الحمض النووي المؤتلف

الموسوعة الحرة
بناء الحمض النووي المؤتلف، حيث يتم إدخال جزء غريب من الحمض النووي في ناقل بلازميدي. في هذا المثال، يتم تعطيل الجين المشار إليه باللون الأبيض عند إدخال جزء الحمض النووي الغريب.
جزء من سلسلة عن
الهندسة الوراثية
 
الكائنات المعدلة وراثيا
التاريخ والتنظيم
عملية
التطبيقات
الخلافات
  • ف
  • ت
  • هـ

جزيئات الحمض النووي المعاد التركيب ( rDNA ) هي جزيئات الحمض النووي التي تشكلت من خلال طرق المختبر لإعادة التركيب الجيني (مثل الاستنساخ الجزيئي ) والتي تجمع المواد الجينية من مصادر متعددة، مما يخلق تسلسلات لا يمكن العثور عليها في الجينوم بطريقة أخرى .

الحمض النووي المؤتلف هو الاسم العام لقطعة من الحمض النووي تم إنشاؤها عن طريق الجمع بين قطعتين أو أكثر من مصادر مختلفة. الحمض النووي المؤتلف ممكن لأن جزيئات الحمض النووي من جميع الكائنات الحية تشترك في نفس البنية الكيميائية، وتختلف فقط في تسلسل النوكليوتيدات . تسمى جزيئات الحمض النووي المؤتلف أحيانًا الحمض النووي الكيمري لأنها يمكن أن تكون مصنوعة من مادة من نوعين مختلفين مثل الكيميرا الأسطورية . تستخدم تقنية الحمض النووي المؤتلف تسلسلات متماثلة وتؤدي إلى إنتاج نهايات لزجة وغير حادة .

يمكن أن تنشأ تسلسلات الحمض النووي المستخدمة في بناء جزيئات الحمض النووي المؤتلف من أي نوع . على سبيل المثال، يمكن ضم الحمض النووي النباتي إلى الحمض النووي البكتيري، أو يمكن ضم الحمض النووي البشري إلى الحمض النووي الفطري. بالإضافة إلى ذلك، يمكن إنشاء تسلسلات الحمض النووي التي لا تحدث في أي مكان في الطبيعة عن طريق التخليق الكيميائي للحمض النووي ودمجها في جزيئات الحمض النووي المؤتلف. باستخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف والحمض النووي الاصطناعي، يمكن إنشاء أي تسلسل حمض نووي وإدخاله في الكائنات الحية.

تُسمى البروتينات التي يمكن أن تنتج عن التعبير عن الحمض النووي المعاد التركيب داخل الخلايا الحية بالبروتينات المعاد تركيبها . عندما يتم إدخال الحمض النووي المعاد تركيبه الذي يشفر بروتينًا إلى كائن مضيف، لا يتم إنتاج البروتين المعاد تركيبه بالضرورة. [1] يتطلب التعبير عن البروتينات الغريبة استخدام متجهات تعبير متخصصة وغالبًا ما يتطلب إعادة هيكلة كبيرة بواسطة تسلسلات الترميز الأجنبية. [2]

يختلف الحمض النووي المعاد التركيب عن إعادة التركيب الجيني في أن الأول ينتج عن طرق اصطناعية بينما الثاني هو عملية بيولوجية طبيعية تؤدي إلى إعادة خلط تسلسلات الحمض النووي الموجودة في جميع الكائنات الحية بشكل أساسي.

إنتاج

الاستنساخ الجزيئي هو عملية معملية تستخدم لإنتاج الحمض النووي المؤتلف. [3] [4] [5] [6] وهي واحدة من أكثر طريقتين استخدامًا على نطاق واسع، إلى جانب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، تستخدم لتوجيه تكرار أي تسلسل DNA محدد يختاره التجريبي. هناك اختلافان أساسيان بين الطريقتين. الأول هو أن الاستنساخ الجزيئي ينطوي على تكرار الحمض النووي داخل خلية حية، بينما يكرر تفاعل البوليميراز المتسلسل الحمض النووي في أنبوب الاختبار، خاليًا من الخلايا الحية. والفرق الآخر هو أن الاستنساخ ينطوي على قص ولصق تسلسلات الحمض النووي، بينما يضخم تفاعل البوليميراز المتسلسل عن طريق نسخ تسلسل موجود.

