحمض النووي (DNA) شبه محافظ . في التضاعف شبه المحافظ، عند تضاعف حلزون الحمض النووي المزدوج، يتكون كل من الحلزونين الجديدين من شريط من الحلزون الأصلي وشريط مُصنّع حديثًا. وقد وُصفت هذه التجربة بأنها "أجمل تجربة في علم الأحياء". [ 28 ] قرر ميسلسون وستال أن أفضل طريقة لتتبع الحمض النووي الأصلي هي وسمه بتغيير إحدى ذراته. ولأن النيتروجين موجود في جميع قواعد الحمض النووي ، فقد أنتجا حمضًا نوويًا أصليًا يحتوي على نظير أثقل بكثير من النيتروجين الموجود طبيعيًا. سمحت لهما هذه الكتلة المتغيرة بتتبع وتحديد كمية الحمض النووي الأصلي المتبقية في الحمض النووي بعد دورات التضاعف المتتالية.

البيولوجيا الجزيئية الحديثة

في أوائل العقد الثالث من القرن الحادي والعشرين، دخل علم الأحياء الجزيئي عصرًا ذهبيًا تميز بالتطور التقني الرأسي والأفقي. فعلى الصعيد الرأسي، تتيح التقنيات الحديثة مراقبة العمليات البيولوجية في الوقت الحقيقي على المستوى الذري. [ 29 ] ويتمتع علماء الأحياء الجزيئية اليوم بإمكانية الوصول إلى بيانات التسلسل بأسعار معقولة وبدقة متزايدة، مما يسهل تطوير أساليب جديدة للتلاعب الجيني في كائنات غير نموذجية. وبالمثل، سيقود علماء الأحياء الجزيئية التركيبية الإنتاج الصناعي للجزيئات الصغيرة والكبيرة من خلال إدخال مسارات أيضية خارجية في مختلف سلالات الخلايا بدائية النواة وحقيقية النواة. [ 30 ]

على الصعيد الأفقي، أصبحت بيانات التسلسل الجيني أكثر توفراً وبأسعار معقولة، وتُستخدم في العديد من المجالات العلمية المختلفة. سيساهم ذلك في تطوير الصناعات في الدول النامية، ويزيد من إمكانية وصول الباحثين الأفراد إليها. وبالمثل، أصبح بإمكان الأفراد الآن تصميم وتنفيذ تجارب تعديل الجينات بتقنية CRISPR-Cas9 بأقل من 10,000 دولار أمريكي على كائنات حية جديدة، مما سيدفع عجلة تطوير التطبيقات الصناعية والطبية. [ 31 ]

العلاقة بالعلوم البيولوجية الأخرى

العلاقة التخطيطية بين الكيمياء الحيوية وعلم الوراثة وعلم الأحياء الجزيئي

تصف القائمة التالية وجهة نظر حول العلاقات متعددة التخصصات بين البيولوجيا الجزيئية والمجالات الأخرى ذات الصلة. [ 32 ]

بينما يمارس الباحثون تقنيات خاصة بالبيولوجيا الجزيئية، فمن الشائع دمجها مع أساليب من علم الوراثة والكيمياء الحيوية . يُعدّ جزء كبير من البيولوجيا الجزيئية كميًا، وقد أُنجز مؤخرًا قدر كبير من العمل باستخدام تقنيات علوم الحاسوب مثل المعلوماتية الحيوية والبيولوجيا الحاسوبية . وقد برز علم الوراثة الجزيئية ، وهو دراسة بنية الجينات ووظائفها، كأحد أبرز فروع البيولوجيا الجزيئية منذ أوائل العقد الأول من القرن الحادي والعشرين. وتستفيد فروع أخرى من علم الأحياء من البيولوجيا الجزيئية، إما من خلال الدراسة المباشرة لتفاعلات الجزيئات في حد ذاتها، كما هو الحال في بيولوجيا الخلية وبيولوجيا النمو ، أو بشكل غير مباشر، حيث تُستخدم التقنيات الجزيئية لاستنتاج السمات التاريخية للسكان أو الأنواع ، كما هو الحال في مجالات البيولوجيا التطورية مثل علم وراثة السكان وعلم الوراثة العرقي . كما يوجد تاريخ طويل لدراسة الجزيئات الحيوية "من الصفر"، أو على المستوى الجزيئي، في الفيزياء الحيوية . [ 35 ]

تقنيات البيولوجيا الجزيئية

رسوم متحركة للحمض النووي

الاستنساخ الجزيئي

صورة التحويل

تُستخدم تقنية الاستنساخ الجزيئي لعزل تسلسل الحمض النووي المطلوب ونقله إلى ناقل بلازميدي. [ 36 ] طُوّرت هذه التقنية، المعروفة بتقنية الحمض النووي المؤتلف، لأول مرة في ستينيات القرن الماضي. [ 37 ] في هذه التقنية، يُستنسخ تسلسل الحمض النووي الذي يُشفّر بروتينًا مُحددًا باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) و/أو إنزيمات التقييد ، إلى بلازميد ( ناقل التعبير ). عادةً ما يحتوي ناقل البلازميد على ثلاث سمات مميزة على الأقل: منشأ التضاعف، وموقع استنساخ متعدد (MCS)، وعلامة انتقائية (عادةً مقاومة للمضادات الحيوية ). بالإضافة إلى ذلك، تقع مناطق المحفز وموقع بدء النسخ في اتجاه 5' لموقع الاستنساخ المتعدد، والتي تُنظم التعبير عن الجين المُستنسخ.

