لقاح الحمض النووي

📅 آخر تحديث: ٣١ يوليو ٢٠٢٦
✍️ نُشر في: ٣١ يوليو ٢٠٢٦
📷 يحتوي على 5 صور
الموسوعة الحرة

صناعة لقاح الحمض النووي

لقاح الحمض النووي هو نوع من اللقاحات التي تنقل تسلسل الحمض النووي المشفر لمستضد معين إلى خلايا الكائن الحي كآلية لتحفيز الاستجابة المناعية. [ 1 ] [ 2 ]

تعمل لقاحات الحمض النووي عن طريق حقن بلازميد مُهندس وراثيًا يحتوي على تسلسل الحمض النووي الذي يُشفّر المستضد (المستضدات) المطلوب استهدافه باستجابة مناعية، فتقوم الخلايا بإنتاج المستضد مباشرةً، مما يُسبب استجابة مناعية وقائية . [ 3 ] تتميز لقاحات الحمض النووي بمزايا نظرية مقارنةً باللقاحات التقليدية، بما في ذلك "القدرة على تحفيز نطاق أوسع من أنواع الاستجابة المناعية". [ 4 ] تم اختبار العديد من لقاحات الحمض النووي للاستخدام البيطري . [ 3 ] في بعض الحالات، تم الحصول على حماية من الأمراض لدى الحيوانات، وفي حالات أخرى لم يتم الحصول عليها. [ 3 ] لا تزال الأبحاث جارية حول هذا النهج لعلاج الأمراض الفيروسية والبكتيرية والطفيليات لدى البشر، وكذلك السرطانات. [ 4 ] في أغسطس 2021، منحت السلطات الهندية موافقة طارئة للقاح ZyCoV-D . وهو أول لقاح حمض نووي مُعتمد للاستخدام البشري، وقد طوّرته شركة كاديلا للرعاية الصحية . [ 5 ]

تاريخ

تحتوي اللقاحات التقليدية إما على مستضدات محددة من مسببات الأمراض، أو على فيروسات مُضعفة تُحفز استجابة مناعية في الكائن المُلقح. تُعد لقاحات الحمض النووي (DNA) من اللقاحات الجينية ، لأنها تحتوي على معلومات وراثية (DNA أو RNA) تُشفّر إنتاج المستضد على مستوى الخلية ( تخليق البروتين ) . تحتوي لقاحات الحمض النووي على حمض نووي يُشفّر مستضدات محددة من مسببات الأمراض. يُحقن الحمض النووي في الجسم، فتمتصه الخلايا، التي تُجري عملياتها الأيضية الطبيعية لتخليق البروتينات بناءً على الشفرة الوراثية الموجودة في البلازميد الذي امتصته. ولأن هذه البروتينات تحتوي على مناطق من تسلسل الأحماض الأمينية المميزة للبكتيريا أو الفيروسات، فإنها تُعتبر غريبة، وعندما تُعالجها الخلايا المضيفة وتعرضها على سطحها، يُنبه الجهاز المناعي، مما يُحفز الاستجابات المناعية. [ 6 ] [ 7 ] بدلاً من ذلك، يُمكن تغليف الحمض النووي ببروتين لتسهيل دخوله إلى الخلية. إذا تم تضمين بروتين الغلاف هذا في الحمض النووي، فإن اللقاح الناتج يمكن أن يجمع بين فعالية اللقاح الحي دون مخاطر الانتكاس.

في عام 1983، ابتكر إنزو باوليتي ودينيس بانيكالي في إدارة الصحة بنيويورك استراتيجية لإنتاج لقاحات الحمض النووي المؤتلف باستخدام الهندسة الوراثية لتحويل لقاح الجدري العادي إلى لقاحات قد تكون قادرة على الوقاية من أمراض أخرى. [ 8 ] قاموا بتعديل الحمض النووي لفيروس جدري البقر عن طريق إدخال جين من فيروسات أخرى (وهي فيروس الهربس البسيط ، وفيروس التهاب الكبد ب، وفيروس الإنفلونزا ). [ 9 ] [ 10 ] في عام 1993، أثبت جيفري أولمر وزملاؤه في مختبرات أبحاث ميرك أن الحقن المباشر للفئران ببلازميد الحمض النووي الذي يشفر مستضد الإنفلونزا يحمي الحيوانات من العدوى التجريبية اللاحقة بفيروس الإنفلونزا. [ 11 ] في عام 2016، بدأ اختبار لقاح الحمض النووي لفيروس زيكا على البشر في المعاهد الوطنية للصحة . كان من المخطط أن تشمل الدراسة ما يصل إلى 120 شخصًا تتراوح أعمارهم بين 18 و35 عامًا. وبشكل منفصل، بدأت شركتا إينوفيو للأدوية وجين وان لعلوم الحياة اختبارات لقاح DNA مختلف ضد فيروس زيكا في ميامي. يُحقن لقاح المعاهد الوطنية للصحة في أعلى الذراع تحت ضغط عالٍ. ولا يزال تصنيع اللقاحات بكميات كبيرة غير محسوم حتى أغسطس 2016. [ 12 ] وتجري حاليًا تجارب سريرية للقاحات DNA للوقاية من فيروس نقص المناعة البشرية. [ 13 ]

في أغسطس 2021، منحت السلطات الهندية موافقة طارئة للقاح ZyCoV-D. وهو أول لقاح DNA ضد كوفيد-19 ، تم تطويره بواسطة شركة كاديلا للرعاية الصحية . [ 5 ]

التطبيقات

اعتبارًا من عام 2021لم تتم الموافقة على أي لقاحات تعتمد على الحمض النووي للاستخدام البشري في الولايات المتحدة. وقد أظهرت تجارب قليلة استجابة مناعية قوية بما يكفي للحماية من المرض، ولا تزال فائدة هذه التقنية بحاجة إلى إثبات على البشر.

تمت الموافقة على لقاح بيطري قائم على الحمض النووي لحماية الخيول من فيروس غرب النيل. [ 14 ] كما تم اختبار لقاح آخر لفيروس غرب النيل بنجاح على طيور أبو الحناء الأمريكية. [ 15 ]

يجري أيضاً دراسة التحصين بالحمض النووي كوسيلة لتطوير أمصال مضادة للسموم. [ 1 ] ويمكن استخدام التحصين بالحمض النووي كمنصة تكنولوجية لتحفيز إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة. [ 2 ]

المزايا

  • لا يوجد خطر للإصابة بالعدوى [ 7 ]
  • عرض المستضد بواسطة جزيئات MHC من الفئة الأولى والفئة الثانية [ 7 ]
  • توجيه استجابة الخلايا التائية نحو النوع 1 أو النوع 2 [ 7 ]
  • تركز الاستجابة المناعية على المستضد المطلوب
  • سهولة التطوير والإنتاج [ 7 ]
  • استقرار للتخزين والشحن
  • فعالية التكلفة
  • يغني عن الحاجة إلى تخليق الببتيد، والتعبير عن البروتينات المؤتلفة وتنقيتها، واستخدام المواد المساعدة السامة [ 16 ]
  • استمرار وجود المستضد على المدى الطويل [ 6 ]
  • يضمن التعبير في الجسم الحي أن البروتين يشبه إلى حد كبير بنية حقيقيات النوى الطبيعية، مع التعديلات المصاحبة لما بعد الترجمة [ 6 ].

العيوب

  • يقتصر على المستضدات البروتينية (غير مفيد للمستضدات غير البروتينية مثل عديدات السكاريد البكتيرية)
  • إمكانية المعالجة غير النمطية للبروتينات البكتيرية والطفيليات [ 7 ]
  • الإمكانات عند استخدام رذاذ الأنف لإعطاء جزيئات الحمض النووي البلازميدي النانوية لنقل الجينات إلى الخلايا غير المستهدفة، مثل خلايا الدماغ [ 17 ]
  • التلوث المتبادل عند تصنيع أنواع مختلفة من اللقاحات الحية في نفس المنشأة

ناقلات البلازميد

تصميم متجهي

تُحفز لقاحات الحمض النووي أفضل استجابة مناعية عند استخدام نواقل عالية التعبير. هذه النواقل عبارة عن بلازميدات تتكون عادةً من مُحفز فيروسي قوي لتوجيه عملية النسخ والترجمة داخل الجسم الحي للجين (أو الحمض النووي المُكمل ) المطلوب. [ 18 ] قد يُضاف الإنترون A أحيانًا لتحسين استقرار الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA ) وبالتالي زيادة التعبير البروتيني. [ 19 ] تحتوي البلازميدات أيضًا على إشارة قوية لإنهاء النسخ / إضافة ذيل عديد الأدينين ، مثل تسلسلات إضافة ذيل عديد الأدينين لهرمون النمو البقري أو بيتا غلوبولين الأرنب. [ 6 ] [ 7 ] [ 20 ] تُصمم النواقل متعددة الجينات (التي تحتوي على جينات متعددة مطلوبة) أحيانًا للتعبير عن أكثر من مُستضد واحد، أو للتعبير عن مُستضد وبروتين مُحفز للمناعة. [ 21 ]

نظرًا لأن البلازميد - الذي يحمل شفرة وراثية صغيرة نسبيًا تصل إلى حوالي 200 ألف زوج قاعدي - هو "الناقل" الذي يُعبَّر من خلاله عن المستضد، فإن تحسين تصميم الناقل لتحقيق أقصى تعبير بروتيني أمرٌ بالغ الأهمية. [ 21 ] إحدى طرق تعزيز التعبير البروتيني هي تحسين استخدام الكودونات في الحمض النووي الريبوزي الرسول (mRNA) الممرض للخلايا حقيقية النواة . غالبًا ما تحتوي مسببات الأمراض على محتوى AT مختلف عن الأنواع المستهدفة، لذا فإن تغيير تسلسل جين المستضد ليعكس الكودونات الأكثر شيوعًا في الأنواع المستهدفة قد يُحسِّن من تعبيره. [ 22 ]  

من الاعتبارات الأخرى اختيار المحفز . كان محفز SV40 يُستخدم تقليديًا حتى أظهرت الأبحاث أن النواقل التي يُحفزها محفز فيروس ساركوما روس (RSV) تتمتع بمعدلات تعبير أعلى بكثير. [ 6 ] ومؤخرًا، تم تعزيز التعبير والاستجابة المناعية في النماذج التجريبية باستخدام محفز الفيروس المضخم للخلايا (CMV) الفوري المبكر، وعنصر نسخ فيروسي قهقري يعمل في نفس الموقع . [ 23 ] تشمل التعديلات الإضافية لتحسين معدلات التعبير إدخال تسلسلات مُحسِّنة، وإنترونات اصطناعية ، وتسلسلات القائد الثلاثي للفيروس الغدي (TPL)، وتعديلات على تسلسلات إضافة ذيل عديد الأدينين وإنهاء النسخ. [ 6 ] ومن أمثلة بلازميدات لقاح الحمض النووي pVAC، الذي يستخدم محفز SV40 .