يتطلب تكوين الحمض النووي المؤتلف ناقل استنساخ ، وهو جزيء من الحمض النووي يتضاعف داخل الخلية الحية. تشتق الناقلات عمومًا من البلازميدات أو الفيروسات ، وتمثل أجزاء صغيرة نسبيًا من الحمض النووي تحتوي على إشارات وراثية ضرورية للتضاعف، بالإضافة إلى عناصر إضافية لتسهيل إدخال الحمض النووي الغريب، وتحديد الخلايا التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف، والتعبير عن الحمض النووي الغريب عند الاقتضاء. يعتمد اختيار الناقل للاستنساخ الجزيئي على اختيار الكائن المضيف، وحجم الحمض النووي المراد استنساخه، وما إذا كان سيتم التعبير عن الحمض النووي الغريب وكيف. [7] يمكن دمج أجزاء الحمض النووي باستخدام مجموعة متنوعة من الطرق، مثل استنساخ إنزيم القيد/الربط أو تجميع جيبسون . [ بحاجة لمصدر ]

في بروتوكولات الاستنساخ القياسية، يتضمن استنساخ أي جزء من الحمض النووي سبع خطوات أساسية: (1) اختيار الكائن المضيف وناقل الاستنساخ، (2) إعداد الحمض النووي للناقل، (3) إعداد الحمض النووي المراد استنساخه، (4) إنشاء الحمض النووي المؤتلف، (5) إدخال الحمض النووي المؤتلف إلى الكائن المضيف، (6) اختيار الكائنات الحية التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف، و(7) البحث عن المستنسخات ذات الإضافات المرغوبة في الحمض النووي والخصائص البيولوجية. [6] يتم وصف هذه الخطوات بمزيد من التفصيل في مقال ذي صلة ( الاستنساخ الجزيئي ).

التعبير عن الحمض النووي

يتطلب التعبير عن الحمض النووي نقل الخلايا المضيفة المناسبة. عادةً، تُستخدم الخلايا البكتيرية أو خلايا الخميرة أو الحشرات أو الثدييات (مثل خلايا الكلى الجنينية البشرية أو خلايا CHO ) كخلايا مضيفة. [8]

بعد عملية الزرع في الكائن المضيف، قد يتم التعبير عن الحمض النووي الغريب الموجود داخل بنية الحمض النووي المؤتلف أو قد لا يتم التعبير عنه . أي أن الحمض النووي قد يتم تكراره ببساطة دون التعبير عنه، أو قد يتم نسخه وترجمته وإنتاج بروتين مؤتلف. بشكل عام، يتطلب التعبير عن جين غريب إعادة هيكلة الجين ليشمل التسلسلات المطلوبة لإنتاج جزيء mRNA الذي يمكن استخدامه بواسطة جهاز الترجمة الخاص بالمضيف (على سبيل المثال المحفز وإشارة بدء الترجمة والمنتهي النسخي ). [9] قد يتم إجراء تغييرات محددة على الكائن المضيف لتحسين التعبير عن الجين غير الطبيعي. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون هناك حاجة إلى تغييرات في تسلسلات الترميز أيضًا، لتحسين الترجمة، وجعل البروتين قابلاً للذوبان، وتوجيه البروتين المؤتلف إلى الموقع الخلوي أو خارج الخلوي المناسب، وتثبيت البروتين من التحلل. [10] [11] [12]

خصائص الكائنات الحية التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف

في معظم الحالات، تتمتع الكائنات الحية التي تحتوي على الحمض النووي المؤتلف بأنماط ظاهرية طبيعية ظاهريًا . أي أن مظهرها وسلوكها واستقلابها لا يتغير عادةً، والطريقة الوحيدة لإثبات وجود تسلسلات مؤتلفة هي فحص الحمض النووي نفسه، عادةً باستخدام اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). [13] توجد استثناءات مهمة، وسيتم مناقشتها أدناه.

إذا كانت تسلسلات rDNA تشفر جينًا يتم التعبير عنه، فيمكن اكتشاف وجود منتجات RNA و/أو بروتينية للجين المعاد التركيب، عادةً باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي أو طرق التهجين الغربية . [13] لا تعد التغيرات الظاهرية الجسيمة هي القاعدة، ما لم يتم اختيار الجين المعاد تركيبه وتعديله بحيث يولد نشاطًا بيولوجيًا في الكائن الحي المضيف. [14] تشمل الأنماط الظاهرية الإضافية التي يتم مواجهتها السمية للكائن الحي المضيف التي يسببها منتج الجين المعاد تركيبه، خاصةً إذا تم التعبير عنه بشكل مفرط أو التعبير عنه داخل خلايا أو أنسجة غير مناسبة. [ بحاجة لمصدر ]

في بعض الحالات، يمكن أن يكون للحمض النووي المؤتلف تأثيرات ضارة حتى لو لم يتم التعبير عنه. إحدى الآليات التي يحدث بها هذا هي التعطيل الإدراجي ، حيث يتم إدراج الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين في جين خلية مضيفة. في بعض الحالات، يستخدم الباحثون هذه الظاهرة " لإقصاء " الجينات لتحديد وظيفتها البيولوجية وأهميتها. [15] آلية أخرى يمكن أن يؤثر بها إدراج الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين في الحمض النووي الكروموسومي على التعبير الجيني هي التنشيط غير المناسب لجينات خلية مضيفة لم يتم التعبير عنها سابقًا. يمكن أن يحدث هذا، على سبيل المثال، عندما يتم وضع جزء من الحمض النووي المؤتلف يحتوي على مُروِّج نشط بجوار جين خلية مضيفة كان صامتًا سابقًا، أو عندما يخضع جين خلية مضيفة يعمل على تقييد التعبير الجيني للتعطيل الإدراجي بواسطة الحمض النووي المؤتلف. [ بحاجة لمصدر ]