يمكن إدخال هذا البلازميد في الخلايا البكتيرية أو الحيوانية. يُمكن إدخال الحمض النووي (DNA) إلى الخلايا البكتيرية عن طريق التحويل الخلوي عبر امتصاص الحمض النووي العاري، أو الاقتران عبر التلامس بين الخلايا، أو النقل عبر ناقل فيروسي. يُطلق على إدخال الحمض النووي إلى الخلايا حقيقية النواة ، مثل الخلايا الحيوانية ، بوسائل فيزيائية أو كيميائية اسم النقل الجيني . تتوفر عدة تقنيات مختلفة للنقل الجيني، مثل النقل الجيني باستخدام فوسفات الكالسيوم، والتحفيز الكهربائي ، والحقن المجهري ، والنقل الجيني باستخدام الليبوسومات . قد يندمج البلازميد في الجينوم ، مما ينتج عنه نقل جيني مستقر، أو قد يبقى مستقلاً عن الجينوم ويُعبَّر عنه مؤقتًا، وهو ما يُسمى بالنقل الجيني العابر. [ 38 ] [ 39 ]

يوجد الآن الحمض النووي الذي يشفر بروتينًا معينًا داخل الخلية، ويمكن إنتاج هذا البروتين . تتوفر أنظمة متنوعة، مثل المحفزات القابلة للتحريض وعوامل إشارات الخلية المحددة، للمساعدة في إنتاج البروتين المطلوب بكميات كبيرة. بعد ذلك، يمكن استخلاص كميات كبيرة من البروتين من الخلية البكتيرية أو حقيقية النواة. يمكن اختبار البروتين من حيث نشاطه الإنزيمي في ظروف مختلفة، أو يمكن بلورته لدراسة بنيته الثلاثية ، أو، في صناعة الأدوية، يمكن دراسة فعالية الأدوية الجديدة ضد هذا البروتين. [ 40 ]

تفاعل البوليميراز المتسلسل

تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) تقنية متعددة الاستخدامات للغاية لنسخ الحمض النووي (DNA). باختصار، يسمح PCR بنسخ أو تعديل تسلسل DNA محدد بطرق محددة مسبقًا. يتميز هذا التفاعل بقوته الفائقة، ففي ظل ظروف مثالية، يمكنه تضخيم جزيء DNA واحد إلى 1.07 مليار جزيء في أقل من ساعتين. لتقنية PCR تطبيقات عديدة، منها دراسة التعبير الجيني، والكشف عن الكائنات الدقيقة الممرضة، والكشف عن الطفرات الجينية، وإدخال الطفرات في DNA. [ 41 ] يمكن استخدام تقنية PCR لإدخال مواقع إنزيمات التقييد في نهايات جزيئات DNA، أو لتغيير قواعد معينة في DNA، وتُعرف هذه الطريقة باسم الطفرات الموجهة للموقع . كما يمكن استخدام PCR لتحديد ما إذا كان جزء معين من DNA موجودًا في مكتبة cDNA . تتضمن تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) العديد من الأنواع، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل للنسخ العكسي ( RT-PCR ) لتضخيم الحمض النووي الريبي (RNA)، ومؤخراً، تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR) الذي يسمح بالقياس الكمي لجزيئات الحمض النووي (DNA) أو الحمض النووي الريبي (RNA). [ 42 ] [ 43 ]

هلام الأغاروز بنسبة 2% في محلول منظم البورات، مصبوب في صينية هلامية

الرحلان الكهربائي الهلامي

صفحة بيانات السلامة

الرحلان الكهربائي الهلامي تقنية تفصل الجزيئات حسب حجمها باستخدام هلام الأغاروز أو البولي أكريلاميد. [ 44 ] تُعد هذه التقنية إحدى الأدوات الرئيسية في البيولوجيا الجزيئية. ويكمن مبدأها الأساسي في إمكانية فصل شظايا الحمض النووي (DNA) بتطبيق تيار كهربائي عبر الهلام، فنظرًا لاحتواء هيكل الحمض النووي على مجموعات فوسفات سالبة الشحنة، فإنه سيهاجر عبر هلام الأغاروز باتجاه الطرف الموجب للتيار. [ 44 ] كما يمكن فصل البروتينات بناءً على حجمها باستخدام هلام SDS-PAGE ، أو بناءً على حجمها وشحنتها الكهربائية باستخدام ما يُعرف بالرحلان الكهربائي الهلامي ثنائي الأبعاد . [ 45 ]