تُعدّ ظواهر عدم الاستقرار البنيوي مصدر قلق بالغ في تصنيع البلازميدات، والتطعيم بالحمض النووي، والعلاج الجيني. [ 24 ] قد تُشارك المناطق الإضافية المُلحقة بالهيكل الأساسي للبلازميد في طيف واسع من ظواهر عدم الاستقرار البنيوي. تشمل العوامل المُحفزة المعروفة لعدم الاستقرار الجيني التكرارات المباشرة والمعكوسة والمتتالية، والتي تظهر بوضوح في العديد من نواقل الاستنساخ والتعبير المتوفرة تجاريًا. لذلك، فإن تقليل أو إزالة تسلسلات الهيكل الأساسي غير المشفرة بشكل كامل من شأنه أن يُقلل بشكل ملحوظ من احتمالية حدوث مثل هذه الأحداث، وبالتالي يُقلل من قدرة البلازميد على إعادة التركيب الجيني. [ 25 ]

آلية عمل البلازميدات

بمجرد أن يندمج البلازميد في نواة الخلية المُعدَّلة وراثيًا، فإنه يُشفِّر سلسلة ببتيدية لمستضد غريب. تعرض الخلية على سطحها المستضد الغريب مع جزيئات معقد التوافق النسيجي الرئيسي (MHC) من الفئتين الأولى والثانية. ثم تنتقل الخلية العارضة للمستضد إلى العقد اللمفاوية، حيث تعرض ببتيد المستضد وجزيء التحفيز المشترك، مُرسلةً إشارات إلى الخلايا التائية، مما يُحفز الاستجابة المناعية. [ 26 ]

تصميم النشرة الداخلية للقاح

يمكن توجيه المستضدات إلى مختلف الحجيرات الخلوية لتحسين استجابات الأجسام المضادة أو الخلايا التائية السامة. وتُعد المستضدات المفرزة أو المرتبطة بالغشاء البلازمي أكثر فعالية في تحفيز استجابات الأجسام المضادة من المستضدات السيتوبلازمية ، بينما يمكن تحسين استجابات الخلايا التائية السامة عن طريق توجيه المستضدات نحو التحلل السيتوبلازمي ودخولها لاحقًا إلى مسار معقد التوافق النسيجي الرئيسي (MHC) من الفئة الأولى. [ 7 ] ويتم ذلك عادةً بإضافة إشارات اليوبيكويتين في الطرف الأميني . [ 27 ] [ 28 ] [ 29 ]

يمكن أن يؤثر شكل البروتين أيضًا على استجابات الأجسام المضادة. فالبنى "المنظمة" (مثل الجسيمات الفيروسية) أكثر فعالية من البنى غير المنظمة. [ 30 ] كما أن سلاسل الجينات المصغرة (أو محددات المستضد من الفئة الأولى من معقد التوافق النسيجي الرئيسي ) من مسببات الأمراض المختلفة تحفز استجابات الخلايا التائية السامة لبعض مسببات الأمراض، خاصةً إذا تضمنت محدد مستضد الخلايا التائية المساعدة. [ 7 ]

توصيل

تتشابه تقنيات لقاح الحمض النووي وتقنيات العلاج الجيني.

تم إدخال لقاحات الحمض النووي إلى أنسجة الحيوانات عبر طرق متعددة. في عام 1999، كانت الطريقتان الأكثر شيوعًا هما حقن الحمض النووي في محلول ملحي : إما باستخدام إبرة تحت الجلد عادية، أو باستخدام مسدس الجينات . [ 31 ] وقد تم توثيق العديد من التقنيات الأخرى خلال السنوات اللاحقة.

حقنة محلول ملحي

يُجرى حقن المحلول الملحي عادةً عن طريق الحقن العضلي في العضلات الهيكلية ، أو عن طريق الحقن داخل الأدمة، لإيصال الحمض النووي إلى الفراغات خارج الخلوية. ويمكن تسهيل ذلك إما بـ: 1) التحفيز الكهربائي ؛ [ 32 ] 2) إتلاف ألياف العضلات مؤقتًا باستخدام سموم عضلية مثل البوبيفاكايين ؛ أو 3) استخدام محاليل مفرطة التوتر من المحلول الملحي أو السكروز . [ 6 ] وتتأثر الاستجابات المناعية لهذه الطريقة بعوامل تشمل نوع الإبرة، [ 16 ] ومحاذاتها، وسرعة الحقن، وحجم الحقن، ونوع العضلة، وعمر المتلقي وجنسه وحالته الصحية. [ 6 ]

مسدس الجينات

تعمل تقنية توصيل الجينات بالمسدس على تسريع نقل الحمض النووي البلازميدي (pDNA) الممتص على جزيئات الذهب أو التنجستن الدقيقة إلى الخلايا المستهدفة، باستخدام الهيليوم المضغوط كمسرع. [ 6 ] [ 21 ]

توصيل عبر سطح الغشاء المخاطي

شملت البدائل تقطير الحمض النووي العاري على شكل رذاذ على الأسطح المخاطية ، مثل الغشاء المخاطي للأنف والرئة ، [ 21 ] والإعطاء الموضعي للحمض النووي البلازميدي للعين [ 33 ] والغشاء المخاطي المهبلي. [ 21 ] كما تم تحقيق توصيل الحمض النووي إلى الأسطح المخاطية باستخدام مستحضرات الحمض النووي الليبوزومية الكاتيونية ، [ 7 ] والكرات المجهرية القابلة للتحلل الحيوي ، [ 34 ] [ 21 ] والسالمونيلا المضعفة ، [ 35 ] ونواقل الشيغيلا أو الليستيريا للإعطاء عن طريق الفم للغشاء المخاطي المعوي ، [ 36 ] ونواقل الفيروسات الغدية المؤتلفة. [ 21 ]

مركبة بوليمرية

استُخدم ناقل هجين مُكوّن من خلايا بكتيرية وبوليمرات اصطناعية لتوصيل لقاح الحمض النووي. يعمل لبّ داخلي من بكتيريا الإشريكية القولونية وغلاف خارجي من بولي (بيتا-أمينو إستر) بتناغم لزيادة الكفاءة من خلال معالجة العوائق المرتبطة بتوصيل الجينات إلى الخلايا العارضة للمستضد، والتي تشمل الامتصاص الخلوي والابتلاع، والهروب من الجسيمات البلعمية ، وتركيز الحمولة داخل الخلايا. وقد وُجد أن الناقل الهجين، عند اختباره على الفئران، يحفز الاستجابة المناعية. [ 37 ] [ 38 ]

التطعيم ضد فيروس نقص المناعة البشرية

يُعدّ التطعيم باستخدام مكتبة التعبير الجيني (ELI) نهجًا آخر للتطعيم بالحمض النووي. وباستخدام هذه التقنية، يُمكن إيصال جميع جينات العامل الممرض دفعةً واحدة، وهو ما قد يكون مفيدًا للعوامل الممرضة التي يصعب إضعافها أو استزراعها. [ 6 ] يُمكن استخدام ELI لتحديد الجينات التي تُحفّز استجابةً مناعيةً وقائية. وقد جُرّب ذلك على الميكوبلازما الرئوية ، وهي عامل ممرض يصيب رئة الفئران ويتميز بصغر حجم جينومه نسبيًا . حتى مكتبات التعبير الجيني الجزئية قادرة على تحفيز الحماية من الإصابة اللاحقة. [ 39 ]

الجرعة

تُحدد طريقة الإيصال الجرعة اللازمة لتحفيز استجابة مناعية فعّالة. تتطلب الحقن بالمحلول الملحي كميات متفاوتة من الحمض النووي، تتراوح بين 10  ميكروغرام و1  ملليغرام، بينما تتطلب الحقن باستخدام مسدس الجينات كميات أقل بمقدار 100 إلى 1000 مرة. [ 40 ] عمومًا، تتراوح الكمية المطلوبة بين 0.2  و20 ميكروغرام، على الرغم من الإبلاغ عن  كميات منخفضة تصل إلى 16 نانوغرام. [ 6 ] تختلف هذه الكميات باختلاف الأنواع. فالفئران، على سبيل المثال، تحتاج إلى حمض نووي أقل بحوالي 10 مرات من الرئيسيات . [ 7 ] تتطلب الحقن بالمحلول الملحي كمية أكبر من الحمض النووي لأن الحمض النووي يُوصل إلى الفراغات خارج الخلوية للنسيج المستهدف (عادةً العضلات)، حيث يتعين عليه التغلب على حواجز فيزيائية (مثل الصفيحة القاعدية وكميات كبيرة من النسيج الضام ) قبل أن تمتصه الخلايا، بينما تدفع الحقن باستخدام مسدس الجينات الحمض النووي مباشرةً إلى داخل الخلايا، مما يقلل من الهدر. [ 6 ] [ 7 ] 

الاستجابة المناعية

استجابات الخلايا التائية المساعدة

يحفز عرض المستضد الخلايا التائية لتصبح إما خلايا CD8+ سامة أو خلايا CD4+ مساعدة. تهاجم الخلايا السامة مباشرةً الخلايا الأخرى التي تحمل جزيئات غريبة أو غير طبيعية على أسطحها. أما الخلايا التائية المساعدة، أو خلايا Th، فتنسق الاستجابات المناعية من خلال التواصل مع الخلايا الأخرى. في معظم الحالات، لا تتعرف الخلايا التائية على المستضد إلا إذا كان محمولًا على سطح الخلية بواسطة أحد جزيئات معقد التوافق النسيجي الرئيسي (MHC) الخاص بالجسم.

يمكن للتطعيم بالحمض النووي أن يُحفز استجابات متعددة للخلايا التائية المساعدة ، بما في ذلك تكاثر الخلايا اللمفاوية وإنتاج مجموعة متنوعة من أنماط السيتوكينات . ومن أهم مزايا لقاحات الحمض النووي سهولة تعديلها لتوجيه نوع مساعدة الخلايا التائية نحو استجابة TH1 أو TH2. [ 41 ] ولكل نوع أنماط مميزة من التعبير عن اللمفوكينات والكيموكينات، وأنواع محددة من الغلوبولينات المناعية ، وأنماط حركة الخلايا اللمفاوية، وأنواع الاستجابات المناعية الفطرية .

أنواع أخرى من مساعدة الخلايا التائية

يتأثر نوع استجابة الخلايا التائية المساعدة بطريقة الإعطاء ونوع المستضد المُعبَّر عنه، بالإضافة إلى استهداف مختلف الأنسجة اللمفاوية. [ 6 ] [ 42 ] عمومًا، تميل الحقن بالإبرة الملحية (سواءً في العضل أو داخل الأدمة) إلى تحفيز استجابات TH1، بينما يُحفز إعطاء الجينات باستخدام المسدس الجيني استجابات TH2. [ 41 ] [ 42 ] ينطبق هذا على المستضدات داخل الخلايا والمستضدات المرتبطة بالغشاء البلازمي، ولكن ليس على المستضدات المُفرزة، التي يبدو أنها تُولد استجابات TH2، بغض النظر عن طريقة الإعطاء. [ 43 ]

بشكل عام، يكون نوع مساعدة الخلايا التائية المُستحثة مستقرًا بمرور الوقت، ولا يتغير عند التعرض للتحدي أو بعد التطعيمات اللاحقة التي من شأنها أن تُثير عادةً استجابة مناعية معاكسة في عينة غير مُحصّنة. [ 41 ] [ 42 ] ومع ذلك، قام مور وآخرون (1995) [ 18 ] بتحصين الفئران وتنشيطها باستخدام الحمض النووي البلازميدي الذي يُشفّر بروتين السيركومسبوروزويت لطفيلي الملاريا الفأري بلازموديوم يويلي (PyCSP)، ووجدوا أن استجابة TH2 الأولية قد تغيرت، بعد التنشيط، إلى استجابة TH1.