تطبيقات الحمض النووي المؤتلف

يُستخدم الحمض النووي المؤتلف على نطاق واسع في التكنولوجيا الحيوية والطب والأبحاث. واليوم، توجد البروتينات المؤتلفة والمنتجات الأخرى الناتجة عن استخدام تقنية الحمض النووي في كل صيدلية أو عيادة طبيب أو طبيب بيطري أو مختبر اختبار طبي أو مختبر أبحاث بيولوجية. بالإضافة إلى ذلك، وجدت الكائنات الحية التي تم التلاعب بها باستخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف، وكذلك المنتجات المشتقة من تلك الكائنات الحية، طريقها إلى العديد من المزارع ومحلات السوبر ماركت وخزائن الأدوية المنزلية وحتى متاجر الحيوانات الأليفة، مثل تلك التي تبيع الأسماك المجففة والحيوانات المعدلة وراثيًا الأخرى .

التطبيق الأكثر شيوعًا للحمض النووي المؤتلف هو في الأبحاث الأساسية، حيث تعد التكنولوجيا مهمة لمعظم الأعمال الحالية في العلوم البيولوجية والطبية الحيوية. [13] يستخدم الحمض النووي المؤتلف لتحديد الجينات ورسم خرائطها وتسلسلها وتحديد وظيفتها. تُستخدم مجسات الحمض النووي المؤتلف في تحليل التعبير الجيني داخل الخلايا الفردية وفي جميع أنسجة الكائنات الحية بالكامل. تُستخدم البروتينات المؤتلفة على نطاق واسع ككواشف في التجارب المعملية ولتوليد مجسات الأجسام المضادة لفحص تخليق البروتين داخل الخلايا والكائنات الحية. [4]

توجد العديد من التطبيقات العملية الإضافية للحمض النووي المؤتلف في الصناعة، وإنتاج الغذاء، والطب البشري والبيطري، والزراعة، والهندسة الحيوية. [4] تم تحديد بعض الأمثلة المحددة أدناه.

كيموسين معاد التركيب

الكيموسين ، الموجود في المنفحة ، هو الإنزيم المسؤول عن تحلل الكازين κ لإنتاج بارا- κ- كازين وجليكوماكروببتيد ، وهي الخطوة الأولى في تكوين الجبن ، ثم اللبن الرائب ، ومصل اللبن . [16] كان أول مادة مضافة غذائية معدلة وراثيًا تُستخدم تجاريًا. تقليديًا، حصل المعالجون على الكيموسين من المنفحة، وهو مستحضر مشتق من المعدة الرابعة للعجول التي تتغذى على الحليب. قام العلماء بهندسة سلالة غير مسببة للأمراض (K-12) من بكتيريا الإشريكية القولونية لإنتاج الإنزيم في المختبر على نطاق واسع. هذا الإنزيم المعاد التركيب المنتج ميكروبيولوجيًا، المطابق هيكليًا للإنزيم المشتق من العجل، يكلف أقل ويتم إنتاجه بكميات وفيرة. اليوم، يتم تصنيع حوالي 60٪ من الجبن الصلب في الولايات المتحدة باستخدام الكيموسين المعدل وراثيًا. في عام 1990، منحت إدارة الغذاء والدواء الكيموسين حالة " المعترف به عمومًا بأنه آمن " (GRAS) استنادًا إلى البيانات التي أظهرت أن الإنزيم آمن. [17]

الإنسولين البشري المؤتلف

لقد حل الأنسولين البشري المعاد تركيبه محل الأنسولين المستخرج من مصادر حيوانية (مثل الخنازير والماشية) بالكامل تقريبًا لعلاج مرض السكري من النوع الأول . وهناك مجموعة متنوعة من مستحضرات الأنسولين المعاد تركيبها المختلفة مستخدمة على نطاق واسع. [18] يتم تصنيع الأنسولين المعاد تركيبه عن طريق إدخال جين الأنسولين البشري في الإشريكية القولونية أو الخميرة (Saccharomyces cerevisiae) [19] والتي تنتج بعد ذلك الأنسولين للاستخدام البشري. [20] يتطلب الأنسولين الذي تنتجه الإشريكية القولونية تعديلات أخرى بعد الترجمة (مثل الجليكوزيلة) بينما تتمكن الخميرة من إجراء هذه التعديلات بنفسها بحكم كونها كائنات مضيفة أكثر تعقيدًا. تتمثل ميزة الأنسولين البشري المعاد تركيبه في أنه بعد الاستخدام المزمن لا يطور المرضى دفاعًا مناعيًا ضده بالطريقة التي يحفز بها الأنسولين الحيواني الجهاز المناعي البشري. [21]

الإنسان المؤتلفهرمون النمو(HGH، هرمون النمو)