تم تلوين البروتينات على هلام البولي أكريلاميد باستخدام صبغة كوميسي الزرقاء

اختبار بروتين برادفورد

يُعدّ اختبار برادفورد تقنيةً في البيولوجيا الجزيئية تُتيح قياس كمية جزيئات البروتين بسرعة ودقة، وذلك بالاستفادة من الخصائص الفريدة لصبغة تُسمى كوماسي الأزرق اللامع G-250. [ 46 ] يتغير لون كوماسي الأزرق بشكلٍ ملحوظ من البني المحمر إلى الأزرق الفاتح عند ارتباطه بالبروتين. [ 46 ] في حالته الكاتيونية غير المستقرة، يبلغ طول موجة الخلفية لكوماسي الأزرق 465  نانومتر، ويُصدر لونًا بنيًا محمرًا. [ 47 ] عند ارتباط كوماسي الأزرق بالبروتين في محلول حمضي، يتحول طول موجة الخلفية إلى 595  نانومتر، وتُصدر الصبغة لونًا أزرق فاتحًا. [ 47 ] ترتبط البروتينات في الاختبار بكوماسي الأزرق في غضون دقيقتين تقريبًا، ويبقى مُركّب البروتين-الصبغة مستقرًا لمدة ساعة تقريبًا، مع أنه يُنصح بأخذ قراءات الامتصاص في غضون 5 إلى 20 دقيقة من بدء التفاعل. [ 46 ] يمكن قياس تركيز البروتين في اختبار برادفورد باستخدام مطياف ضوئي للضوء المرئي ، وبالتالي لا يتطلب معدات واسعة النطاق. [ 47 ]

طُوِّرت هذه الطريقة عام ١٩٧٥ على يد ماريون إم. برادفورد ، وقد مكّنت من تحديد كمية البروتين بشكل أسرع وأكثر دقة مقارنةً بالطرق السابقة: طريقة لوري واختبار البيوريت. [ ٤٦ ] على عكس الطرق السابقة، لا يتأثر اختبار برادفورد بتداخل العديد من الجزيئات غير البروتينية، بما في ذلك الإيثانول وكلوريد الصوديوم وكلوريد المغنيسيوم. [ ٤٦ ] مع ذلك، فهو يتأثر بعوامل التخزين المؤقت القلوية القوية، مثل دوديسيل كبريتات الصوديوم (SDS). [ ٤٦ ]

التلطيخ والتحليل الجزيئي الكبير

مصطلحات "التلطيخ الشمالي" و "التلطيخ الغربي" و "التلطيخ الشرقي" مشتقة في الأصل من مزحة في علم الأحياء الجزيئي، استُخدمت فيها عبارة " التلطيخ الجنوبي" نسبةً إلى التقنية التي وصفها إدوين ساوثرن لتهجين الحمض النووي المُلطخ. في الواقع، لم تستخدم باتريشيا توماس، مطورة تقنية تلطيخ الحمض النووي الريبوزي (RNA) التي عُرفت لاحقًا باسم " التلطيخ الشمالي" ، هذا المصطلح. [ 48 ]

التهجين الجنوبي

سميت تقنية ساوثرن بلوت نسبةً إلى مخترعها، عالم الأحياء إدوين ساوثرن ، وهي طريقةٌ للكشف عن وجود تسلسلٍ محددٍ من الحمض النووي (DNA) ضمن عينةٍ من الحمض النووي. تُفصل عينات الحمض النووي، قبل أو بعد هضمها بواسطة إنزيمات القطع (إنزيم القطع الداخلي)، باستخدام الرحلان الكهربائي الهلامي، ثم تُنقل إلى غشاءٍ عبر الخاصية الشعرية . بعد ذلك، يُعرَّض الغشاء لمسبار حمض نووي مُوسَم، يحمل تسلسلًا قاعديًا مُكمِّلًا للتسلسل الموجود على الحمض النووي المراد فحصه. [ 49 ] يُستخدم ساوثرن بلوت بشكلٍ أقل شيوعًا في العلوم المخبرية نظرًا لقدرة تقنياتٍ أخرى، مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR )، على الكشف عن تسلسلاتٍ محددةٍ من الحمض النووي في عينات الحمض النووي. مع ذلك، لا تزال هذه التقنية تُستخدم في بعض التطبيقات، مثل قياس عدد نسخ الجينات المُدخَلة في الفئران المُعدَّلة وراثيًا ، أو في هندسة خطوط الخلايا الجذعية الجنينية المُفتقرة للجينات . [ 35 ]

اللطخة الشمالية

مخطط نورثرن بلوت

تُستخدم تقنية التلطيخ الشمالي لدراسة وجود جزيئات RNA محددة، وذلك من خلال المقارنة النسبية بين مجموعة من عينات RNA المختلفة. وهي في الأساس مزيج من الفصل الكهربائي للهلام RNA المُشوه ، والتلطيخ . في هذه العملية، يُفصل RNA بناءً على حجمه، ثم يُنقل إلى غشاء يُفحص باستخدام مُكمل مُوسَم لتسلسل مُحدد. يمكن عرض النتائج بطرق متنوعة حسب الوسم المُستخدم؛ إلا أن معظمها يُظهر حزمًا تُمثل أحجام RNA المُكتشفة في العينة. ترتبط شدة هذه الحزم بكمية RNA المستهدف في العينات المُحللة. يُستخدم هذا الإجراء بشكل شائع لدراسة وقت وكمية التعبير الجيني، وذلك بقياس كمية RNA الموجودة في عينات مختلفة، بافتراض عدم وجود تنظيم ما بعد النسخ، وأن مستويات mRNA تعكس المستويات النسبية للبروتين المُنتج. تُعد هذه التقنية من أبسط الأدوات لتحديد وقت وظروف التعبير عن جينات مُعينة في الأنسجة الحية. [ 50 ] [ 51 ]