أساس أنواع مختلفة من مساعدة الخلايا التائية

لا يزال فهم كيفية عمل هذه الطرق المختلفة، وأشكال المستضدات المُعبر عنها، والأنماط المختلفة لمساعدة الخلايا التائية غير واضح. كان يُعتقد أن الكميات الكبيرة نسبيًا من الحمض النووي المستخدمة في الحقن العضلي هي المسؤولة عن تحفيز استجابات الخلايا التائية المساعدة من النوع الأول (TH1). ومع ذلك، تُظهر الأدلة عدم وجود اختلافات مرتبطة بالجرعة في نوع الخلايا التائية المساعدة. [ 41 ] يتحدد نوع مساعدة الخلايا التائية المُستحثة بحالة تمايز الخلايا العارضة للمستضد . يمكن للخلايا المتغصنة أن تتمايز لإفراز إنترلوكين-12 (الذي يدعم نمو خلايا TH1) أو إنترلوكين-4 (الذي يدعم استجابات خلايا TH2). [ 44 ] يتم ابتلاع الحمض النووي البلازميدي المحقون بالإبرة داخل الخلية المتغصنة، والتي تُحفز بعد ذلك على التمايز لإنتاج سيتوكين TH1 (إنترلوكين-12)، [ 45 ] بينما يقوم مسدس الجينات بقذف الحمض النووي مباشرة داخل الخلية، متجاوزًا بذلك تحفيز خلايا TH1.

الاستخدامات العملية للمساعدة في الخلايا التائية المستقطبة

يُعدّ استقطاب الخلايا التائية المساعدة مفيدًا في التأثير على الاستجابات التحسسية وأمراض المناعة الذاتية . في أمراض المناعة الذاتية، يتمثل الهدف في تحويل استجابة TH1 المدمرة للذات (وما يصاحبها من نشاط الخلايا التائية السامة) إلى استجابة TH2 غير مدمرة. وقد طُبّق هذا بنجاح في التحضير المسبق للمرض للحصول على نوع الاستجابة المطلوب في النماذج ما قبل السريرية [ 7 ] ، كما أنه ناجح إلى حد ما في تغيير الاستجابة لمرض قائم [ 46 ] .

استجابات الخلايا التائية السامة للخلايا

من مزايا لقاحات الحمض النووي قدرتها على تحفيز الخلايا اللمفاوية التائية السامة (CTL) دون المخاطر المصاحبة للقاحات الحية. ويمكن تحفيز استجابات الخلايا التائية السامة ضد محددات المستضدات المهيمنة والمتنحية [ 47 ] ، بالإضافة إلى محددات المستضدات الثانوية [ 34 ] ، بطريقة تحاكي العدوى الطبيعية . وقد يُثبت هذا فائدته كأداة لتقييم محددات المستضدات ودورها في توفير المناعة.

تتعرف الخلايا التائية السامة على ببتيدات صغيرة (8-10 أحماض أمينية ) مرتبطة بجزيئات معقد التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الأولى (MHC class I) . [ 48 ] تُشتق هذه الببتيدات من بروتينات سيتوبلازمية تتحلل وتُنقل إلى جزيء معقد التوافق النسيجي الرئيسي حديث التكوين داخل الشبكة الإندوبلازمية . [ 48 ] وبالتالي، فإن استهداف نواتج الجينات مباشرةً إلى الشبكة الإندوبلازمية (عن طريق إضافة تسلسل إشارة إدخال الشبكة الإندوبلازمية في الطرف الأميني ) من شأنه أن يعزز استجابات الخلايا التائية السامة. وقد تم إثبات ذلك بنجاح باستخدام فيروسات الوقس المُعاد تركيبها التي تُعبر عن بروتينات الإنفلونزا ، [ 48 ] ولكن ينبغي أن يكون هذا المبدأ قابلاً للتطبيق أيضًا على لقاحات الحمض النووي. وقد ثبت أن استهداف المستضدات للتحلل داخل الخلايا (وبالتالي دخولها إلى مسار معقد التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الأولى) عن طريق إضافة تسلسلات إشارة اليوبيكويتين ، أو طفرة تسلسلات إشارة أخرى، فعال في زيادة استجابات الخلايا التائية السامة. [ 28 ]

يمكن تعزيز استجابات الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا (CTL) عن طريق التلقيح المشترك بجزيئات محفزة مشتركة مثل B7-1 أو B7-2 للقاحات الحمض النووي ضد البروتين النووي للإنفلونزا، [ 47 ] [ 49 ] أو GM-CSF للقاحات الحمض النووي ضد نموذج الملاريا الفأرية P. yoelii . [ 50 ] وقد ثبت أن التلقيح المشترك بالبلازميدات التي تشفر الجزيئات المحفزة المشتركة IL-12 وTCA3 يزيد من نشاط الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا ضد مستضدات البروتين النووي لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول والإنفلونزا. [ 49 ] [ 51 ]

الاستجابة الخلطية (الأجسام المضادة)

رسم تخطيطي للأجسام المضادة والمستضدات

تتأثر استجابات الأجسام المضادة الناتجة عن التطعيمات بالحمض النووي بمتغيرات متعددة، بما في ذلك نوع المستضد؛ وموقع المستضد (أي داخل الخلايا مقابل إفرازه)؛ وعدد وتكرار وجرعة التحصين؛ وموقع وطريقة توصيل المستضد.

حركية استجابة الأجسام المضادة

قد تدوم الاستجابات المناعية الخلطية بعد حقنة واحدة من الحمض النووي لفترة أطول بكثير من تلك التي تدوم بعد حقنة واحدة من البروتين المُعاد تركيبه. فقد استمرت الاستجابات المناعية ضد بروتين غلاف فيروس التهاب الكبد ب (HBsAg) لمدة تصل إلى 74 أسبوعًا دون الحاجة إلى جرعة مُعززة ، كما ثبت استمرار الاستجابة الوقائية ضد الهيماغلوتينين الخاص بفيروس الإنفلونزا مدى الحياة في الفئران بعد حقنها بمسدس الجينات. [ 52 ] تهاجر الخلايا المُفرزة للأجسام المضادة (ASC) إلى نخاع العظم والطحال لإنتاج الأجسام المضادة على المدى الطويل، وتستقر هناك عادةً بعد عام واحد. [ 52 ]

يلخص الجدول 4 مقارنات استجابات الأجسام المضادة الناتجة عن العدوى الطبيعية (الفيروسية)، والتطعيم بالبروتين المؤتلف، والتطعيم بالحمض النووي البلازميدي. ترتفع استجابات الأجسام المضادة الناتجة عن الحمض النووي ببطء شديد مقارنةً بالعدوى الطبيعية أو التطعيم بالبروتين المؤتلف. قد يستغرق الأمر ما يصل إلى 12 أسبوعًا للوصول إلى ذروة تركيز الأجسام المضادة في الفئران، على الرغم من أن التنشيط يمكن أن يقلل هذه الفترة. يُعزى هذا على الأرجح إلى انخفاض مستويات المستضد المُعبَّر عنه على مدى عدة أسابيع، مما يدعم كلتا المرحلتين الأولية والثانوية لاستجابة الأجسام المضادة. تم حقن لقاح الحمض النووي الذي يُعبِّر عن بروتين الغلاف الصغير والمتوسط ​​لفيروس التهاب الكبد ب في البالغين المصابين بالتهاب الكبد المزمن. أدى اللقاح إلى إنتاج خلايا إنترفيرون غاما نوعية. كما تم تطوير خلايا تائية نوعية لمستضدات بروتينات الغلاف المتوسط. لم تكن الاستجابة المناعية للمرضى قوية بما يكفي للسيطرة على عدوى فيروس التهاب الكبد ب [ 53 ].

الجدول 4. مقارنة استجابات الأجسام المضادة المعتمدة على الخلايا التائية الناتجة عن التطعيمات بالحمض النووي، والتطعيمات البروتينية، والعدوى الفيروسية
 طريقة التحصين
لقاح الحمض النوويالبروتين المؤتلفعدوى طبيعية
كمية المستضد المحفزngميكروغرام؟ (نانوغرام - ميكروغرام)
مدة عرض المستضدعدة أسابيعأقل من أسبوع واحدعدة أسابيع
حركية استجابة الأجسام المضادةشروق بطيءارتفاع سريعارتفاع سريع
عدد عمليات التلقيح اللازمة للحصول على IgG عالي الألفة وهجرة الخلايا البلازمية المفرزة للأجسام المضادة إلى نخاع العظمواحداثنينواحد
النمط المصلي للأجسام المضادة (نماذج الفئران)معتمد على C' أو مستقل عن C'معتمد على C'مستقل عن C

بالإضافة إلى ذلك، فإن عيارات الأجسام المضادة النوعية الناتجة عن التطعيم بالحمض النووي أقل من تلك التي يتم الحصول عليها بعد التطعيم بالبروتين المؤتلف. ومع ذلك، تُظهر الأجسام المضادة الناتجة عن التطعيم بالحمض النووي ألفةً أكبر للمستضدات الأصلية مقارنةً بالأجسام المضادة الناتجة عن البروتين المؤتلف. بعبارة أخرى، يُحفز التطعيم بالحمض النووي استجابةً مناعيةً أفضل نوعيًا. يمكن تحفيز إنتاج الأجسام المضادة بعد تطعيم واحد بالحمض النووي، بينما يتطلب التطعيم بالبروتين المؤتلف عادةً جرعةً معززة. يمكن استخدام التطعيم بالحمض النووي لتوجيه نمط الاستجابة المناعية من نوع TH، وبالتالي تحديد النمط المصلي للأجسام المضادة، وهو أمر غير ممكن مع العدوى الطبيعية أو التطعيم بالبروتين المؤتلف. تُعد استجابات الأجسام المضادة الناتجة عن الحمض النووي مفيدةً كأداة تحضيرية. على سبيل المثال، يمكن إنتاج أجسام مضادة متعددة النسائل وأحادية النسيلة لاستخدامها ككواشف.

الأساس الآلي للاستجابات المناعية الناتجة عن الحمض النووي

آلية امتصاص الحمض النووي

عندما تم إثبات امتصاص الحمض النووي وتعبيره اللاحق لأول مرة في الخلايا العضلية الحية ، [ 54 ] اعتُقد أن هذه الخلايا فريدة من نوعها نظرًا لشبكتها الواسعة من الأنابيب المستعرضة. وباستخدام المجهر الإلكتروني ، اقتُرح أن امتصاص الحمض النووي يتم تسهيله بواسطة الكهيفات (أو الحفر غير المغلفة بالكلاثرين). [ 55 ] ومع ذلك، كشفت الأبحاث اللاحقة أن خلايا أخرى (مثل الخلايا الكيراتينية ، والخلايا الليفية، وخلايا لانغرهانس الظهارية ) يمكنها أيضًا استيعاب الحمض النووي. [ 46 ] [ 56 ] ولا تزال آلية امتصاص الحمض النووي غير معروفة.

تسود نظريتان: الأولى، أن امتصاص الحمض النووي في الجسم الحي يحدث بشكل غير نوعي، بطريقة مشابهة للبلعمة أو الشرب الخلوي ، [ 21 ] والثانية، عبر مستقبلات نوعية. [ 57 ] قد تشمل هذه المستقبلات مستقبلًا سطحيًا بوزن 30 كيلو دالتون ، أو مستقبلات الكسح في البلاعم . يرتبط المستقبل السطحي بوزن 30 كيلو دالتون بشكل نوعي بقطع الحمض النووي بطول 4500 زوج قاعدي (والتي يتم استيعابها لاحقًا)، ويوجد على الخلايا العارضة للمستضدات والخلايا التائية. ترتبط مستقبلات الكسح في البلاعم بمجموعة متنوعة من الجزيئات الكبيرة، بما في ذلك عديدات الريبونوكليوتيدات ، وبالتالي فهي مرشحة لامتصاص الحمض النووي. [ 57 ] [ 58 ] قد يُسهّل وجود تسلسلات عديد الغوانيلات امتصاص الحمض النووي بوساطة المستقبلات . تتجاوز أنظمة توصيل مسدسات الجينات ، وتغليف الليبوسومات الكاتيونية ، وطرق التوصيل الأخرى طريقة الدخول هذه، ولكن فهمها قد يكون مفيدًا في تقليل التكاليف (على سبيل المثال عن طريق تقليل الحاجة إلى السيتوفيكتينات)، وهو أمر قد يكون مهمًا في تربية الحيوانات.