يتم إعطاؤه للمرضى الذين تنتج غددهم النخامية كميات غير كافية لدعم النمو والتطور الطبيعي. قبل أن يصبح هرمون النمو البشري المؤتلف متاحًا، كان يتم الحصول على هرمون النمو البشري للاستخدام العلاجي من الغدد النخامية للجثث. أدت هذه الممارسة غير الآمنة إلى إصابة بعض المرضى بمرض كروتزفيلد جاكوب . لقد قضى هرمون النمو البشري المؤتلف على هذه المشكلة، ويُستخدم الآن علاجيًا. [22] كما تم إساءة استخدامه كدواء معزز للأداء من قبل الرياضيين وغيرهم. [23] [24]

عامل تخثر الدم المؤتلف الثامن

إنه الشكل المعاد التركيب لعامل الثامن ، وهو بروتين تخثر الدم الذي يُعطى للمرضى المصابين باضطراب النزيف الهيموفيليا ، والذين لا يستطيعون إنتاج عامل الثامن بكميات كافية لدعم تخثر الدم الطبيعي. [25] قبل تطوير عامل الثامن المعاد التركيب، تم الحصول على البروتين عن طريق معالجة كميات كبيرة من الدم البشري من متبرعين متعددين، وهو ما يحمل مخاطر عالية جدًا لانتقال الأمراض المعدية المنقولة بالدم ، على سبيل المثال فيروس نقص المناعة البشرية والتهاب الكبد ب.

لقاح التهاب الكبد الوبائي ب المعاد تركيبه

يمكن السيطرة على عدوى التهاب الكبد الوبائي ب بنجاح من خلال استخدام لقاح التهاب الكبد الوبائي ب المكون من وحدات فرعية معاد التركيب ، والذي يحتوي على شكل من أشكال مستضد سطح فيروس التهاب الكبد الوبائي ب الذي يتم إنتاجه في خلايا الخميرة. كان تطوير لقاح الوحدة الفرعية المعاد تركيبها تطورًا مهمًا وضروريًا لأن فيروس التهاب الكبد الوبائي ب، على عكس الفيروسات الشائعة الأخرى مثل فيروس شلل الأطفال ، لا يمكن زراعته في المختبر . [26]

الأجسام المضادة المؤتلفة

يتم إنتاج الأجسام المضادة المؤتلفة (rAbs) في المختبر عن طريق أنظمة التعبير القائمة على الخلايا الثديية. إن ارتباطها الأحادي بنمط محدد يجعل الأجسام المضادة المؤتلفة مؤهلة ليس فقط لأغراض البحث، ولكن أيضًا كخيارات علاجية ضد أنواع معينة من السرطان والالتهابات وأمراض المناعة الذاتية. [27]

تشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية

تم تطوير كل من الطرق الثلاث المستخدمة على نطاق واسع لتشخيص الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية باستخدام الحمض النووي المؤتلف. يستخدم اختبار الأجسام المضادة ( ELISA أو Western blot ) بروتين فيروس نقص المناعة البشرية المؤتلف لاختبار وجود الأجسام المضادة التي أنتجها الجسم استجابة لعدوى فيروس نقص المناعة البشرية. يبحث اختبار الحمض النووي عن وجود المادة الوراثية لفيروس نقص المناعة البشرية باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR). أصبح تطوير اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي ممكنًا من خلال الاستنساخ الجزيئي وتحليل تسلسل جينومات فيروس نقص المناعة البشرية. صفحة اختبار فيروس نقص المناعة البشرية من مراكز السيطرة على الأمراض والوقاية منها (CDC) الأمريكية

أرز ذهبي

الأرز الذهبي هو نوع من الأرز تم تعديله وراثيًا للتعبير عن الإنزيمات المسؤولة عن تخليق بيتا كاروتين . [14] هذا النوع من الأرز يحمل وعدًا كبيرًا في الحد من حدوث نقص فيتامين أ بين سكان العالم. [28] الأرز الذهبي غير مستخدم حاليًا، في انتظار حل القضايا التنظيمية والملكية الفكرية. [29]

المحاصيل المقاومة لمبيدات الأعشاب

تم تطوير أصناف تجارية من المحاصيل الزراعية الهامة (بما في ذلك فول الصويا والذرة الرفيعة والذرة الرفيعة والكانولا والبرسيم والقطن) والتي تتضمن جينًا معاد التركيب يؤدي إلى مقاومة مبيد الأعشاب جليفوسات (الاسم التجاري Roundup )، ويبسط مكافحة الأعشاب الضارة عن طريق تطبيق الجليفوسات. [30] هذه المحاصيل شائعة الاستخدام التجاري في العديد من البلدان.