اللطخة الغربية

يُعدّ التحليل المناعي الغربي تقنيةً تُستخدم للكشف عن بروتينات مُحددة من بين مجموعة من البروتينات. [ 52 ] يُمكن استخدام التحليل المناعي الغربي لتحديد حجم البروتينات المعزولة، بالإضافة إلى قياس كمية تعبيرها. [ 53 ] في التحليل المناعي الغربي ، تُفصل البروتينات أولًا حسب حجمها، في هلام رقيق محصور بين لوحين زجاجيين، في تقنية تُعرف باسم SDS-PAGE . ثم تُنقل البروتينات الموجودة في الهلام إلى غشاء داعم من فلوريد البولي فينيليدين (PVDF) أو النيتروسليلوز أو النايلون أو غيرها. بعد ذلك، يُمكن فحص هذا الغشاء بمحاليل الأجسام المضادة . يُمكن تصوير الأجسام المضادة التي ترتبط تحديدًا بالبروتين المطلوب باستخدام تقنيات متنوعة، بما في ذلك المنتجات الملونة، والتألق الكيميائي ، أو التصوير الإشعاعي الذاتي . غالبًا ما تُوسم الأجسام المضادة بالإنزيمات. عند تعريض ركيزة متألقة كيميائيًا للإنزيم ، يُصبح الكشف ممكنًا. لا تقتصر تقنيات التحليل المناعي الغربي على الكشف فحسب، بل تُتيح أيضًا التحليل الكمي. يمكن استخدام طرق مماثلة لتقنية التلطيخ الغربي لتلوين بروتينات محددة مباشرة في الخلايا الحية أو مقاطع الأنسجة . [ 52 ] [ 54 ]

اللطخة الشرقية

تُستخدم تقنية التلطيخ الشرقي للكشف عن التعديلات اللاحقة للترجمة في البروتينات. تُفحص البروتينات الملطخة على غشاء PVDF أو غشاء النيتروسليلوز بحثًا عن التعديلات باستخدام ركائز محددة. [ 55 ]

المصفوفات الدقيقة

طباعة مصفوفة الحمض النووي الدقيقة
تهجين الهدف مع المسبار

المصفوفة الدقيقة للحمض النووي هي مجموعة من النقاط الملتصقة بدعامة صلبة، مثل شريحة مجهرية، حيث تحتوي كل نقطة على قطعة أو أكثر من قطع الحمض النووي أحادي السلسلة . تُمكّن المصفوفات من وضع كميات كبيرة من النقاط الصغيرة جدًا (قطرها 100 ميكرومتر) على شريحة واحدة. تحتوي كل نقطة على جزيء من الحمض النووي يُكمّل تسلسلًا واحدًا من الحمض النووي . يسمح أحد أشكال هذه التقنية بتقييم التعبير الجيني للكائن الحي في مرحلة معينة من نموه ( تحليل التعبير الجيني ). في هذه التقنية، يُعزل الحمض النووي الريبوزي (RNA) من النسيج ويُحوّل إلى حمض نووي تكميلي مُوسَم (cDNA). ثم يُهجّن هذا الحمض النووي التكميلي مع القطع الموجودة على المصفوفة، ويمكن تصوير عملية التهجين. نظرًا لإمكانية صنع مصفوفات متعددة بنفس موضع القطع تمامًا، فإنها مفيدة بشكل خاص لمقارنة التعبير الجيني لنسيجين مختلفين، مثل نسيج سليم وآخر سرطاني. كما يمكن قياس الجينات المُعبَّر عنها وكيفية تغير هذا التعبير مع مرور الوقت أو مع عوامل أخرى. هناك العديد من الطرق المختلفة لتصنيع المصفوفات الدقيقة. أكثرها شيوعًا هي رقائق السيليكون، وشرائح المجهر ذات البقع التي يبلغ قطرها حوالي 100 ميكرومتر، والمصفوفات المُخصصة، والمصفوفات ذات البقع الأكبر على أغشية مسامية (المصفوفات الكبيرة). ويمكن أن يتراوح عدد البقع في المصفوفة الواحدة بين 100 بقعة وأكثر من 10000 بقعة. كما يمكن تصنيع المصفوفات باستخدام جزيئات أخرى غير الحمض النووي DNA. [ 56 ] [ 57 ] [ 58 ] [ 59 ]