عرض المستضد بواسطة الخلايا المشتقة من نخاع العظم

خلية متغصنة

أظهرت الدراسات التي أُجريت على فئران مُهَجَّنة أن المستضد يُعرض بواسطة خلايا مشتقة من نخاع العظم، والتي تشمل الخلايا المتغصنة، والبلعميات، وخلايا بائية متخصصة تُسمى الخلايا العارضة للمستضدات (APC). [ 49 ] [ 59 ] بعد حقن الجلد بمسدس الجينات، تهاجر خلايا لانغرهانس المُعدَّلة وراثيًا إلى العقدة اللمفاوية المُصرِّفة لعرض المستضدات. [ 7 ] بعد الحقن العضلي والحقن داخل الأدمة، تعرض الخلايا المتغصنة المستضد في العقدة اللمفاوية المُصرِّفة [ 56 ] ، كما وُجدت البلعميات المُعدَّلة وراثيًا في الدم المحيطي. [ 60 ]

إلى جانب النقل المباشر للجينات إلى الخلايا المتغصنة أو البلاعم، يحدث التنشيط المتبادل بعد حقن الحمض النووي في العضل، أو داخل الأدمة، أو باستخدام مسدس الجينات. يحدث التنشيط المتبادل عندما تعرض خلية مشتقة من نخاع العظم ببتيدات من بروتينات مُصنّعة في خلية أخرى في سياق معقد التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الأولى. يمكن لهذا أن يحفز استجابات الخلايا التائية السامة، ويبدو أنه مهم لاستجابة مناعية أولية كاملة. [ 7 ] [ 61 ]

دور الموقع المستهدف

يُحفّز توصيل الحمض النووي عن طريق الحقن العضلي والحقن داخل الأدمة الاستجابات المناعية بطرق مختلفة. ففي الجلد، تمتص الخلايا الكيراتينية والخلايا الليفية وخلايا لانغرهانس المستضدات وتُعبّر عنها، وهي المسؤولة عن تحفيز استجابة الأجسام المضادة الأولية. تهاجر خلايا لانغرهانس المُعدّلة وراثيًا من الجلد (خلال 12 ساعة) إلى العقدة الليمفاوية المُصرّفة، حيث تُهيّئ استجابات الخلايا البائية والتائية الثانوية. أما في العضلات الهيكلية، فتُعدّ خلايا العضلات المخططة الأكثر عرضةً للتعديل الوراثي، ولكن يبدو أنها غير مهمة في الاستجابة المناعية. في المقابل، ينتقل الحمض النووي المُلقّح عن طريق الحقن العضلي إلى العقدة الليمفاوية المُصرّفة في غضون دقائق، حيث تُعدّل الخلايا المتغصنة البعيدة وراثيًا، ثم تُحفّز استجابة مناعية. ويبدو أن الخلايا العضلية المُعدّلة وراثيًا تعمل كمستودع للمستضدات لتوجيه الخلايا العارضة للمستضدات المتخصصة. [ 21 ] [ 54 ] [ 61 ]

الحفاظ على الاستجابة المناعية

يُحفز التطعيم بالحمض النووي ذاكرة مناعية فعالة عبر عرض معقدات المستضد-الجسم المضاد على الخلايا التغصنية الجريبية (FDC)، وهي محفزات قوية للخلايا البائية. ويمكن تحفيز الخلايا التائية بواسطة خلايا تغصنية مماثلة في المراكز الجرثومية. وتستطيع الخلايا التغصنية الجريبية توليد ذاكرة مناعية لأن إنتاج الأجسام المضادة يتزامن مع التعبير طويل الأمد عن المستضد، مما يسمح بتكوين معقدات المستضد-الجسم المضاد وعرضها بواسطة هذه الخلايا. [ 7 ]

الإنترفيرونات

تستطيع كل من الخلايا التائية المساعدة والخلايا التائية السامة السيطرة على العدوى الفيروسية عن طريق إفراز الإنترفيرونات. عادةً ما تقتل الخلايا التائية السامة الخلايا المصابة بالفيروس. ومع ذلك، يمكن تحفيزها أيضًا لإفراز السيتوكينات المضادة للفيروسات، مثل إنترفيرون غاما (IFN-γ) وعامل نخر الورم ألفا (TNF-α) ، والتي لا تقتل الخلية، بل تحد من العدوى الفيروسية عن طريق تثبيط التعبير عن مكونات الفيروس. [ 62 ] يمكن استخدام لقاحات الحمض النووي (DNA) للحد من العدوى الفيروسية من خلال السيطرة غير المدمرة التي يتوسطها الإنترفيرون. وقد ثبت ذلك بالنسبة لالتهاب الكبد ب. [ 63 ] يُعد إنترفيرون غاما (IFN-γ) بالغ الأهمية في السيطرة على عدوى الملاريا [ 64 ] ، وهو أحد الاعتبارات المهمة في لقاحات الحمض النووي المضادة للملاريا.

تعديل الاستجابة المناعية

تعديل السيتوكينات

يجب أن يحفز اللقاح الفعال استجابة مناعية مناسبة لمسبب المرض المحدد. يمكن للقاحات الحمض النووي أن توجه استجابة الخلايا التائية المساعدة نحو نمط TH1 أو TH2، وأن تولد خلايا تائية سامة للخلايا و/أو أجسامًا مضادة عند الحاجة. يمكن تحقيق ذلك من خلال تعديلات على شكل المستضد المُعبر عنه (أي داخل الخلايا مقابل المُفرز)، أو طريقة ومسار الإعطاء، أو الجرعة. [ 41 ] [ 42 ] [ 65 ] [ 66 ] [ 67 ] كما يمكن تحقيقه أيضًا من خلال الإعطاء المتزامن لبلازميد الحمض النووي الذي يشفر جزيئات تنظيم المناعة، مثل السيتوكينات، أو اللمفوكينات ، أو الجزيئات المحفزة المساعدة. يمكن إعطاء هذه " المواد المساعدة الجينية" على النحو التالي:

  • مزيج من بلازميدين، أحدهما يشفر المستضد والآخر يشفر السيتوكين
  • متجه ثنائي أو متعدد الجينات مفرد، مفصول بمناطق فاصلة
  • الكيميرا المشفرة بالبلازميد ، أو البروتين الاندماجي

بشكل عام، يؤدي إعطاء عوامل محفزة للالتهاب (مثل أنواع مختلفة من الإنترلوكينات ، وعامل نخر الورم ، وعامل تحفيز مستعمرات المحببات والبلعميات) بالتزامن مع السيتوكينات المحفزة للخلايا التائية المساعدة من النوع الثاني (TH2) إلى زيادة الاستجابات المناعية، بينما تقلل العوامل المحفزة للالتهاب والسيتوكينات المحفزة للخلايا التائية المساعدة من النوع الأول (TH1) من الاستجابات المناعية الخلطية وتزيد من الاستجابات السامة للخلايا (وهي أكثر أهمية في الحماية من الفيروسات). وتُستخدم أحيانًا جزيئات محفزة مشتركة مثل B7-1 و B7-2 و CD40L .

طُبِّق هذا المفهوم في الإعطاء الموضعي لـ pDNA المُشفِّر لـ IL-10 . [ 33 ] وقد عزز البلازميد المُشفِّر لـ B7-1 (وهو ربيطة على الخلايا العارضة للمستضدات) الاستجابة المناعية بنجاح في نماذج الأورام. كما أن مزج البلازميدات المُشفِّرة لـ GM-CSF وبروتين السيركومسبوروزويت من بلازموديوم يويلي (PyCSP) عزز الحماية ضد التحدي اللاحق (بينما لم يُحقق PyCSP المُشفَّر بالبلازميد وحده هذا التأثير). وقد اقتُرح أن GM-CSF يحفز الخلايا المتغصنة على عرض المستضد بكفاءة أكبر، ويعزز إنتاج IL-2 وتنشيط الخلايا التائية المساعدة، مما يؤدي إلى زيادة الاستجابة المناعية. [ 50 ] ويمكن تعزيز ذلك بشكل أكبر عن طريق التحفيز الأولي بمزيج من pPyCSP وpGM-CSF، يليه التحفيز المُعزز بفيروس جدري مُعاد التركيب يُعبِّر عن PyCSP. [ 68 ] مع ذلك، فإن الحقن المشترك للبلازميدات التي تشفر GM-CSF (أو IFN-γ، أو IL-2) وبروتين اندماجي من بروتين سطح الميروزويت 1 (الطرف الكربوكسيلي) لـ P. chabaudi- بروتين سطح فيروس التهاب الكبد B (PcMSP1-HBs) قد ألغى الحماية ضد العدوى، مقارنةً بالحماية المكتسبة عن طريق إعطاء pPcMSP1-HBs وحده. [ 30 ]

تتميز المواد المساعدة الجينية بانخفاض تكلفتها وسهولة استخدامها، فضلاً عن تجنب استخدام السيتوكينات المؤتلفة غير المستقرة والمواد المساعدة "التقليدية" التي قد تكون سامة (مثل الشب ، وفوسفات الكالسيوم ، ودهون أحادية الفوسفات A، وسم الكوليرا ، والجسيمات الشحمية الموجبة الشحنة والمغلفة بالمانان، و QS21 ، وكربوكسي ميثيل السليلوز ، واليوبينيمكس ). [ 7 ] [ 21 ] ومع ذلك، لم يتم إثبات السمية المحتملة للتعبير المطول عن السيتوكينات. في العديد من أنواع الحيوانات ذات الأهمية التجارية، لم يتم تحديد وعزل جينات السيتوكينات. بالإضافة إلى ذلك، تُعدّل السيتوكينات المختلفة المشفرة بالبلازميدات الجهاز المناعي بشكل مختلف وفقًا لوقت إعطائها. على سبيل المثال، يُفضل إعطاء بعض بلازميدات الحمض النووي للسيتوكينات بعد بلازميد الحمض النووي للمستضد، لأن الإعطاء المسبق أو المتزامن قد يُقلل من الاستجابات النوعية ويزيد من الاستجابات غير النوعية. [ 69 ]

أنماط CpG المحفزة للمناعة

يبدو أن الحمض النووي البلازميدي نفسه له تأثير مساعد على الجهاز المناعي. [ 6 ] [ 7 ] يمكن للحمض النووي المشتق من البكتيريا أن يحفز آليات الدفاع المناعي الفطري، وتنشيط الخلايا المتغصنة، وإنتاج السيتوكينات من النوع TH1. [ 45 ] [ 70 ] ويعود ذلك إلى التعرف على تسلسلات ثنائية النوكليوتيدات CpG معينة ذات خصائص محفزة للمناعة. [ 66 ] [ 71 ] وتوجد تسلسلات CpG المحفزة (CpG-S) في الحمض النووي المشتق من البكتيريا بعشرين ضعفًا مقارنةً بالحمض النووي في حقيقيات النوى. ويعود ذلك إلى أن حقيقيات النوى تُظهر "كبح CpG"، أي أن أزواج ثنائيات النوكليوتيدات CpG تحدث بتردد أقل بكثير من المتوقع. بالإضافة إلى ذلك، فإن تسلسلات CpG-S تكون منخفضة الميثيل. ويحدث هذا بشكل متكرر في الحمض النووي البكتيري، بينما تكون أنماط CpG الموجودة في حقيقيات النوى مثيلة عند نيوكليوتيد السيتوزين. في المقابل، تتواجد تسلسلات النيوكليوتيدات التي تثبط تنشيط الاستجابة المناعية (وتُسمى مُعادلة CpG، أو CpG-N) بكثرة في جينومات حقيقيات النوى. [ 72 ] التسلسل الأمثل لتحفيز المناعة هو ثنائي نيوكليوتيد CpG غير مثيل محاط باثنين من البيورينات في الطرف 5' واثنين من البيريميدينات في الطرف 3' . [ 66 ] [ 70 ] بالإضافة إلى ذلك، يجب أن تكون المناطق المحيطة بهذا السداسي المُحفز للمناعة غنية بالجوانين لضمان الارتباط والامتصاص في الخلايا المستهدفة.