المحاصيل المقاومة للحشرات

Bacillus thuringiensis هي بكتيريا تنتج بشكل طبيعي بروتينًا ( سم Bt ) له خصائص مبيدة للحشرات. [28] تم تطبيق البكتيريا على المحاصيل كاستراتيجية لمكافحة الحشرات لسنوات عديدة، وقد تم تبني هذه الممارسة على نطاق واسع في الزراعة والبستنة. في الآونة الأخيرة، تم تطوير نباتات تعبر عن شكل معاد التركيب من البروتين البكتيري، والذي قد يتحكم بشكل فعال في بعض الحشرات المفترسة. لم يتم حلالقضايا البيئية المرتبطة باستخدام هذه المحاصيل المعدلة وراثيًا بشكل كامل. [31]

تاريخ

تم اقتراح فكرة الحمض النووي المؤتلف لأول مرة من قبل بيتر لوبان، وهو طالب دراسات عليا لدى البروفيسور ديل كايزر في قسم الكيمياء الحيوية في كلية الطب بجامعة ستانفورد. [32] ظهرت المنشورات الأولى التي تصف الإنتاج الناجح والتكاثر داخل الخلايا للحمض النووي المؤتلف في عامي 1972 و1973، من جامعة ستانفورد وجامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو . [33] [34] [35] [36] في عام 1980، حصل بول بيرج ، أستاذ في قسم الكيمياء الحيوية في جامعة ستانفورد ومؤلف إحدى الأوراق الأولى [33] على جائزة نوبل في الكيمياء لعمله على الأحماض النووية "مع مراعاة خاصة للحمض النووي المؤتلف". تقاسم فيرنر أربر وهاملتون سميث ودانييل ناثانز جائزة نوبل في الفسيولوجيا أو الطب لعام 1978 لاكتشاف نوكليازات القيد التي عززت تقنيات تكنولوجيا الحمض النووي المؤتلف. [ بحاجة لمصدر ]

تقدمت جامعة ستانفورد بطلب للحصول على براءة اختراع أمريكية على الحمض النووي المؤتلف في 4 نوفمبر 1974، حيث أدرجت المخترعين على أنهم هربرت دبليو بوير (أستاذ في جامعة كاليفورنيا، سان فرانسيسكو ) وستانلي إن كوهين (أستاذ في جامعة ستانفورد )؛ وقد مُنحت براءة الاختراع هذه، US 4,237,224A، في 2 ديسمبر 1980. [37] [38] وكان أول دواء مرخص تم إنتاجه باستخدام تقنية الحمض النووي المؤتلف هو الأنسولين البشري، الذي طورته شركة جينينتيك ورخصته شركة إيلي ليلي . [39]

الجدل

أدرك العلماء المرتبطون بالتطوير الأولي لطرق الحمض النووي المؤتلف أن هناك احتمالية لوجود كائنات حية تحتوي على الحمض النووي المؤتلف لها خصائص غير مرغوب فيها أو خطيرة. في مؤتمر أسيلومار لعام 1975 حول الحمض النووي المؤتلف ، تمت مناقشة هذه المخاوف وتم البدء في فرض وقف طوعي على أبحاث الحمض النووي المؤتلف للتجارب التي اعتبرت محفوفة بالمخاطر بشكل خاص. وقد تم الالتزام بهذا الوقف على نطاق واسع حتى طورت المعاهد الوطنية للصحة في الولايات المتحدة وأصدرت إرشادات رسمية لعمل الحمض النووي المؤتلف. اليوم، لا يُنظر عادةً إلى جزيئات الحمض النووي المؤتلف والبروتينات المؤتلفة على أنها خطيرة. ومع ذلك، لا تزال هناك مخاوف بشأن بعض الكائنات الحية التي تعبر عن الحمض النووي المؤتلف، وخاصة عندما تغادر المختبر ويتم إدخالها إلى البيئة أو سلسلة الغذاء. تمت مناقشة هذه المخاوف في المقالات حول الكائنات المعدلة وراثيًا والجدل حول الأغذية المعدلة وراثيًا . علاوة على ذلك، هناك مخاوف بشأن المنتجات الثانوية في إنتاج المستحضرات الصيدلانية الحيوية، حيث ينتج الحمض النووي المؤتلف منتجات بروتينية محددة. يأتي المنتج الثانوي الرئيسي، المسمى بروتين الخلية المضيفة ، من نظام التعبير عن الخلية المضيفة ويشكل تهديدًا لصحة المريض والبيئة بشكل عام. [40] [41]