أوليغونوكليوتيد خاص بالأليل

تقنية أوليغونوكليوتيدات محددة الأليل (ASO) هي تقنية تسمح بالكشف عن طفرات القاعدة المفردة دون الحاجة إلى تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو الفصل الكهربائي الهلامي. تُعرَّض مجسات قصيرة (20-25 نيوكليوتيدًا) موسومة للحمض النووي المستهدف غير المجزأ، ويحدث التهجين بدقة عالية نظرًا لقصر المجسات، حتى أن تغيير قاعدة واحدة يعيق التهجين. بعد ذلك، يُغسل الحمض النووي المستهدف وتُزال المجسات غير المهجنة. ثم يُحلل الحمض النووي المستهدف للكشف عن وجود المجس باستخدام النشاط الإشعاعي أو التألق. في هذه التجربة، كما هو الحال في معظم تقنيات البيولوجيا الجزيئية، يجب استخدام عنصر تحكم لضمان نجاح التجربة. [ 60 ] [ 61 ] في البيولوجيا الجزيئية، تُطوَّر الإجراءات والتقنيات باستمرار، وتُهمل التقنيات القديمة. على سبيل المثال، قبل ظهور تقنية الفصل الكهربائي للهلام ( الأغاروز أو البولي أكريلاميد ) للحمض النووي، كان حجم جزيئات الحمض النووي يُحدد عادةً عن طريق معدل الترسيب في تدرجات السكروز ، وهي تقنية بطيئة وتتطلب جهدًا كبيرًا وأجهزة باهظة الثمن؛ وقبل تدرجات السكروز، كان يُستخدم قياس اللزوجة . وبغض النظر عن أهميتها التاريخية، فإنه من المفيد غالبًا معرفة التقنيات القديمة، إذ قد تكون مفيدة أحيانًا لحل مشكلة جديدة لا تُناسبها التقنيات الأحدث. [ 62 ]