يعمل الجهاز المناعي الفطري بالتنسيق مع الجهاز المناعي التكيفي لتكوين استجابة مناعية ضد البروتين المشفر بواسطة الحمض النووي. تحفز تسلسلات CpG-S تنشيط الخلايا البائية متعددة النسائل، وزيادة التعبير عن السيتوكينات وإفرازها. [ 73 ] تفرز البلاعم المحفزة إنترلوكين-12، وإنترلوكين-18 ، وعامل نخر الورم ألفا، وإنترفيرون ألفا، وإنترفيرون بيتا، وإنترفيرون غاما، بينما تفرز الخلايا البائية المحفزة إنترلوكين-6 وبعض إنترلوكين-12. [ 21 ] [ 73 ] [ 74 ]

يمكن أن يضمن التلاعب بتسلسلات CpG-S وCpG-N في العمود الفقري للبلازميد في لقاحات الحمض النووي نجاح الاستجابة المناعية للمستضد المشفر، ويوجهها نحو النمط الظاهري TH1. يُعد هذا مفيدًا إذا كان العامل الممرض يتطلب استجابة TH للحماية. كما استُخدمت تسلسلات CpG-S كعوامل مساعدة خارجية لكل من لقاحات الحمض النووي والبروتينات المؤتلفة، بنسب نجاح متفاوتة. وقد أظهرت كائنات حية أخرى ذات أنماط CpG منخفضة الميثيل تحفيزًا لتكاثر الخلايا البائية متعددة النسائل. [ 75 ] قد تكون الآلية الكامنة وراء ذلك أكثر تعقيدًا من مجرد الميثيل، إذ لم يُلاحظ أن الحمض النووي الفأري منخفض الميثيل يُحفز استجابة مناعية.

معظم الأدلة على وجود تسلسلات CpG محفزة للمناعة مستمدة من دراسات أجريت على الفئران. ويتطلب تعميم هذه البيانات على أنواع أخرى الحذر، إذ قد تحتاج الأنواع المختلفة إلى تسلسلات مجاورة مختلفة، نظرًا لاختلاف خصائص ارتباط مستقبلات الكسح بين الأنواع. إضافةً إلى ذلك، قد تكون بعض الأنواع، مثل المجترات، غير حساسة للتسلسلات المحفزة للمناعة بسبب الحمل المعوي الكبير لديها.

تعزيزات بديلة

يمكن تعزيز الاستجابات المناعية المُحفَّزة بالحمض النووي عن طريق إعطاء البروتين المُعاد تركيبه أو فيروسات الجدري المُعاد تركيبها. وقد نجحت استراتيجيات "التحفيز والتعزيز" باستخدام البروتين المُعاد تركيبه في زيادة كلٍّ من عيار الأجسام المضادة المُعادلة، وقوة ارتباطها، واستمراريتها، بالنسبة للمُستضدات الضعيفة، مثل بروتين غلاف فيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول. [ 7 ] [ 76 ] كما ثبت أن تعزيزات الفيروس المُعاد تركيبه فعالة للغاية في تعزيز استجابات الخلايا التائية السامة للخلايا المُحفَّزة بالحمض النووي. يُركِّز التحفيز بالحمض النووي الاستجابة المناعية على المُستضد المطلوب، بينما يُوفِّر التعزيز بالفيروس المُعاد تركيبه كمية أكبر من المُستضد المُعبَّر عنه، مما يؤدي إلى زيادة كبيرة في استجابات الخلايا التائية السامة للخلايا النوعية.

أثبتت استراتيجيات التحصين الأولي والتعزيزي نجاحها في تحفيز المناعة ضد الإصابة بالملاريا في عدد من الدراسات. فقد أظهرت الفئران التي تم تحصينها أوليًا ببلازميد الحمض النووي الذي يشفر بروتين سطح الطفيلي المحيط بالبويغ (PyCSP) من بلازموديوم يويلي ، ثم تم تعزيزها بفيروس جدري البقر المُعاد تركيبه الذي يُعبر عن نفس البروتين، مستويات أعلى بكثير من الأجسام المضادة، ونشاط الخلايا التائية السامة للخلايا، وإنترفيرون غاما (IFN-γ)، وبالتالي مستويات حماية أعلى، مقارنةً بالفئران التي تم تحصينها وتعزيزها ببلازميد الحمض النووي فقط. [ 77 ] ويمكن تعزيز هذه المناعة بشكل أكبر عن طريق التحصين الأولي بمزيج من البلازميدات التي تشفر PyCSP وعامل تحفيز مستعمرات المحببات والبلعميات الفأري (GM-CSF)، قبل التعزيز بفيروس جدري البقر المُعاد تركيبه. [ 68 ] كما تم إثبات فعالية استراتيجية التحصين الأولي والتعزيزي لنموذج الملاريا القردي ، بلازموديوم نوليسي (P. knowlesi) . [ 78 ] تم تحصين قرود الريسوس بلقاح DNA متعدد المكونات والمراحل، يحمل جينات مستضدين من مرحلة الكبد - البروتين السطحي المحيط بالبويغ (PkCSP) والبروتين السطحي للبويغ 2 (PkSSP2) - ومستضدين من مرحلة الدم - البروتين السطحي القمي للميروزويت 1 (PkAMA1) والبروتين السطحي للميروزويت 1 (PkMSP1p42). ثم تم تحصينها مرة أخرى بفيروس كناري بوكس ​​مُعاد التركيب يحمل جينات المستضدات الأربعة جميعها (ALVAC-4). طورت القرود المحصنة أجسامًا مضادة ضد البويغات وكريات الدم الحمراء المصابة، واستجابات الخلايا التائية المُفرزة للإنترفيرون غاما ضد ببتيدات من PkCSP. وقد تحققت حماية جزئية ضد الإصابة بالبويغات، وانخفض متوسط ​​مستوى التطفل في الدم بشكل ملحوظ، مقارنةً بالقرود الضابطة. هذه النماذج، على الرغم من أنها ليست مثالية للاستقراء إلى المتصورة المنجلية في البشر، ستكون مهمة في التجارب ما قبل السريرية.

تعزيز الاستجابات المناعية

الحمض النووي

يمكن تحسين فعالية التحصين بالحمض النووي عن طريق تثبيت الحمض النووي ضد التحلل، وزيادة كفاءة توصيله إلى الخلايا العارضة للمستضد . [ 7 ] وقد تم إثبات ذلك من خلال تغليف الجسيمات الدقيقة الكاتيونية القابلة للتحلل الحيوي (مثل بولي (لاكتيد-كو-جليكوليد) المُصاغ مع بروميد سيتيل تريميثيل الأمونيوم ) بالحمض النووي. يمكن أن تكون هذه الجسيمات الدقيقة المغلفة بالحمض النووي فعالة في تحفيز الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا (CTL) مثل الفيروسات المُعاد تركيبها، خاصةً عند مزجها مع الشب.  ويبدو أن الجسيمات التي يبلغ قطرها 300 نانومتر هي الأكثر فعالية في امتصاصها من قبل الخلايا العارضة للمستضد. [ 7 ]

نواقل فيروسات ألفا

استُخدمت نواقل مُعاد تجميعها تعتمد على فيروسات ألفا لتحسين كفاءة التطعيم بالحمض النووي. [ 7 ] يُدخَل الجين المُشفِّر للمستضد المطلوب في مُضاعِف فيروس ألفا، ليحل محل الجينات البنيوية مع الحفاظ على جينات النسخ غير البنيوية سليمة. استُخدم فيروسا سيندبيس وغابة سيمليكي لبناء مُضاعِفات فيروس ألفا مُعاد تجميعها . على عكس التطعيمات التقليدية بالحمض النووي، فإن نواقل فيروس ألفا تقتل الخلايا المُعدَّلة وراثيًا، ويتم التعبير عنها بشكل عابر فقط. تُعبَّر جينات نسخ فيروس ألفا بالإضافة إلى جين اللقاح المُدخَل. ليس من الواضح كيف تُثير مُضاعِفات فيروس ألفا استجابة مناعية، ولكن قد يعود ذلك إلى المستويات العالية من البروتين الذي يُعبِّر عنه هذا الناقل، أو استجابات السيتوكينات المُحفَّزة بواسطة المُضاعِف، أو موت الخلايا المُبرمج المُحفَّز بواسطة المُضاعِف مما يؤدي إلى تعزيز امتصاص المستضد بواسطة الخلايا المتغصنة.