انظر أيضا

مراجع

  1. ^ روزانو ، جيرمان إل. سيكاريلي ، إدواردو أ. (17/04/2014). "تعبير البروتين المؤتلف في الإشريكية القولونية: التقدم والتحديات". الحدود في علم الأحياء الدقيقة . 5 : 172. دوى : 10.3389/fmicb.2014.00172 . ISSN  1664-302X. بمك  4029002 . بميد  24860555.
  2. ^ "المحفزات المستخدمة لتنظيم التعبير الجيني". www.cambia.org . مؤرشف من الأصل في 24 سبتمبر 2018 . تم الاسترجاع 16 فبراير 2018 .
  3. ^ كامبل، نيل أ. وريس، جين ب.. (2002). علم الأحياء (الطبعة السادسة) . سان فرانسيسكو: أديسون ويسلي. ص 375-401. رقم ISBN 978-0-201-75054-6.
  4. ^ abc بيتر والتر؛ ألبرتس، بروس؛ جونسون، ألكسندر س؛ لويس، جوليان؛ راف، مارتن س؛ روبرتس، كيث (2008). علم الأحياء الجزيئي للخلية (الطبعة الخامسة، النسخة الموسعة) . نيويورك: جارلاند ساينس. ISBN 978-0-8153-4111-6.الطبعة الرابعة متاحة عبر الإنترنت من خلال مكتبة NCBI: الرابط
  5. ^ بيرج، جيريمي مارك؛ تيموكزكو، جون إل؛ ستراير، لوبيرت (2010). الكيمياء الحيوية، الطبعة السابعة. (الكيمياء الحيوية (بيرج)) . دبليو إتش فريمان آند كومباني. رقم ISBN 978-1-4292-2936-4.الطبعة الخامسة متاحة عبر الإنترنت من خلال مكتبة NCBI: الرابط
  6. ^ ab Watson, James D. (2007). Recombinant DNA: Genes and Genomes: A Short Course . سان فرانسيسكو: WH Freeman. ISBN 978-0-7167-2866-5.
  7. ^ راسل، ديفيد دبليو؛ سامبروك، جوزيف (2001). الاستنساخ الجزيئي: دليل مختبري . كولد سبرينج هاربور، نيويورك: مختبر كولد سبرينج هاربور. رقم ISBN 978-0-87969-576-7.
  8. ^ إيبرلي، كريستيان (ديسمبر 2022). "تقنية الحمض النووي المؤتلف – الخطوات والأساليب والأمثلة" . تم الاسترجاع في 18 يوليو 2023 .
  9. ^ هانيج، جي؛ ماكريدس، إس. (1998). "استراتيجيات لتحسين التعبير البروتيني غير المتجانس في الإشريكية القولونية". الاتجاهات في التكنولوجيا الحيوية . 16 (2): 54-60. doi :10.1016/S0167-7799(97)01155-4. PMID  9487731.
  10. ^ محمودي جوماري، محمد؛ سرايغورد أفشاري، نيدا؛ فارسيمادان، مرزية؛ رستامي، نيدا؛ أغاميري، شاهين؛ فرج اللهية، محمد م. (1 ديسمبر 2020). "فرص وتحديات تقنيات تنقية البروتين بمساعدة الوسم: التطبيقات في صناعة الأدوية". التطورات التكنولوجية الحيوية . 45 : 107653. doi :10.1016/j.biotechadv.2020.107653. ISSN  0734-9750. PMID  33157154. S2CID  226276355.
  11. ^ برونديك، دبليو إتش (2009). "الفصل 11 اختيار طريقة مناسبة للتعبير عن بروتين معاد التركيب". دليل تنقية البروتين، الطبعة الثانية . طرق في علم الإنزيمات. المجلد 463. ص 131-147. doi :10.1016/S0076-6879(09)63011-1. ISBN 9780123745361. PMID  19892171.
  12. ^ أورتيجا، كلوديا؛ برييتو، دانييل؛ أبريو، سيسيليا؛ أوبيزو، بابلو خافيير؛ كوريا، أغوستين (2018). "مجموعة ناقلات متعددة المقصورات ومتعددة المضيفين للتعبير عن البروتين المؤتلف وتنقيته". Frontiers in Microbiology . 9 : 1384. doi : 10.3389/fmicb.2018.01384 . ISSN  1664-302X. PMC 6030378. PMID 29997597  . 
  13. ^ abc Brown, Terry (2006). Gene Cloning and DNA Analysis: an Introduction . Cambridge, MA: Blackwell Pub. ISBN 978-1-4051-1121-8.
  14. ^ ab Ye, X.; Al-Babili, S.; Klöti, A.; Zhang, J.; Lucca, P.; Beyer, P.; Potrykus, I. (2000). "هندسة مسار التخليق الحيوي لبروفيتامين أ (بيتا كاروتين) في بذرة الأرز (الخالية من الكاروتينات)." Science . 287 (5451): 303–305. Bibcode :2000Sci...287..303Y. doi :10.1126/science.287.5451.303. PMID  10634784. S2CID  40258379.
  15. ^ كولر، بي إتش؛ سميثيز، أو. (1992). "تعديل الجينات في الحيوانات عن طريق استهداف الجينات". المراجعة السنوية لعلم المناعة . 10 : 705-730. doi :10.1146/annurev.iy.10.040192.003421. PMID  1591000.
  16. ^ "كيموسين - نظرة عامة | مواضيع ScienceDirect". مؤرشف من الأصل في 2023-12-10 . تم الاسترجاع 2023-12-10 .رابط للنشر الأصلي
  17. ^ دونا يو. فوجت وميكي باريش. (1999) التكنولوجيا الحيوية الغذائية في الولايات المتحدة: العلم والتنظيم والقضايا
  18. ^ Gualandi-Signorini, A.; Giorgi, G. (2001). "Insulin formulas--a review". European Review for Medical and Pharmacological Sciences . 5 (3): 73–83. PMID  12004916.
  19. ^ #الأنسولين الأسبارت
  20. ^ "الأنسولين البشري". go.drugbank.com . تم الاسترجاع في 2023-12-10 .
  21. ^ ميلز، جوشوا (2022-05-16). "تقنية إعادة التركيب البيولوجي لـ HSC: إنتاج الأنسولين". Edzion . تم الاسترجاع في 2022-12-26 .
  22. ^ فون فانج، ت.؛ ماكديارميد، ت.؛ ماكلر، ل.؛ زولتور، أ. (2008). "الاستفسارات السريرية: هل يمكن لهرمون النمو المؤتلف علاج قصر القامة مجهول السبب بشكل فعال؟". مجلة الممارسة العائلية . 57 (9): 611-612. PMID  18786336.