انظر أيضاً

مراجع

  1. ↑ ألبرتس ب، جونسون أ، لويس ج، مورغان د، راف م، روبرتس ك، والتر ب (2014). البيولوجيا الجزيئية للخلية، الطبعة السادسة . جارلاند ساينس. الصفحات 1-10 . ISBN  978-1-317-56375-4.
  2. ↑ غانون ، ف. (فبراير 2002). "علم الأحياء الجزيئي - ما أهمية الاسم؟" . تقارير EMBO . 3 (2): 101. doi : 10.1093/embo-reports/kvf039 . PMC 1083977. PMID 11839687 .  
  3. ↑ "علم الأحياء الجزيئي - أحدث الأبحاث والأخبار | نيتشر" . nature.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 7 نوفمبر 2021 .
  4. ↑ أستبري، دبليو تي (يونيو 1961). "علم الأحياء الجزيئي أم علم الأحياء فوق البنيوي ؟ " . مجلة نيتشر . 190 (4781): 1124. رمز Bibcode : 1961Natur.190.1124A . doi : 10.1038/1901124a0 . ISSN 1476-4687 . PMID 13684868. S2CID 4172248 .    
  5. 1 2 "روزاليند فرانكلين: مساهمة حاسمة" . nature.com .
  6. 1 2 3 4 فيرما، ب.س. (2004). بيولوجيا الخلية، وعلم الوراثة، والبيولوجيا الجزيئية، والتطور، وعلم البيئة . دار نشر إس تشاند وشركاه. رقم ISBN 81-219-2442-1. OCLC 1045495545 . 
  7. ↑ مورانج، ميشيل (2016). "تاريخ البيولوجيا الجزيئية". موسوعة علوم الحياة . ص 1-8 . doi : 10.1002/9780470015902.a0003079.pub3 . ISBN  978-0-470-01617-6.
  8. ↑ بيلو، إليزابيث أ.؛ شوين، ديبرا أ. (1996-12-01). "علم الأحياء الجزيئي والطب: مدخل أساسي للطبيب السريري" . التخدير . 85 ( 6): 1462-1478 . doi : 10.1097/00000542-199612000-00029 . ISSN 0003-3022 . PMID 8968195. S2CID 29581630 .   
  9. ↑ "العلاج الجيني" . www.genome.gov . تم الاطلاع عليه بتاريخ 30-12-2025 .
  10. ↑ باينوم، ويليام (فبراير 1999). "تاريخ البيولوجيا الجزيئية" . مجلة نيتشر الطبية . 5 (2): 140. doi : 10.1038/5498 . ISSN 1546-170X . 
  11. ↑ مورانج، ميشيل (يونيو 2021). تاريخ علم الأحياء . مطبعة جامعة برينستون. ISBN 978-0-691-18878-2. OCLC 1184123419 . 
  12. ↑ فيلدز، ستانلي (28 أغسطس/آب 2001). "التفاعل بين علم الأحياء والتكنولوجيا" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 98 (18): 10051-10054 . doi : 10.1073/pnas.191380098 . ISSN 0027-8424 . PMC 56913. PMID 11517346 .   
  13. ↑ إليس، تي إتش نويل؛ هوفر، جولي إم آي؛ تيمرمان-فوغان، غيل إم؛ كوين، كلاريس جيه؛ هيلينز، روجر بي. (نوفمبر 2011). "مندل، بعد 150 عامًا". اتجاهات في علوم النبات . 16 (11): 590-596 . Bibcode : 2011TPS....16..590E . doi : 10.1016/j.tplants.2011.06.006 . PMID 21775188 . 
  14. ↑ "12.3C: قانون مندل للانعزال" . نصوص بيولوجية ليبر . 12-07-2018 . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-11-2021 .
  15. ↑ "الوراثة المندلية" . Genome.gov . تم الاطلاع عليه بتاريخ 18-11-2021 .
  16. 1 2 براي، ل. (2008). "اكتشاف بنية ووظيفة الحمض النووي: واتسون وكريك" . مجلة نيتشر التعليمية . 1 (1): 100. تم الاسترجاع في 21-06-2024 .
  17. ↑ جورج وولف (2003). فريدريك ميشر: الرجل الذي اكتشف الحمض النووي . OCLC 907773747 . 
  18. ↑ ليفين، ب. أ. (1919). "بنية الحمض النووي للخميرة" . مجلة الكيمياء البيولوجية . 43 (2): 379-382 . doi : 10.1016/s0021-9258(18)86289-5 . ISSN 0021-9258 . 
  19. ↑ تشارغاف، إروين (يونيو 1950). " الخصوصية الكيميائية للأحماض النووية وآلية تحللها الأنزيمي". إكسبيرينتيا . 6 (6): 201-209 . doi : 10.1007/bf02173653 . PMID 15421335. S2CID 2522535 .  
  20. 1 2 واتسون، جيه دي ؛ كريك، إف إتش سي (أبريل 1953). "البنية الجزيئية للأحماض النووية: بنية حمض الديوكسي ريبوز النووي" . نيتشر . 171 ( 4356): 737-738 . Bibcode : 1953Natur.171..737W . doi : 10.1038/171737a0 . ISSN 1476-4687 . PMID 13054692. S2CID 4253007 .   
  21. ↑ كريك، إف إتش سي؛ بارنيت، ليزلي؛ برينر، إس؛ واتس-توبين، آر جيه (1961). "الطبيعة العامة للشفرة الوراثية للبروتينات". مجلة نيتشر . 192 (4809). سبرينغر ساينس آند بيزنس ميديا ​​ذ.م.م: 1227-1232 . رمز Bibcode : 1961Natur.192.1227C . doi : 10.1038/1921227a0 . ISSN 0028-0836 . PMID 13882203. S2CID 4276146 .   
  22. ↑ إبستين، ر.هـ؛ بول، أ.؛ شتاينبرغ، س.م.؛ كيلينبرغر، إ.؛ بوي دي لا تور، إ.؛ وآخرون . (1963-01-01). "دراسات فيزيولوجية للطفرات المميتة المشروطة لبكتيريا العاثية T4D". ندوات كولد سبرينغ هاربور حول البيولوجيا الكمية . 28. مختبر كولد سبرينغ هاربور: 375-394 . doi : 10.1101/sqb.1963.028.01.053 . ISSN 0091-7451 .  
  23. ↑ إدغار، بوب (1 أكتوبر 2004). "جينوم العاثية T4" . علم الوراثة . 168 (2 ) : 575-582 . doi : 10.1093/genetics/168.2.575 . ISSN 1943-2631 . PMC 1448817. PMID 15514035 .   