انظر أيضاً

مراجع

  1. 1 2 هنريك رومان راموس وباولو لي هو. "تطوير أمصال مضادة لسموم الأفاعي عن طريق التحصين الجيني: مراجعة" . علم السموم السريري في آسيا والمحيط الهادئ وأفريقيا . 2 : 401-414 .
  2. 1 2 ليو إس، وانغ إس، لو إس (أبريل 2016). "التطعيم بالحمض النووي كمنصة تكنولوجية لتحفيز إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة" . الميكروبات والأمراض المعدية الناشئة . 5 (4): e33. doi : 10.1038/emi.2016.27 . PMC 4855071. PMID 27048742 .  
  3. 1 2 3 "لقاحات الحمض النووي" . منظمة الصحة العالمية.
  4. 1 2 خان ، ك. ح. (مارس 2013). "لقاحات الحمض النووي: أدوارها في مكافحة الأمراض" . الجراثيم . 3 (1): 26-35 . doi : 10.11599/germs.2013.1034 . PMC 3882840. PMID 24432284 .  
  5. ١ ٢ "الهند تمنح موافقة طارئة لأول لقاح في العالم ضد كوفيد-19 بتقنية الحمض النووي" . رويترز . ٢٠ أغسطس ٢٠٢١. تاريخ الاطلاع: ٢٢ أغسطس ٢٠٢١ .
  6. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 ألاركون ، جيه بي، واين، جي دبليو، ماكمانوس، دي بي (1999). "لقاحات الحمض النووي: التكنولوجيا والتطبيق كعوامل مضادة للطفيليات والميكروبات". التقدم في علم الطفيليات ، المجلد 42. المجلد 42. الصفحات 343-410 . doi : 10.1016/S0065-308X(08)60152-9 . ISBN   9780120317424PMID 10050276​​ 
  7. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 روبنسون، إتش إل، وبيرتمر، تي إم (2000). لقاحات الحمض النووي للعدوى الفيروسية: دراسات أساسية وتطبيقات . التقدم في أبحاث الفيروسات. المجلد 55. الصفحات 1-74 . doi : 10.1016/S0065-3527(00)55001-5 . ISBN   9780120398553PMID 11050940​​ 
  8. ↑ وايت إل أو، جيب إي، نيوهام إتش سي، ريتشاردسون إم دي، وارين آر سي (يوليو 1979). "مقارنة نمو سلالات المبيضات البيضاء الضارية والمضعفة في كلى الفئران الطبيعية والفئران المعالجة بالكورتيزون باستخدام اختبار الكيتين". علم الفطريات المرضية . 67 (3): 173-177 . doi : 10.1007/bf00470753 . PMID 384256. S2CID 31914107 .  
  9. ↑ باولييتي إي، ليبينسكاس بي آر، سامسونوف سي، ميرسر إس، بانيكالي دي (يناير 1984). "بناء لقاحات حية باستخدام فيروسات جدري معدلة وراثيًا: النشاط البيولوجي لفيروسات الوقس المُعاد تركيبها التي تُعبر عن مستضد سطح فيروس التهاب الكبد ب وبروتين سكري د لفيروس الهربس البسيط" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 81 (1): 193-197 . Bibcode : 1984PNAS...81..193P . doi : 10.1073/pnas.81.1.193 . PMC 344637. PMID 6320164 .  
  10. ↑ براءة اختراع أمريكية رقم 4722848 - طريقة لتحصين الحيوانات بفيروس جدري البقر المعدل صناعياً
  11. ↑ أولمر جيه بي، دونيلي جيه جيه، باركر إس إي، رودس جي إتش، فيلجنر بي إل، دواركي في جيه، وآخرون (مارس 1993). "الحماية غير المتجانسة ضد الإنفلونزا عن طريق حقن الحمض النووي الذي يشفر بروتينًا فيروسيًا". مجلة ساينس . 259 (5102): 1745-1749 . Bibcode : 1993Sci...259.1745U . doi : 10.1126/science.8456302 . PMID 8456302 .  
  12. ↑ ريغالادو أ (2 أغسطس 2016). "بدأت الحكومة الأمريكية باختبار أول لقاح لها ضد فيروس زيكا على البشر" . مجلة إم آي تي ​​تكنولوجي ريفيو . تم الاطلاع عليه بتاريخ 6 أغسطس 2016 .
  13. ↑ تشين ي، وانغ س، لو س (فبراير 2014). "التطعيم بالحمض النووي لتطوير لقاح فيروس نقص المناعة البشرية" . اللقاحات . 2 (1): 138-159 . doi : 10.3390/vaccines2010138 . PMC 4494200. PMID 26344472 .  
  14. ↑ ليدجروود جيه إي ، بيرسون تي سي، هوبكا إس إيه، ديساي إن، روكر إس، جوردون آي جيه، وآخرون . (مايو 2011). "لقاح الحمض النووي لفيروس غرب النيل باستخدام مُحفِّز مُعدَّل يُحفِّز إنتاج أجسام مضادة مُعادِلة لدى البالغين الأصحاء من فئتي الشباب وكبار السن في تجربة سريرية من المرحلة الأولى" . مجلة الأمراض المعدية . 203 (10): 1396-1404 . doi : 10.1093/infdis/jir054 . PMC 3080891. PMID 21398392 .   
  15. ↑ كيلباتريك إيه إم، دوبوي إيه بي، تشانغ جي جي، كرامر إل دي (مايو 2010). "تطعيم طيور أبو الحناء الأمريكية (Turdus migratorius) ضد فيروس غرب النيل باستخدام الحمض النووي" . الأمراض المنقولة بالنواقل والأمراض الحيوانية المنشأ . 10 (4): 377-380 . doi : 10.1089/vbz.2009.0029 . PMC 2883478. PMID 19874192 .  
  16. 1 2 Sedegah M, Hedstrom R, Hobart P, Hoffman SL (أكتوبر 1994). "الوقاية من الملاريا عن طريق التحصين باستخدام الحمض النووي البلازميدي الذي يشفر بروتين السيركومسبوروزويت" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 91 (21): 9866-9870 . Bibcode : 1994PNAS...91.9866S . doi : 10.1073/pnas.91.21.9866 . JSTOR 2365723. PMC 44918. PMID 7937907 .   
  17. ↑ هارمون بي تي، وعلي إيه إي، وبادجيماس إل، وسيسينوغلو-ليرد أو، وكوبر إم جيه، ووازتشاك بي إل (مايو 2014). "يؤدي إعطاء جزيئات الحمض النووي البلازميدي النانوية عن طريق الأنف إلى نجاح عملية نقل الجينات والتعبير عن بروتين مُخبِر في دماغ الفئران" . العلاج الجيني . 21 (5): 514-521 . doi : 10.1038/gt.2014.28 . PMID 24670994. S2CID 5560134 .  
  18. 1 2 مور جي، كلينمان دي إم، شابيرو إس، هاجيوارا إي، سيديجاه إم، نورمان جيه إيه، وآخرون . (أغسطس 1995). " تعقيد استجابة السيتوكينات والأجسام المضادة الناتجة عن تحصين الفئران بحمض نووي بلازميدي لبروتين سيركومسبوروزويت من بلازموديوم يويلي" . مجلة علم المناعة . 155 (4): 2039-2046 . doi : 10.4049/jimmunol.155.4.2039 . PMID 7636255. S2CID 37290980 .   
  19. ↑ لايتنر، دبليو دبليو، سيغوين، إم سي، بالو، دبليو آر، سيتز، جيه بي، شولتز، إيه إم، شيهي، إم جيه، ليون، جيه إيه (ديسمبر 1997). "الاستجابات المناعية الناتجة عن الحقن العضلي أو حقن مسدس الجينات للقاحات الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين الواقية التي تُعبّر عن بروتين السيركومسبوروزويت من طفيليات الملاريا بلازموديوم بيرغي" . مجلة علم المناعة . 159 (12): 6112-6119 . doi : 10.4049/jimmunol.159.12.6112 . PMID 9550412. S2CID 37685499 .  
  20. ↑ بوم دبليو، كوهروبير إيه، باير تي، ميرتنز تي، ريمان جيه، شيرمبيك آر (يونيو 1996). "بنى ناقلات الحمض النووي التي تحفز استجابات الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا والأجسام المضادة النوعية لمستضد سطح التهاب الكبد ب في الفئران بعد الحقن العضلي". مجلة أساليب علم المناعة . 193 (1): 29-40 . doi : 10.1016/0022-1759(96)00035-X . PMID 8690928 . 
  21. ١ ٢ ٣ ٤ ٥ ٦ ٧ ٨ ٩ ١٠ ١١ لويس بي جيه، بابيوك إل إيه (١٩٩٩). "لقاحات الحمض النووي: مراجعة" . التقدم في أبحاث الفيروسات . ٥٤. دار النشر الأكاديمية: ١٢٩-١٨٨ . doi : 10.1016/S0065-3527(08)60367-X . ISBN 978-0-12-039854-6PMID 10547676​​ 
  22. ↑ أندريه إس، سيد بي، إيبرلي جيه، شروت دبليو، بولتمان إيه، هاس جيه (فبراير 1998). "زيادة الاستجابة المناعية الناتجة عن التطعيم بالحمض النووي باستخدام تسلسل gp120 اصطناعي مع استخدام مُحسَّن للرموز الجينية" . مجلة علم الفيروسات . 72 (2): 1497-1503 . doi : 10.1128/JVI.72.2.1497-1503.1998 . PMC 124631. PMID 9445053 .  
  23. ↑ موثوماني ك، تشانغ د، دايز ن س، هوانغ د س، كالاروتا س أ، تشو أ ي، وآخرون (سبتمبر 2003). "بنية بلازميد gp160 المُهندسة حديثًا لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول، السلالة أ من شرق أفريقيا، تُحفز استجابات مناعية خلطية وخلوية قوية في الجسم الحي" . علم الفيروسات . 314 (1): 134-146 . doi : 10.1016/S0042-6822(03)00459-8 . PMID 14517067 .  
  24. ↑ أوليفيرا، بي. إتش.، براذر، كيه. جيه.، برازيريس، دي. إم.، مونتيرو، جي. إيه. (سبتمبر 2009). "عدم استقرار البنية الصيدلانية الحيوية البلازميدية: التحديات والآثار المترتبة". اتجاهات في التكنولوجيا الحيوية . 27 (9): 503-511 . doi : 10.1016/j.tibtech.2009.06.004 . PMID 19656584 . 
  25. ↑ أوليفيرا، بي. إتش.، ومايرهوفر، ج. (سبتمبر 2013). "البلازميدات الخالية من العلامات للتطبيقات البيوتكنولوجية - الآثار والآفاق". اتجاهات في التكنولوجيا الحيوية . 31 (9): 539-547 . doi : 10.1016/j.tibtech.2013.06.001 . PMID 23830144 . 
  26. ↑ كوتزلر ، إم. أ.، وواينر، دي. بي. (أكتوبر 2008). "لقاحات الحمض النووي: هل هي جاهزة للاستخدام العام؟" . مجلة نيتشر ريفيوز. علم الوراثة . 9 (10): 776-788 . doi : 10.1038/nrg2432 . PMC 4317294. PMID 18781156 .  
  27. ↑ رودريغيز ف، تشانغ ج، ويتون ج ل (نوفمبر 1997). "التطعيم بالحمض النووي: يعزز إضافة اليوبيكويتين إلى بروتين فيروسي تحفيز الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا والحماية المضادة للفيروسات، ولكنه يلغي تحفيز الأجسام المضادة" . مجلة علم الفيروسات . 71 (11): 8497-8503 . doi : 10.1128/JVI.71.11.8497-8503.1997 . PMC 192313. PMID 9343207 .  
  28. 1 2 توبيري، تي دبليو، وسيليسيانو، آر إف (مارس 1997). "استهداف مستضدات فيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول للتحلل السريع داخل الخلايا يعزز التعرف على الخلايا اللمفاوية التائية السامة (CTL) وتحفيز استجابات CTL جديدة في الجسم الحي بعد التحصين" . مجلة الطب التجريبي . 185 (5): 909-920 . doi : 10.1084/jem.185.5.909 . PMC 2196169. PMID 9120397 .  