  23. ^ فرنانديز، م.؛ هوزي، ر. (2009). "العقاقير المعززة للأداء تصيب غير الرياضيين أيضًا". مجلة الممارسة العائلية . 58 (1): 16-23. PMID  19141266.
  24. ^ "Somatotropin". go.drugbank.com . تم الاسترجاع في 2023-12-10 .
  25. ^ مانكو جونسون، إم جيه (2010). "التطورات في رعاية وعلاج الأطفال المصابين بالهيموفيليا". التقدم في طب الأطفال . 57 (1): 287-294. doi :10.1016/j.yapd.2010.08.007. PMID  21056743.
  26. ^ "معلومات عن لقاح التهاب الكبد الوبائي ب من مؤسسة التهاب الكبد الوبائي ب". 2011-06-28. مؤرشف من الأصل في 2011-06-28 . تم الاسترجاع 2023-12-10 .
  27. ^ نارانج، آرتي (2022). "الأجسام المضادة المؤتلفة: المستوى التالي في تكنولوجيا الأجسام المضادة".
  28. ^ ab Paine, JA; Shipton, CA; Chaggar, S.; Howells, RM; Kennedy, MJ; Vernon, G.; Wright, SY; Hinchliffe, E.; Adams, JL; Silverstone, AL; Drake, R. (2005). "تحسين القيمة الغذائية للأرز الذهبي من خلال زيادة محتوى فيتامين أ". Nature Biotechnology . 23 (4): 482–487. doi :10.1038/nbt1082. PMID  15793573. S2CID  632005.
  29. ^ DHNS. "مجموعة أجنبية تشجع "الأرز الذهبي" في الهند". Deccan Herald . تم الاسترجاع في 2023-12-10 .
  30. ^ Funke, T.; Han, H.; Healy-Fried, M.; Fischer, M.; Schönbrunn, E. (2006). "الأساس الجزيئي لمقاومة مبيدات الأعشاب لمحاصيل Roundup Ready". وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم . 103 (35): 13010–13015. Bibcode :2006PNAS..10313010F. doi : 10.1073/pnas.0603638103 . PMC 1559744. PMID  16916934 . 
  31. ^ Mendelsohn, M.; Kough, J.; Vaituzis, Z.; Matthews, K. (2003). "هل محاصيل Bt آمنة؟". Nature Biotechnology . 21 (9): 1003–1009. doi :10.1038/nbt0903-1003. PMID  12949561. S2CID  16392889.
  32. ^ Lear, J. (1978). الحمض النووي المؤتلف: القصة غير المروية . نيويورك: دار كراون للنشر. ص 43.
  33. ^ ab Jackson, D.; Symons, R.; Berg, P. (1972). "الطريقة الكيميائية الحيوية لإدخال معلومات وراثية جديدة في الحمض النووي لفيروس القردة 40: جزيئات الحمض النووي الدائرية SV40 التي تحتوي على جينات فاج لامدا وأوبرون الجلاكتوز لـ Escherichia coli". وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 69 (10): 2904-2909. رمز Bibcode : 1972PNAS...69.2904J. doi : 10.1073/pnas.69.10.2904 . PMC 389671. PMID  4342968 . 
  34. ^ ميرتز، جيه إي؛ ديفيس، آر دبليو (1972). "انقسام الحمض النووي بواسطة إنزيم تقييد R1 يُنتج نهايات متماسكة". وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 69 (11): 3370–4. رمز Bibcode :1972PNAS...69.3370M. doi : 10.1073/pnas.69.11.3370 . PMC 389773. PMID  4343968. 
  35. ^ Lobban, P.; Kaiser, A. (1973). "الربط الأنزيمي من طرف إلى طرف لجزيئات الحمض النووي". مجلة علم الأحياء الجزيئي . 78 (3): 453–471. doi :10.1016/0022-2836(73)90468-3. PMID  4754844.
  36. ^ Cohen, S.; Chang, A.; Boyer, H.; Helling, R. (1973). "إنشاء البلازميدات البكتيرية الوظيفية بيولوجيًا في المختبر". وقائع الأكاديمية الوطنية للعلوم في الولايات المتحدة الأمريكية . 70 (11): 3240–3244. Bibcode :1973PNAS...70.3240C. doi : 10.1073 /pnas.70.11.3240 . PMC 427208. PMID  4594039. 
  37. ^ "عملية إنتاج كائنات هجينة جزيئية وظيفية بيولوجيًا"، تم الاسترجاع من براءة اختراع جوجل
  38. ^ هيوز، س. (2001). "صنع الدولارات من الحمض النووي. أول براءة اختراع كبرى في التكنولوجيا الحيوية وتسويق علم الأحياء الجزيئي، 1974-1980". إيزيس؛ مراجعة دولية مخصصة لتاريخ العلوم وتأثيراتها الثقافية . 92 (3): 541-575. doi :10.1086/385281. hdl : 10161/8125 . PMID  11810894. S2CID  22823711. مؤرشف من الأصل (PDF) في 2021-02-14 . تم الاسترجاع 2019-09-05 .
  39. ^ جونسون، إس (1983). "الأنسولين البشري من تقنية الحمض النووي المؤتلف". مجلة العلوم . 219 (4585): 632-637. رمز Bibcode :1983Sci...219..632J. doi :10.1126/science.6337396. PMID  6337396.
  40. ^ وانج، شينغ؛ هانتر، آلان ك.؛ موزير، نيد م. (2009-06-15). "بروتينات الخلايا المضيفة في تطوير المواد البيولوجية: التعريف والقياس الكمي وتقييم المخاطر". التكنولوجيا الحيوية والهندسة الحيوية . 103 (3): 446-458. doi : 10.1002/bit.22304 . ISSN  0006-3592. PMID  19388135. S2CID  22707536.
  41. ^ بريسويل، دانيال جي؛ فرانسيس، ريتشارد؛ سماليس، سي مارك (2015-07-14). "مستقبل تحديد بروتينات الخلايا المضيفة (HCP) أثناء تطوير العملية والتصنيع المرتبط بإدارة قائمة على المخاطر للسيطرة عليها". التكنولوجيا الحيوية والهندسة الحيوية . 112 (9): 1727-1737. doi :10.1002/bit.25628. ISSN  0006-3592. PMC 4973824. PMID 25998019  . 