  24. ↑ رافينهال، مات؛ شكونكا، نيفيس؛ لاسال، فلورنت؛ ديسيموز، كريستوف (مايو 2015). "استنتاج النقل الأفقي للجينات" . مجلة PLOS لعلم الأحياء الحاسوبي . 11 (5) e1004095. رمز Bibcode : 2015PLSCB..11E4095R . doi : 10.1371/journal.pcbi.1004095 . PMC 4462595. PMID 26020646 .  
  25. ↑ مادجان، إم تي، وآخرون (2018). بيولوجيا الكائنات الدقيقة لبروك (الطبعة الخامسة عشرة). بيرسون.
  26. ↑ أفيري، أوزوالد ت.؛ كولين م. ماكلويد؛ ماكلين مكارتي (1944-02-01). "دراسات حول الطبيعة الكيميائية للمادة المحفزة لتحول أنواع المكورات الرئوية: تحفيز التحول بواسطة جزء من الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين معزول من المكورات الرئوية من النوع الثالث" . مجلة الطب التجريبي . 79 (2): 137-158 . doi : 10.1084/jem.79.2.137 . PMC 2135445. PMID 19871359 .  
  27. ^ فروتون (1999)، الصفحات من 438 إلى 440
  28. ↑ جون كيرنز إلى هوراس ف. جودسون، في كتاب اليوم الثامن من الخلق: صناع الثورة في علم الأحياء (1979). دار تاتشستون للنشر، رقم ISBN 0-671-22540-5الطبعة الثانية: مطبعة مختبر كولد سبرينغ هاربور، 1996، غلاف ورقي: ISBN 0-87969-478-5.
  29. ↑ موجيري، سهيل؛ إسبانر، سيباستيان؛ موهل، ستيفن؛ جانغ، هونغجي؛ باي، ألبرت يوهان؛ غريغور، إنغو؛ غلامي، عزام؛ غلامي، عزام؛ إندرلين، يورغ (2021-06-01). "المجهر السريع متعدد المستويات ذو التباين الطوري يكشف عن ديناميكيات الالتواء في حركة السوط" . مجلة البصريات الطبية الحيوية السريعة . 12 (6): 3169-3180 . doi : 10.1364/BOE.419099 . ISSN 2156-7085 . PMC 8221972. PMID 34221652 .   
  30. ↑ فان وارمردام، ت. "مورد مختبر البيولوجيا الجزيئية" . Yourbiohelper.com . مؤرشف من الأصل في 29 ديسمبر 2021.
  31. ↑ فان وارمردام، ت. "مورد مختبر البيولوجيا الجزيئية" . Yourbiohelper.com . مؤرشف من الأصل في 29 ديسمبر 2021.
  32. ^ لوديش إتش، بيرك أ، زيبورسكي إس إل، ماتسودايرا بي، بالتيمور د، دارنيل جي (2000). بيولوجيا الخلية الجزيئية ( الطبعة الرابعة). نيويورك: الكتب العلمية الأمريكية. رقم ISBN  978-0-7167-3136-8.
  33. ↑ بيرغ، جيريمي (2002). الكيمياء الحيوية . تيموتشكو، جون ل.؛ ستراير، لوبيرت ( الطبعة الخامسة). نيويورك: دبليو إتش فريمان. ISBN  0-7167-3051-0. OCLC 48055706 . 
  34. ↑ مرجع، الصفحة الرئيسية لعلم الوراثة. "ساعدني على فهم علم الوراثة" . مرجع الصفحة الرئيسية لعلم الوراثة . تم الاطلاع عليه بتاريخ 31 ديسمبر 2016 .
  35. 1 2 تيان جيه، محرر. (2013). التصوير الجزيئي: الأساسيات والتطبيقات . سبرينغر-فيرلاغ برلين وهايدلبرغ المحدودة وشركاه. ص 542. ISBN  978-3-642-34303-2تم الاطلاع عليه بتاريخ 2019-07-08 .
  36. ↑ "أسس الاستنساخ الجزيئي - الماضي والحاضر والمستقبل | NEB" . www.neb.com . تاريخ الاسترجاع: 25 نوفمبر 2021 .
  37. ↑ "أسس الاستنساخ الجزيئي - الماضي والحاضر والمستقبل | NEB" . www.neb.com . تاريخ الاسترجاع: 4 نوفمبر 2021 .
  38. ↑ ألبرتس ب، جونسون أ، لويس ج، راف م، روبرتس ك، والتر ب. عزل الحمض النووي واستنساخه وتسلسله . تم الاسترجاع في 31 ديسمبر 2016 .
  39. ^ ليسارد ، جوليان سي. (1 يناير 2013). “الاستنساخ الجزيئي”. الطرق المخبرية في علم الإنزيمات: الحمض النووي . المجلد. 529. ص 85 – 98. دوى : 10.1016 / B978-0-12-418687-3.00007-0 . رقم ISBN   978-0-12-418687-3ISSN 1557-7988 . PMID 24011038 .​  
  40. ↑ كوكيت سي، جلالبور إس إس، هوراكادلي بي جيه (2016). كتاب في التكنولوجيا الحيوية الصيدلانية . استنساخ التعبير. إلسيفير. ص 125. ISBN  978-81-312-3987-2تم الاطلاع عليه بتاريخ 2019-07-08 .
  41. ↑ لينسترا، جيه إيه (يوليو 1995). "تطبيقات تفاعل البوليميراز المتسلسل في علوم الحياة". علم الأحياء الخلوي والجزيئي (نويزي لو غران، فرنسا) . 41 (5): 603-614 . الرقم الدولي الموحد للدوريات 0145-5680 . الرقم المرجعي في PubMed 7580841 .  
  42. ↑ "تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)" . المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية . المكتبة الوطنية الأمريكية للطب . تم الاطلاع عليه بتاريخ 31 ديسمبر 2016 .
  43. ↑ "صحيفة حقائق تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)" . المعهد الوطني لأبحاث الجينوم البشري (NHGRI) . تم الاطلاع عليه بتاريخ 31 ديسمبر 2016 .
  44. 1 2 لي، بي يون؛ كوستومبرادو، جون؛ هسو، تشيه يوان؛ كيم، يونغ هون (2012-04-20). " الترحيل الكهربائي على هلام الأغاروز لفصل شظايا الحمض النووي" . مجلة التجارب المصورة . 62 (62): 3923. Bibcode : 2012JVExp..62.3923L . doi : 10.3791/3923 . ISSN 1940-087X . PMC 4846332. PMID 22546956 .   