  29. ↑ هيوبنر ن، فيست س، ستراندسبي أ، ميشالسكي إ، بريسنر ر، زينغ ي، وآخرون . (يوليو 2008). "لقاح الحمض النووي المصمم بعقلانية لهيدروكسيلاز التيروسين يحفز مناعة نوعية مضادة لورم الأرومة العصبية". العلاجات الجزيئية للسرطان . 7 (7): 2241-2251 . doi : 10.1158/1535-7163.MCT-08-0109 . PMID 18645033. S2CID 35652424 .   
  30. 1 2 ونديرليش جي، مورا آي سي، ديل بورتيلو إتش إيه (أكتوبر 2000). "التحصين الجيني لفئران BALB/c باستخدام بلازميد يحمل الجين المشفر لبروتين سطحي هجين من الميروزويت 1 وبروتين سطحي لفيروس التهاب الكبد ب يحمي الفئران من عدوى بلازموديوم شابودي شابودي PC1 المميتة" . العدوى والمناعة . 68 (10): 5839-5845 . doi : 10.1128/IAI.68.10.5839-5845.2000 . PMC 101545. PMID 10992493 .  
  31. ↑ واينر، د.ب.، وكينيدي، ر.س. (يوليو 1999). "اللقاحات الجينية" . مجلة ساينتفك أمريكان . 281 (1): 50-57 . رمز Bibcode : 1999SciAm.281a..50W . doi : 10.1038/scientificamerican0799-50 . PMID 10396782. مؤرشف من الأصل بتاريخ 25 مارس 2009. تم الاطلاع عليه بتاريخ 21 نوفمبر 2007 . 
  32. ↑ وايدرا جي، أوستن إم، رابوساي دي، غولدبيك سي، بارنيت إس دبليو، تشين إم، وآخرون . (مايو 2000). "زيادة توصيل لقاح الحمض النووي وتعزيز المناعة عن طريق التثقيب الكهربائي في الجسم الحي" . مجلة علم المناعة . 164 (9): 4635-4640 . doi : 10.4049/jimmunol.164.9.4635 . PMID 10779767 .  
  33. 1 2 داهشيا م، كوكلين ن، كانانغات س، مانيكان إ، راوس ب ت (أغسطس 1997). "كبح الأمراض الالتهابية العينية المستمرة عن طريق الإعطاء الموضعي للحمض النووي البلازميدي المشفر للإنترلوكين-10" . مجلة علم المناعة . 159 (4): 1945-1952 . doi : 10.4049/ jimmunol.159.4.1945 . PMID 9257860. S2CID 43203331 .  
  34. 1 2 تشين واي، ويبستر آر جي، وودلاند دي إل (مارس 1998). "تحفيز استجابات الخلايا التائية CD8+ للمستضدات السائدة والفرعية والمناعة الوقائية ضد عدوى فيروس سينداي عن طريق التطعيم بالحمض النووي" . مجلة علم المناعة . 160 (5): 2425-2432 . doi : 10.4049/jimmunol.160.5.2425 . PMID 9498786. S2CID 2250871 .  
  35. ↑ لود إتش إن، هيوبنر إن، زينغ واي، فيست إس، ويكسلر إس، غيديك جي (ديسمبر 2004). "التطعيم بجينات الحمض النووي المصغرة كعلاج مساعد لورم الأرومة العصبية". حوليات أكاديمية نيويورك للعلوم . 1028 (1): 113-121 . Bibcode : 2004NYASA1028..113L . doi : 10.1196/annals.1322.012 . PMID 15650237. S2CID 27240738 .  
  36. ↑ سيزيمور، د. ر.، برانستروم، أ. أ.، سادوف، ج. س. (أكتوبر 1995). " الشيغيلا المضعفة كناقل للحمض النووي للتطعيم بوساطة الحمض النووي" . مجلة ساينس . 270 (5234): 299-302 . Bibcode : 1995Sci...270..299S . doi : 10.1126/science.270.5234.299 . PMID 7569980. S2CID 12532901 .  
  37. ↑ نيلون، كوري (25 نوفمبر 2014). "مركبة هجينة تنقل الحمض النووي" . جامعة ولاية نيويورك في بوفالو . تم الاطلاع عليه بتاريخ 16 ديسمبر 2014 .
  38. ↑ جونز، سي إتش، رافيكريشنان، إيه، تشين، إم، ريدينجر، آر، كمال أحمدي، إم، ران، إس، وآخرون . (أغسطس 2014). "تطوير ناقل العلاج الجيني الحيوي الهجين والقدرة الهندسية المزدوجة" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 111 (34): 12360-12365 . Bibcode : 2014PNAS..11112360J . doi : 10.1073 / pnas.1411355111 . PMC 4151754. PMID 25114239 .   
  39. ↑ باري إم إيه، لاي دبليو سي، جونستون إس إيه (أكتوبر 1995). "الحماية من عدوى الميكوبلازما باستخدام التحصين بمكتبة التعبير" . نيتشر . 377 ( 6550): 632-635 . Bibcode : 1995Natur.377..632B . doi : 10.1038/377632a0 . PMID 7566175. S2CID 4306972 .  
  40. ↑ فينان إي إف، ويبستر آر جي، فولر دي إتش، هاينز جيه آر، سانتورو جيه سي، روبنسون إتش إل (ديسمبر 1993). "لقاحات الحمض النووي: التحصينات الوقائية عن طريق الحقن، والتطعيم المخاطي، والتطعيم باستخدام مسدس الجينات" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 90 (24): 11478-11482 . Bibcode : 1993PNAS...9011478F . doi : 10.1073 / pnas.90.24.11478 . PMC 48007. PMID 8265577 .  
  41. ١ ٢ ٣ ٤ ٥ فيلتكويت دي إم، هيني إس، ويبستر آر جي، روبنسون إتش إل (مارس ١٩٩٧). "أنواع مختلفة من الخلايا التائية المساعدة وأنماط الأجسام المضادة الناتجة عن التحصين بمحلول ملحي وتحصين الحمض النووي باستخدام مسدس الجينات" . مجلة علم المناعة . ١٥٨ (٥): ٢٢٧٨-٢٢٨٤ . doi : 10.4049/jimmunol.158.5.2278 . PMID 9036975. S2CID 41368723 .  
  42. ١ ٢ ٣ ٤ بويل سي إم، مورين إم، ويبستر آر جي، روبنسون إتش إل (ديسمبر ١٩٩٦). "دور الأنسجة اللمفاوية المختلفة في بدء واستمرار استجابات الأجسام المضادة المُنتجة بواسطة الحمض النووي لبروتين H1 السكري لفيروس الإنفلونزا" . مجلة علم الفيروسات . ٧٠ (١٢): ٩٠٧٤-٩٠٧٨ . doi : 10.1128/JVI.70.12.9074-9078.1996 . PMC 191015. PMID 8971047 .  
  43. ↑ سالبرغ م، تاونسند ك، تشين م، أوديا ج، بانكس ت، جولي دي جيه، وآخرون . (يوليو 1997). "توصيف الاستجابات الخلطية والخلوية CD4+ بعد التحصين الجيني باستخدام نواقل فيروسية قهرية تعبر عن أشكال مختلفة من مستضدات النواة والمستضد e لفيروس التهاب الكبد ب" . مجلة علم الفيروسات . 71 (7): 5295-5303 . doi : 10.1128/JVI.71.7.5295-5303.1997 . PMC 191766. PMID 9188598 .   
  44. ↑ بانشيرو ج ، شتاينمان ر.م. (مارس 1998). " الخلايا المتغصنة والتحكم في المناعة". نيتشر . 392 (6673): 245-252 . Bibcode : 1998Natur.392..245B . doi : 10.1038/32588 . PMID 9521319. S2CID 4388748 .  
  45. 1 2 جاكوب تي، ووكر بي إس، وكريج إيه إم، وأودي إم سي، وفوجل جيه سي (سبتمبر 1998). "تنشيط الخلايا المتغصنة الجلدية بواسطة قليل النوكليوتيدات المحتوية على CpG: دور الخلايا المتغصنة في تعزيز استجابات Th1 بواسطة الحمض النووي المحفز للمناعة" . مجلة علم المناعة . 161 (6): 3042-3049 . doi : 10.4049/jimmunol.161.6.3042 . PMID 9743369. S2CID 35107733 .  
  46. 1 2 راز إي، تايغ إتش، ساتو واي، كور إم، دادلر جيه إيه، رومان إم، وآخرون . (مايو 1996). "الحث التفضيلي للاستجابة المناعية من النوع Th1 وتثبيط تكوين الأجسام المضادة IgE النوعية عن طريق التحصين ببلازميد DNA" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 93 (10): 5141-5145 . Bibcode : 1996PNAS...93.5141R . doi : 10.1073/pnas.93.10.5141 . PMC 39421. PMID 8643542 .   
  47. 1 2 فو تي إم، فريدمان إيه، أولمر جيه بي، ليو إم إيه، دونيلي جيه جيه (أبريل 1997). "المناعة الخلوية الوقائية: استجابات الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا ضد الحواتم السائدة والمتنحية لبروتين نووي فيروس الإنفلونزا المحفزة بالتطعيم بالحمض النووي" . مجلة علم الفيروسات . 71 (4): 2715-2721 . doi : 10.1128/JVI.71.4.2715-2721.1997 . PMC 191393. PMID 9060624 .  
  48. 1 2 3 ريستيفو، ن.ب.، باسيك، إ.، إيرفين، ك.ر.، يوديل، ج.و.، مكابي، ب.ج.، أندرسون، ر.و.، وآخرون . (مايو 1995). "معالجة المستضد في الجسم الحي واستثارة استجابات الخلايا التائية السامة الأولية" . مجلة علم المناعة . 154 (9): 4414-4422 . doi : 10.4049 / jimmunol.154.9.4414 . PMC 1952186. PMID 7722298 .   
  49. 1 2 3 إيواساكي أ، ستيرنهولم ب ج، تشان أ ك، بيرنشتاين ن ل، باربر ب هـ (مايو 1997). " استجابات الخلايا التائية السامة المعززة بوساطة مولدات المناعة البلازميدية DNA التي تشفر جزيئات التحفيز المشترك والسيتوكينات" . مجلة علم المناعة . 158 (10): 4591-4601 . doi : 10.4049/jimmunol.158.10.4591 . PMID 9144471. S2CID 41779568 .  
  50. 1 2 وايس دبليو آر، إيشي كيه جيه، هيدستروم آر سي، سيديجاه إم، إيتشينو إم، بارنهارت كيه، وآخرون . (سبتمبر 1998). "بلازميد يحمل عامل تحفيز مستعمرات الخلايا المحببة والبلعمية في الفئران يزيد من الحماية التي يوفرها لقاح الحمض النووي للملاريا" . مجلة علم المناعة . 161 (5): 2325-2332 . doi : 10.4049/jimmunol.161.5.2325 . PMID 9725227. S2CID 21038927 .   
  51. ↑ تسوجي تي، هاماغيما كيه، فوكوشيما جيه، شين كيو كيو، إيشي إن، آوكي آي، وآخرون (أبريل 1997). "تعزيز المناعة الخلوية ضد فيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول عن طريق التلقيح المشترك لمستضد فيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول المشفر بواسطة البلازميد مع بلازميد يعبر عن إنترلوكين-12" . مجلة علم المناعة . 158 (8): 4008-4013 . doi : 10.4049/jimmunol.158.8.4008 . PMID 9103472. S2CID 38099483 .   
  52. 1 2 جوستيفيتش دي إم، ويبستر آر جي (أكتوبر 1996). "الحفاظ طويل الأمد على مناعة الخلايا البائية ضد الهيماغلوتينين لفيروس الإنفلونزا في الفئران بعد التحصين القائم على الحمض النووي" . علم الفيروسات . 224 (1): 10-17 . doi : 10.1006/viro.1996.0501 . PMID 8862394 . 
  53. ↑ مانشيني-بورجين م، فونتين هـ، بريشو س، بول س، ميشيل م ل (مايو 2006). "الاستجابة المناعية للقاح الحمض النووي لالتهاب الكبد ب المُعطى لحاملي فيروس التهاب الكبد ب المزمن". اللقاح . 24 (21): 4482-4489 . doi : 10.1016/j.vaccine.2005.08.013 . PMID 16310901 . 
  54. 1 2 وولف، جيه إيه، داوتي، إم إي، جياو، إس، ريبتو، جي، بيرغ، آر كيه، لودتك، جيه جيه، وآخرون . (ديسمبر 1992). "تعبير البلازميدات العارية بواسطة الأنابيب العضلية المستزرعة ودخول البلازميدات إلى الأنابيب المستعرضة والكافولاي في العضلات الهيكلية للثدييات". مجلة علوم الخلية . 103. 103 (4): 1249-1259 . doi : 10.1242/jcs.103.4.1249 . PMID 1487500 .  