قراءة إضافية

  • اليوم الثامن للخلق: صناع الثورة في علم الأحياء . Touchstone Books، ISBN 0-671-22540-5 . الطبعة الثانية: Cold Spring Harbor Laboratory Press، 1996 غلاف ورقي: ISBN 0-87969-478-5 .  
  • ميكلاس، ديفيد. 2003. علم الحمض النووي: دورة أولى . دار نشر كولد سبرينج هاربور: ISBN 978-0-87969-636-8 . 
  • راسموسن، نيكولاس ، جين جوكيز: علوم الحياة وصعود المشاريع التكنولوجية الحيوية، مطبعة جامعة جونز هوبكنز، (بالتيمور)، 2014. ISBN 978-1-42141-340-2 . 
  • روزنفيلد، إسرائيل. 2010. الحمض النووي: دليل مصور للجزيء الذي هز العالم . مطبعة جامعة كولومبيا: ISBN 978-0-231-14271-7 . 
  • شولتز، مارك وزاندر كانون. 2009. مادة الحياة: دليل مصور لعلم الوراثة والحمض النووي . هيل ووانج: ISBN 0-8090-8947-5 . 
  • واتسون، جيمس. 2004. الحمض النووي: سر الحياة . دار راندوم هاوس: ISBN 978-0-09-945184-6 . 
مصادر المكتبة حول
البروتينات المعاد تركيبها
  • الموارد الموجودة في مكتبتك
  • الموارد في المكتبات الأخرى
  • ورقة حقائق حول الحمض النووي المؤتلف (من جامعة نيو هامبشاير)
  • البلازميدات في الخميرة (ورقة حقائق من جامعة ولاية سان دييغو)
  • رسوم متحركة توضح عملية بناء الحمض النووي المؤتلف وإنتاج البروتين الغريب بواسطة البكتيريا المؤتلفة محفوظ في 2012-03-28 على موقع Wayback Machine
  • بحث الحمض النووي المؤتلف في جامعة كاليفورنيا في سان فرانسيسكو والتطبيق التجاري في شركة جينينتيك نص منقح لمقابلة أجريت عام 1994 مع هربرت دبليو بوير، مشروع التاريخ الحي. التاريخ الشفوي.
  • دليل مبادئ وطرق تنقية البروتين المؤتلف محفوظ في 2008-12-05 على موقع Wayback Machine
  • معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا، برنامج التاريخ الشفوي، مجموعة التاريخ الشفوي حول الجدل حول الحمض النووي المؤتلف، MC-0100. معهد ماساتشوستس للتكنولوجيا، قسم المجموعات المميزة، كامبريدج، ماساتشوستس
تم الاسترجاع من "https://en.wikipedia.org/w/index.php?title=DNA_Recombinant&oldid=1257541532"
Original text
Rate this translation
Your feedback will be used to help improve Google Translate