  45. ↑ لي بي واي، كوستومبرادو جيه، هسو سي واي، كيم واي إتش (أبريل 2012). "الترحيل الكهربائي على هلام الأغاروز لفصل شظايا الحمض النووي" . مجلة التجارب المصورة . 62 (62). Bibcode : 2012JVExp..62.3923L . doi : 10.3791/3923 . PMC 4846332. PMID 22546956 .  
  46. 1 2 3 4 5 6 برادفورد، ماريون م. (مايو 1976). "طريقة سريعة وحساسة لتحديد كميات البروتين بالمايكروغرام باستخدام مبدأ ارتباط البروتين بالصبغة". الكيمياء الحيوية التحليلية . 72 ( 1-2 ): 248-254 . Bibcode : 1976AnBio..72..248B . doi : 10.1016/0003-2697(76)90527-3 . PMID 942051. S2CID 4359292 .  
  47. 1 2 3 "تحديد البروتين بطريقة برادفورد" . www.ruf.rice.edu . تاريخ الاسترجاع: 2021-11-08 .
  48. ↑ توماس، ب. س. (سبتمبر 1980). "تهجين الحمض النووي الريبوزي المتفكك وشظايا الحمض النووي الصغيرة المنقولة إلى النيتروسليلوز" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 77 (9): 5201-5205 . Bibcode : 1980PNAS...77.5201T . doi : 10.1073/pnas.77.9.5201 . PMC 350025. PMID 6159641 .  
  49. ↑ براون، تيري (1993). "التلطيخ الجنوبي". البروتوكولات الحالية في علم المناعة . 6 : الوحدة 10.6أ. doi : 10.1002/0471142735.im1006as06 . PMID 18432697 . 
  50. ^ جوزيفسن، كنود. نيلسن، هنريك (2011). “تحليل النشاف الشمالي”. الحمض النووي الريبي . طرق في البيولوجيا الجزيئية. المجلد. 703. ص 87 – 105. دوى : 10.1007 / 978-1-59745-248-9_7 . رقم ISBN   978-1-58829-913-0PMID 21125485​​ 
  51. ↑ هي إس إل، غرين آر (1 يناير 2013). "التلطيخ الشمالي". طرق المختبر في علم الإنزيمات: الحمض النووي الريبي . المجلد 530. الصفحات 75-87 . doi : 10.1016/B978-0-12-420037-1.00003-8 . ISBN   978-0-12-420037-1. PMC 4287216 . PMID 24034315 .  
  52. 1 2 محمود ت، يانغ ب.س. (سبتمبر 2012). "التلطيخ الغربي: التقنية، والنظرية، وحل المشكلات" . مجلة أمريكا الشمالية للعلوم الطبية . 4 (9): 429-34 . doi : 10.4103/1947-2714.100998 (غير نشط في 27 يونيو 2026). PMC 3456489. PMID 23050259 .  {{cite journal}}: صيانة CS1: رقم التعريف الرقمي غير نشط اعتبارًا من يونيو 2026 ( رابط )
  53. ↑ "Western blot | تعلم العلوم على Scitable" . www.nature.com . تم الاطلاع عليه بتاريخ 25 نوفمبر 2021 .
  54. ↑ كورين بي تي، سكوفيلد آر إتش (أبريل 2006). "التلطيخ الغربي". طرق . 38 (4): 283-293 . رمز Bibcode : 2006MCME...38..283K . doi : 10.1016/j.ymeth.2005.11.007 . PMID 16483794 . 
  55. ↑ توماس إس، ثيرومالابورا إن، كروسلي إي سي، إسماعيل إن، ووكر دي إتش (يونيو 2009). "تعديلات البروتين المستضدي في الإيرليخيا" . علم مناعة الطفيليات . 31 (6): 296-303 . doi : 10.1111/j.1365-3024.2009.01099.x . PMC 2731653. PMID 19493209 .  
  56. ↑ "المصفوفات الدقيقة" . المركز الوطني لمعلومات التكنولوجيا الحيوية . المكتبة الوطنية الأمريكية للطب . تم الاطلاع عليه بتاريخ 31 ديسمبر 2016 .
  57. ↑ بومغارنر، روجر (2013). " نظرة عامة على المصفوفات الدقيقة للحمض النووي: أنواعها وتطبيقاتها ومستقبلها" . البروتوكولات الحالية في البيولوجيا الجزيئية . 101 : الوحدة 22.1. doi : 10.1002/0471142727.mb2201s101 . PMC 4011503. PMID 23288464 .  
  58. ↑ جوفينداراجان ر، دورايان ج، كاليابان ك، بالانيسامي م (أغسطس 2012). "المصفوفات الدقيقة وتطبيقاتها" . مجلة الصيدلة والعلوم الحيوية المساعدة . 4 (ملحق 2 ) : S310-2. doi : 10.4103/0975-7406.100283 . PMC 3467903. PMID 23066278 .  
  59. ↑ تاركا، أ. ل.، روميرو، ر.، دراغيتشي، س. (أغسطس 2006). "تحليل تجارب المصفوفات الدقيقة لتوصيف التعبير الجيني" . المجلة الأمريكية لأمراض النساء والتوليد . 195 (2): 373-388 . doi : 10.1016/j.ajog.2006.07.001 . PMC 2435252. PMID 16890548 .  
  60. ↑ تشنغ إل، تشانغ دي واي، محرران. (2008). علم الأمراض الوراثية الجزيئية . توتوا، نيوجيرسي: هيومانا. ص 96. ISBN  978-1-59745-405-6تم الاطلاع عليه بتاريخ 31 ديسمبر 2016 .
  61. ↑ ليونارد دي جي (2016). علم الأمراض الجزيئي في الممارسة السريرية . سبرينغر. ص 31. ISBN  978-3-319-19674-9تم الاطلاع عليه بتاريخ 31 ديسمبر 2016 .
  62. ↑ تيان جيه، محرر. (2013). التصوير الجزيئي: الأساسيات والتطبيقات . سبرينغر-فيرلاغ برلين وهايدلبرغ المحدودة وشركاه. الصفحات 550، 552. ISBN  978-3-642-34303-2تم الاطلاع عليه بتاريخ 2019-07-08 .

للمزيد من القراءة

  • شعار ويكيميديا ​​كومنزوسائط متعلقة بالبيولوجيا الجزيئية على ويكيميديا ​​كومنز