  55. ↑ أندرسون، آر. جي.، كامين، بي. إيه.، روثبرغ، كيه. جي.، لاسي، إس. دبليو. (يناير 1992). "الموت الخلوي المبرمج: عزل ونقل الجزيئات الصغيرة بواسطة الكهيفات". مجلة ساينس . 255 (5043): 410-411 . رمز Bibcode : 1992Sci...255..410A . doi : 10.1126/science.1310359 . PMID 1310359 . 
  56. 1 2 كاساريس إس، إينابا ك، برومينو تي دي، شتاينمان آر إم، بونا سي إيه (نوفمبر 1997). "عرض المستضد بواسطة الخلايا المتغصنة بعد التحصين بالحمض النووي الذي يشفر محددًا مستضديًا فيروسيًا مقيدًا بمعقد التوافق النسيجي الرئيسي من الفئة الثانية" . مجلة الطب التجريبي . 186 (9): 1481-1486 . ​​doi : 10.1084/jem.186.9.1481 . PMC 2199124. PMID 9348305 .  
  57. 1 2 بينيت آر إم، غابور جي تي، ميريت إم إم (ديسمبر 1985). "ارتباط الحمض النووي بالخلايا البيضاء البشرية. دليل على ارتباط الحمض النووي، واستيعابه، وتحلله بوساطة مستقبلات" . مجلة التحقيقات السريرية . 76 (6): 2182-2190 . doi : 10.1172/JCI112226 . PMC 424340. PMID 3001145 .  
  58. ↑ بينيت آر إم، هيفينيدر إس إتش، باك إيه، ميريت إم، سميث سي إيه، موريتش دي، هاينريش إم سي (مايو 1988). " إنتاج وتوصيف الأجسام المضادة وحيدة النسيلة الفأرية لمستقبل الحمض النووي على كريات الدم البيضاء البشرية" . مجلة علم المناعة . 140 (9): 2937-2942 . doi : 10.4049/jimmunol.140.9.2937 . PMID 2452195. S2CID 22923379 .  
  59. ↑ كور إم، لي دي جيه، كارسون دي إيه، تايغ إتش (أكتوبر 1996). "التطعيم الجيني باستخدام الحمض النووي البلازميدي العاري: آلية تحفيز الخلايا اللمفاوية التائية السامة للخلايا" . مجلة الطب التجريبي . 184 (4): 1555-1560 . doi : 10.1084/jem.184.4.1555 . PMC 2192808. PMID 8879229 .  
  60. ↑ تشاترجون، إم. أ.، روبنسون، تي. إم.، بوير، جيه. دي.، وينر، دي. بي. (يونيو 1998). " الحث المناعي النوعي بعد التحصين القائم على الحمض النووي من خلال نقل الجينات وتنشيط الخلايا البلعمية/الخلايا العارضة للمستضدات في الجسم الحي" . مجلة علم المناعة . 160 (12): 5707-5718 . doi : 10.4049/jimmunol.160.12.5707 . PMID 9637479. S2CID 33499198 .  
  61. 1 2 توريس، سي. أ.، إيواساكي، أ.، باربر، ب. هـ.، روبنسون، هـ. ل. (مايو 1997). "الاعتماد التفاضلي على نسيج الموقع المستهدف للتطعيمات باستخدام مسدس الجينات والتطعيمات العضلية بالحمض النووي" . مجلة علم المناعة . 158 (10): 4529-4532 . doi : 10.4049/ jimmunol.158.10.4529 . PMID 9144463. S2CID 45069087 .  
  62. ↑ فرانكو أ، غيدوتي إل جي، هوبز إم في، باسكييتو في، تشيساري إف في (أغسطس 1997). "الوظيفة المرضية للخلايا التائية المساعدة 1 الموجبة لـ CD4 في الفئران المعدلة وراثيًا المصابة بفيروس التهاب الكبد ب" . مجلة علم المناعة . 159 (4): 2001-2008 . doi : 10.4049/jimmunol.159.4.2001 . PMID 9257867. S2CID 20528634 .  
  63. ↑ مانشيني م، هادشويل م، ديفيس هـ ل، ويلين ر ج، تيولايس ب، ميشيل م ل (أكتوبر 1996). "التحصين بوساطة الحمض النووي في نموذج فأر معدل وراثيًا لحالة حامل مزمن لمستضد سطح التهاب الكبد ب" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 93 (22): 12496-12501 . Bibcode : 1996PNAS...9312496M . doi : 10.1073 / pnas.93.22.12496 . PMC 38020. PMID 8901610 .  
  64. ↑ دولان، د. ل.، هوفمان، س. ل. (يوليو 1999). "يُعدّ كلٌّ من إنترلوكين-12 والخلايا القاتلة الطبيعية ضروريين للمناعة التكيفية النوعية للمستضد ضد الملاريا، والتي تبدأها الخلايا التائية CD8+ في نموذج بلازموديوم يويلي" . مجلة علم المناعة . 163 (2): 884-892 . doi : 10.4049/jimmunol.163.2.884 . PMID 10395683. S2CID 41651105 .  
  65. ↑ كاردوسو إيه آي، بليكسنكرون-مولر إم، فايول جيه، ليو إم، بوكلاند آر، وايلد تي إف (نوفمبر 1996). "التطعيم باستخدام الحمض النووي البلازميدي المشفر للهيماغلوتينين والبروتين النووي لفيروس الحصبة يؤدي إلى مناعة خلطية وخلوية" . علم الفيروسات . 225 (2): 293-299 . doi : 10.1006/viro.1996.0603 . PMID 8918915 . 
  66. 1 2 3 ساتو واي، رومان إم، تايغ إتش، لي دي، كور إم، نغوين إم دي، وآخرون . (يوليو 1996). "تسلسلات الحمض النووي المحفزة للمناعة والضرورية للتطعيم الجيني الفعال داخل الأدمة". مجلة ساينس . 273 (5273): 352-354 . Bibcode : 1996Sci...273..352S . doi : 10.1126/science.273.5273.352 . PMID 8662521. S2CID 9333197 .   
  67. ↑ فايس ر، لايتنر و.و، شيبلهوفر س، تشين د، بيرنهاوبت أ، موستبوك س، وآخرون (أكتوبر 2000). "التطعيم الجيني ضد عدوى الملاريا عن طريق الحقن داخل الأدمة والبشرة لبلازميد يحتوي على الجين المشفر لبروتين السيركومسبوروزويت في بلازموديوم بيرغي" . العدوى والمناعة . 68 (10): 5914-5919 . doi : 10.1128/IAI.68.10.5914-5919.2000 . PMC 101554. PMID 10992502 .   
  68. 1 2 Sedegah M, Weiss W, Sacci JB, Charoenvit Y, Hedstrom R, Gowda K, et al. (يونيو 2000). "تحسين المناعة الوقائية المُستحثة بالتطعيم القائم على الحمض النووي: التحفيز الأولي باستخدام الحمض النووي البلازميدي المُشفِّر للمستضد وعامل تحفيز مستعمرات المحببات والبلعميات، والتحفيز المُعزز باستخدام فيروس الجدري المُعاد تركيبه المُعبِّر عن المستضد" . مجلة علم المناعة . 164 (11): 5905-5912 . doi : 10.4049/jimmunol.164.11.5905 . PMID 10820272 .  
  69. ↑ باروش، د.هـ.، وسانترا، س.، وستينبيك، ت.د.، وتشنغ، ش.ش.، وبيري، هـ.س.، وديفيز، م.إ.، وآخرون . (أغسطس 1998). "تعزيز وتثبيط الاستجابات المناعية للقاح الحمض النووي لفيروس نقص المناعة البشرية من النوع الأول عن طريق إعطاء السيتوكين/الغلوبولين المناعي البلازميدي" . مجلة علم المناعة . 161 (4): 1875-1882 . doi : 10.4049/jimmunol.161.4.1875 . PMID 9712056. S2CID 36488254 .   
  70. 1 2 كريج إيه إم، يي إيه كيه، ماتسون إس، فالدشميدت تي جيه، بيشوب جي إيه، تيسديل آر، وآخرون (أبريل 1995) . "تحفز أنماط CpG في الحمض النووي البكتيري التنشيط المباشر للخلايا البائية". نيتشر . 374 (6522): 546-549 . Bibcode : 1995Natur.374..546K . doi : 10.1038/374546a0 . PMID 7700380. S2CID 4261304 .   
  71. ↑ كلينمان ، د.م.، يامشيكوف، ج.، إيشيغاتسوبو، ي. (أبريل 1997). "مساهمة أنماط CpG في المناعة المناعية للقاحات الحمض النووي" . مجلة علم المناعة . 158 (8): 3635-3639 . doi : 10.4049/jimmunol.158.8.3635 . PMID 9103425. S2CID 41861994 .  
  72. ↑ كريج إيه إم، وو تي، ويراتنا آر، وإفلر إس إم، ولوف-هومان إل، ويانغ إل، وآخرون . (أكتوبر 1998). "تمنع أنماط التسلسل في الحمض النووي الفيروسي الغدي تنشيط المناعة بواسطة أنماط CpG المحفزة" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 95 (21): 12631-12636 . Bibcode : 1998PNAS...9512631K . doi : 10.1073 / pnas.95.21.12631 . PMC 22882. PMID 9770537 .   
  73. 1 2 كلينمان دي إم، يي إيه كيه، بيوكيج إس إل، كونوفير جيه، كريج إيه إم (أبريل 1996). "تحفز أنماط CpG الموجودة في الحمض النووي للبكتيريا الخلايا الليمفاوية بسرعة على إفراز إنترلوكين 6، وإنترلوكين 12، وإنترفيرون غاما" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 93 (7): 2879-2883 . Bibcode : 1996PNAS...93.2879K . doi : 10.1073 / pnas.93.7.2879 . PMC 39727. PMID 8610135 .  
  74. ↑ يي إيه كيه، تشيس جيه إتش، كودري جيه إس، كريج إيه إم (يناير 1996). "يحفز إنترفيرون غاما إفراز إنترلوكين-6 وIgM استجابةً لنمط CpG في الحمض النووي البكتيري والأوليغوديوكسينوكليوتيدات" . مجلة علم المناعة . 156 (2): 558-564 . doi : 10.4049/jimmunol.156.2.558 . PMID 8543806. S2CID 42145608 .  
  75. ↑ بارويك بي جي، شارير سي دي، مارتينيز آر جيه، برايس إم جيه، واين إيه إن، هاينز آر آر، وآخرون . (مايو 2018). "تثبيط تنشيط الخلايا البائية وتمايز خلايا البلازما عن طريق مثيلة الحمض النووي الجديدة" . نيتشر كوميونيكيشنز . 9 (1) 1900. Bibcode : 2018NatCo...9.1900B . doi : 10.1038/ s41467-018-04234-4 . PMC 5953949. PMID 29765016 .   
  76. ↑ ليتفين، ن. ل.، مونتيفيوري، د. س.، ياسوتومي، ي.، بيري، هـ. س.، ديفيز، م. إ.، ليكوتيس، س.، وآخرون . (أغسطس 1997). "استجابات مناعية قوية ووقائية مضادة لفيروس نقص المناعة البشرية ناتجة عن التطعيم الثنائي النمط بغلاف فيروس نقص المناعة البشرية والبروتين" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 94 (17): 9378-9383 . Bibcode : 1997PNAS ...94.9378L . doi : 10.1073/pnas.94.17.9378 . PMC 23198. PMID 9256490 .   
  77. ↑ سيديجاه م، جونز تي آر، كور م، هيدستروم ر، هوبارت ب، تاين جيه إيه، هوفمان إس إل (يونيو 1998). "التطعيم المعزز بفيروس الوقس المؤتلف يزيد من المناعة والفعالية الوقائية للقاح الحمض النووي للملاريا" . وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 95 (13): 7648-7653 . Bibcode : 1998PNAS...95.7648S . doi : 10.1073 / pnas.95.13.7648 . PMC 22711. PMID 9636204 .  
  78. ↑ روغرز وآخرون (سبتمبر 2001). "لقاح متعدد المراحل متعدد المستضدات، يُعطى بجرعات أولية وتعزيزية غير متجانسة، ضد الملاريا الناجمة عن طفيل المتصورة النولسية، يوفر حماية جزئية لدى قرود الريسوس" . العدوى والمناعة . 69 (9): 5565-5572 . doi : 10.1128/IAI.69.9.5565-5572.2001 . PMC 98670. PMID 11500430 .   

للمزيد من القراءة